FDA aktualisiert die BAM-Methode für Cronobacter (Ausgabe September 2026): Sekundäranreicherung in CSB-Bouillon für Säuglingsanfangsnahrung in Pulverform, ein Verfahren für Umgebungsproben und eine neue qPCR-Sonde
Die US-amerikanische Food and Drug Administration (FDA) hat die Ausgabe vom September 2026 von Kapitel 29 des Bacteriological Analytical Manual (BAM) veröffentlicht — der Methode zum Nachweis und zur Isolierung von Cronobacter spp. in Säuglingsanfangsnahrung in Pulverform (PIF) und in Umgebungsproben. Die Methodenseite hat den Stand vom 16. September 2026; die vorherige Ausgabe des Kapitels stammte vom November 2023.
- Anreicherung: Die Zahl der zentrifugierten Aliquote der Anreicherungskultur wurde von drei auf eines reduziert. Als gleichwertiges Vorgehen für PIF kam eine Sekundäranreicherung mit entsprechender DNA-Extraktion hinzu — 0,1 ml der Kultur in gepuffertem Peptonwasser (BPW) werden in 10 ml CSB-Bouillon überführt und 24 ± 2 h bei 41,5 ± 1 °C bebrütet. Laut FDA erleichtert die Sekundäranreicherung in CSB die Isolierung von Cronobacter aus Proben mit hoher Begleitflora, und die qPCR nach der zweistufigen BPW–CSB-Anreicherung liefert das Ergebnis einen Tag später als die qPCR direkt nach BPW-Anreicherung und Zentrifugation.
- Neu sind Verfahren zur Anreicherung, zum qPCR-Screening und zur kulturellen Bestätigung für Umgebungsproben (ein Tupfer in 9 ml BPW, ein Schwamm in 90 ml BPW). Die qPCR, deren Ziel ein Abschnitt des Operons für die Makromolekülsynthese vom 3′-Ende des rpsU-Gens bis zum 5′-Ende des dnaG-Gens ist, erhielt eine bevorzugte doppelt gequenchte Cronobacter-Sonde, ein gleichwertiges Vorgehen zur Herstellung der internen Amplifikationskontrolle und eine höhere Annealing-Temperatur.
- Aktualisiert wurden die erforderlichen und optionalen chromogenen Agarmedien — im Analyseschema der Ausgabe 2026 DFI-Agar (36 ± 1 °C), CCI-Agar und R&F-Agar (41,5 ± 1 °C), optional ESIA-Agar (44 ± 1 °C) und R&F-Agar bei 36 ± 1 °C, jeweils 24 ± 2 h — sowie die Inklusivitäts- und Exklusivitätstabellen: Die Methode wurde an 50 Cronobacter-Stämmen aus sieben Arten und an 40 Stämmen von 34 Nicht-Cronobacter-Arten geprüft.
- Die Methode kombiniert ein Real-Time-PCR-Screening mit einem kulturellen Teil, der auch allein, ohne qPCR, angewendet werden kann; ein positives qPCR-Ergebnis wird stets kulturell bestätigt. Reinkulturen werden mit qPCR und VITEK 2 oder allein mit qPCR bestätigt. Die Ausgabe vom November 2023 hatte unter anderem die Verwendung des SmartCycler für die qPCR und die Option, RAPID ID 32E zur kulturellen Bestätigung zu verwenden, gestrichen und optionale CCI- und ESIA-Agarmedien aufgenommen.