🍎 食品中的维生素 C（L-抗坏血酸）——Tillmans 滴定法（2,6-二氯酚靛酚）用于无色和浅色产品，以及用二甲苯萃取过量染料的分光光度法用于深色产品；PN-A-04019

食品化学 PN-A-04019

概述

本标准的内容。PKN 目录卡片上的范围，全文：“按产品着色程度给出两种测定食品中维生素 C 含量的方法。对无色和浅色产品给出 Tillmans 滴定法，对深色产品给出分光光度法。规定了各类食品试样的检测制备方法”。根据 A. Mazurek 和 M. Włodarczyk-Stasiak 的文章（卢布林生命科学大学，2013），两种方法都使用 2,6-二氯酚靛酚：在分光光度法中，抗坏血酸在酸性介质中被过量染料定量氧化为脱氢抗坏血酸，过量染料用二甲苯萃取，并在波长 500 nm 处用分光光度法测定。我们未读 PN-A-04019 标准本身的文本。

状态（PKN 卡片状态，08.11.2026）。PN-A-04019:1998（波兰文版）卡片无撤销标记——本标准现行有效：发布于 18-02-1998，6 页，价格组 C，食品、农业和林业部门，KT 200 浓缩食品、淀粉和膳食产品技术委员会，ICS 67.050；标题 „Produkty spożywcze -- Oznaczanie zawartości witaminy C”（食品——维生素 C 含量的测定）。“替代：PN-A-75101-11:1990——波兰文版，PN-A-86030:1978——波兰文版，PN-R-87020:1992——波兰文版，PN-A-79033:1985——波兰文版”。卡片没有 “Wprowadza”（采用）栏——未指明本标准所转化的 ISO 或 EN 文件。在 PKN 目录中检索 “PN-A-04019” 只得到这一张卡片——目录中没有其他版本或外文版本。2013 年的文章称，本标准是在 ISO 6557/2:1984 的基础上制定的；我们未将波兰标准文本与 ISO 文本进行比较。ISO 页面（读取于 08.11.2026）：ISO 6557-2:1984 “Fruits, vegetables and derived products — Determination of ascorbic acid content — Part 2: Routine methods”——已发布，第 1 版，1984-11，4 页，ISO/TC 34/SC 3，ICS 67.080.01，阶段 90.93；最近一次于 2023 年复审并确认，该版本为现行版本。

依据 ISO 6557-2:1984 原文——据文章所述本标准所依据的文件（法文全文；不是 PN-A-04019 的文本）。ISO 范围：水果、蔬菜及其制品——方法 A，用 2,6-二氯酚靛酚滴定，仅在不存在某些干扰物质时才可使用（2.6）；方法 B，用同一染料经二甲苯萃取后进行分光光度测定，用于溶液颜色深的制品。方法 A（第 2 章）：用 2 %（m/m）草酸溶液或偏磷酸-乙酸溶液（15 g 偏磷酸溶于 40 ml 冰乙酸和 200 ml 水，定容至 500 ml；冰箱中可用 7–10 天）从试样中提取抗坏血酸，用染料溶液滴定至鲑粉色。染料溶液保存在棕色瓶中、置于冰箱内，由于染料会随时间分解，需定期配制新鲜溶液；抗坏血酸标准溶液 1 g/l（称取 50 mg，精确至 0.01 mg，置于 50 ml 容量瓶中，用提取溶液定容）。制备：去除果核和籽腔，充分混匀，过滤；冷冻产品在密闭容器中解冻，混匀前加入流出的液体。称样量 10–100 g（文中：称准至 0.1 mg）；提取溶液的体积（以毫升计）在数值上为称样质量（以克计）的 1 至 5 倍；过滤，弃去最初几毫升；试验溶液中抗坏血酸的最终浓度为 0.1–1 mg/ml。染料标定：5 ml 标准溶液加 5 ml 提取溶液，快速滴定至鲑粉色并保持至少 5 s，共三次，读数精确至 0.1 ml；用 5 ml 提取溶液做空白试验；扣除空白试验结果，滴定度以 1.0 ml 染料相当的抗坏血酸毫克数表示。测定：取三份滤液，每份含约 2 mg 抗坏血酸，快速滴定至同一终点；用相同体积的提取溶液做空白试验；同一试样进行三次测定。结果以每 100 g 产品的 mg 数表示 = (V0 − V1) × m1 / m0 × 100，其中 m0——滴定用份中的试样质量（g），m1——染料滴定度（每 1.0 ml 相当的抗坏血酸 mg 数），V0 和 V1——试样和空白试验消耗的染料体积（ml）；结果为三次测定的平均值。干扰物质（2.6）：铁、铜、锡、还原酮、巯基化合物、亚硫酸盐和二氧化硫；还原酮尤其存在于过度加热或长期储存的产品中。检查：向 10 ml 等体积试验溶液与提取溶液的混合液中加入 2 滴 0.05 % 亚甲蓝溶液——5–10 s 内褪色表明存在干扰物质；锡不能用这种方法检出——检锡时向 10 ml 试验溶液加 10 ml 1 + 3 稀盐酸后加入 5 滴 0.05 % 靛胭脂溶液。方法 B（第 3 章）：同样的提取溶液，试验溶液 0.05–0.5 mg/ml；pH 4 的乙酸盐缓冲液（300 g 无水乙酸钠、700 ml 水和 1000 ml 冰乙酸）；检查二甲苯的纯度（与已褪色的染料振摇后，10 min 后二甲苯层不得着色，否则需蒸馏二甲苯）。在 25 ml 带玻璃塞的离心管中：1–5 ml 试验溶液，等体积缓冲液，立即加入过量染料，混匀，加 10 ml 二甲苯，剧烈振摇 6–10 s，离心，将二甲苯层移入比色皿，在 500 nm 处测吸光度；空白——纯二甲苯的吸光度。标准曲线：四支试管，分别加 0.2、0.4、0.6 和 0.8 ml 染料。结果用同一公式计算，其中 V0——加入的染料体积，V1——由标准曲线读得的过量染料体积；两次测定，其差值不得超过平均值的 3 %（3.6）。修正（3.7）：有色素转入二甲苯时——用对苯二酚修正（加入对苯二酚溶液后测第二次吸光度，从第一次中减去）；对于长期加热或储存的产品，某些情况下也包括天然产品（如黑醋栗汁）——用 40 % 甲醛做对照试验，校正与抗坏血酸无关的还原物质的作用。试验报告（第 4 章）：方法、结果、标准以外的或可选的操作以及可能影响结果的情况、试样识别信息。

科学文献对本标准的论述（Mazurek、Włodarczyk-Stasiak，Current Issues in Pharmacy and Medical Sciences 26(4)，2013，第 443–447 页）。PN-A-04019:1998 不能测定维生素 C 的总含量（抗坏血酸与脱氢抗坏血酸之和），只能测定抗坏血酸，因为脱氢抗坏血酸不与 2,6-二氯酚靛酚反应；试样中存在的其他还原物质会还原染料，使结果偏高。在认证值为 483 mg/100 g（两种酸之和）的标准物质 BCR-431 中，按本标准的分光光度法得到 438 mg/100 g——差异具有统计学显著性——而 HPLC 法得到抗坏血酸 403.8 mg/100 g 和脱氢抗坏血酸 73.8 mg/100 g：因此本标准的结果低于维生素 C 总量，而高于单独的抗坏血酸。在苹果汁、葡萄柚汁和黑醋栗果肉饮料中，两种方法的结果差异显著，只有在橙汁中一致；作者记录到的最大差异出现在黑醋栗果肉饮料中。据文章所述，忽略脱氢抗坏血酸会造成较大误差，尤其是在储存的水果和蔬菜中，这类产品中该酸的比例会增加。文章还指出，CEN 于 2010 年撤销了 EN 14130:2003 标准（HPLC 法测定维生素 C），且无替代标准——与 PKN 卡片 PN-EN 14130:2004 一致（21-11-2010 撤销，未指明后续标准；读取于 08.11.2026）。

实验室数量及形式（认可范围数据库副本，读取于 08.11.2026；labcoda.pl 上的“实验室”标签页，08.11.2026；PCA 网站上的现行认可范围文件，读取于 08.11.2026）。编号 A-04019 出现在 6 家波兰实验室的 8 个项目中：AB 285、AB 311、AB 452、AB 705（各 1 个）以及 AB 486 和 AB 552（各 2 个）；其他国家的实验室没有该编号。按项目的所有字段和编号的所有写法计数；本集合不包括带编号 R-04019 的 16 个项目——这是另一项标准，即关于土壤中有效锰的 PN-R-04019。写法：不带条号的 “PN-A-04019:1998”（AB 285、AB 552——2 个）、“PN-A-04019:1998 pkt. 2”（AB 311）、“PN-A-04019:1998, pkt. 2”（AB 452）、“PN-A-04019:1998 pkt. 2.”（AB 486——2 个）、“PN-A-04019:1998 p. 2”（AB 705）。全部 8 个项目以相同表述列于 PCA 现行认可范围文件中：AB 285——第 28 版，13.01.2026，AB 311——第 27 版，11.06.2026，AB 452——第 25 版，30.10.2025，AB 486——第 29 版，23.07.2026，AB 552——第 26 版，21.08.2026，AB 705——第 21 版，06.05.2026。“实验室”标签页（“PN-A-04019”）显示同样的 6 家实验室，项目数相同（8）（labcoda.pl 上的标签页查询，08.11.2026）。

实验室检测什么（数据库副本，完整项目——8 个）。滴定法——5 家实验室的 7 个项目：AB 311——食品：无酒精饮料、果汁、糖果、浓缩食品、谷物制品、膳食补充剂、特殊营养用途食品，(5.0–100000) mg/100 g；AB 486——颜色浅的食品：无酒精饮料、糖果、浓缩食品，(2.5–2500) mg/100 g 或 100 ml，以及颜色浅的膳食补充剂，(15–100000) mg/100 g 或 100 ml；AB 552——乳和乳制品、谷粒和谷物面粉制品、糖果和糕点制品、水果、蔬菜、蘑菇及其制品（包括蔬菜肉类制品）、无酒精饮料、浓缩食品、咖啡、茶、可可、水果茶和草本茶、特殊营养用途食品，(1.2–500) mg/100 g 和 mg/100 ml，以及膳食补充剂，(1.2–100000) mg/100 g 和 mg/100 ml；AB 705——果汁、果肉饮料和无酒精饮料，(0.3–44.0) mg/100 g；AB 452——果汁、果肉饮料、饮料、糖浆、水果泥、蔬菜泥和果蔬泥，“以 L-抗坏血酸计”，(1–130) mg/100 g，采用电位滴定法。分光光度法——1 个项目：AB 285——果蔬制品，抗坏血酸（维生素 C），(8.9–315.0) mg/100 g 或 mg/100 ml。四家采用滴定法的实验室引用本标准第 2 条；AB 285（分光光度法）和 AB 552 引用本标准时不注条号。波兰标准第 2 条描述的是哪种方法，我们未核查——在 ISO 6557-2 中，第 2 章为滴定法。

与本标准并列的文件。副本中检测特性名称涉及维生素 C 或抗坏血酸的项目共 28 个，分布于 19 家波兰实验室（读取于 08.11.2026）。除这 8 个外：PN-EN 14130:2004（HPLC）——7 家实验室的 10 个项目，尽管根据 PKN 卡片该标准自 21-11-2010 起已撤销且无后续标准（在知识库中有单独条目）；其余 10 个——实验室自有的液相色谱程序、IŻŻ（食品与营养研究所）出版社 1997 年的方法（滴定法），以及灵活认可范围中的一般写法 “Normy”（标准）或 “Normy/procedury”（标准/程序）。三家实验室两种途径都有：AB 452 除 PN-A-04019 外还有 HPLC 程序，其中维生素 C 为“L(+)-抗坏血酸与脱氢抗坏血酸之和”，AB 486——液相色谱程序，AB 552——PN-EN 14130:2004。

容易得到表面正确结果的地方。测量对象：本标准的结果是 L-抗坏血酸，而不是维生素 C 总量——脱氢抗坏血酸不与染料反应（2013 年的文章）；在储存的产品中其比例会增加，因此按本标准得到的“维生素 C”结果可能明显低于测定两种酸之和的方法的结果（例如 AB 452 的程序）。依据 PN-A-04019 的结果与总和法的结果不可互换，尽管两者在认可范围中都称为“维生素 C 含量”。方法选择：根据卡片，滴定法用于无色和浅色产品；AB 486 写有“颜色浅的”这一条件，而 AB 552 对咖啡、茶、可可和花草茶也采用滴定法——实验室如何评估颜色，从认可范围中看不出。测量：还原物质（在 ISO 6557-2 中：过度加热或长期储存产品中的还原酮、巯基化合物、亚硫酸盐、二氧化硫、铁、铜、锡）会像抗坏血酸一样使染料褪色，使结果偏高——在标准物质 BCR-431 中，分光光度法的结果高于单独的抗坏血酸含量；ISO 规定用亚甲蓝和靛胭脂进行检查，并用对苯二酚和甲醛进行修正——波兰标准是否以及如何规定这些，我们未读。稀释：滴定用溶液的抗坏血酸含量应为 0.1–1 mg/ml（ISO 6557-2）——对于范围高达 100000 mg/100 g（即每 100 g 中高达 100 g）的膳食补充剂，这需要多次稀释，稀释系数的任何误差都会直接传入结果。计算：染料滴定度 m1 是本方法的测量结果——用标准溶液标定，并扣除空白试验（ISO 2.4.3.2）；染料会分解，因此使用另一天或旧溶液的滴定度，会使所有试样的结果偏移同一因子。ISO 6557-2 只给出每 100 g 产品的 mg 数；部分认可范围还给出每 100 ml 的 mg 数——对这样的结果需要知道是量取体积还是称量试样，而 ISO 未给出换算方法。

我们未提供的内容。我们未读 PN-A-04019:1998 的文本：我们不提供其条款编号、“各类食品”试样的制备方法（卡片只说明标准中有此内容）、试剂浓度、公式、精密度数据，以及与 ISO 6557-2 的差异——上文给出的步骤来自 ISO 6557-2:1984，并已如此标明。我们也不从 ISO 中给出染料溶液的浓度——在所读文本中，每 200 ml 中染料盐质量的写法我们无法用第二来源证实。我们未读 ISO 6557-1（仲裁方法），也未核查其状态。被 PN-A-04019 替代的标准（PN-A-75101-11:1990、PN-A-86030:1978、PN-R-87020:1992、PN-A-79033:1985）的卡片状态我们未单独读取——我们只知道 PN-A-04019 卡片将其列为被替代标准。我们未核查法规对本标准的引用。我们未查阅副本以外实验室的 PCA 现行认可范围文件。

方法原理

L-抗坏血酸还原（使褪色）2,6-二氯酚靛酚。在 Tillmans 滴定法中，试样在酸性溶液中的提取液用已标定的染料溶液滴定至持久的粉红色；在分光光度法中，加入过量染料，将过量部分转入二甲苯，在 500 nm 处测定，并由标准曲线读出染料消耗量。结果——每 100 g 产品中抗坏血酸的 mg 数；不测定脱氢抗坏血酸（PKN 卡片；Mazurek 和 Włodarczyk-Stasiak 2013 年的文章；步骤——ISO 6557-2:1984，第 2–3 章，不是波兰标准文本）。

应用领域

• 无色和浅色食品——Tillmans 滴定法（PKN 卡片）
• 深色食品——用二甲苯萃取过量染料的分光光度法，500 nm（PKN 卡片；2013 年的文章）
• 结果：L-抗坏血酸含量，mg/100 g（认可范围中也有 mg/100 ml）——不含脱氢抗坏血酸
• 认可范围中：6 家波兰实验室——果汁、果肉饮料、饮料、果蔬制品、糖果、浓缩食品、谷物制品、乳和乳制品、膳食补充剂、特殊营养用途食品

关键参数

标准

标准编号

PN-A-04019:1998（波兰文版）

标准名称（波兰语）

Produkty spożywcze — Oznaczanie zawartości witaminy C

标准名称（英语）

Foodstuffs — Determination of vitamin C content

分步操作程序

1. 方法选择

   无色或浅色产品——滴定法；深色产品——分光光度法（PKN 卡片）。怀疑存在干扰物质时——用亚甲蓝和靛胭脂检查（ISO 6557-2，2.6）。

2. 试样制备和提取

   去除果核，混匀（冷冻产品在密闭容器中连同流出液体一起解冻）；10–100 g 试样与提取溶液按 1:1 至 1:5 的比例混合；过滤，弃去最初几毫升；溶液 0.1–1 mg/ml（滴定）或 0.05–0.5 mg/ml（分光光度）（ISO 6557-2，2.4.1–2.4.3.1、3.4.3.1）。

3. 染料标定

   5 ml 标准溶液加 5 ml 提取溶液，快速滴定至鲑粉色并保持至少 5 s，共三次；空白试验；滴定度 m1 以每 1.0 ml 染料相当的抗坏血酸 mg 数表示（ISO 6557-2，2.4.3.2）。

4. 测定

   滴定：三份滤液，每份约含 2 mg 抗坏血酸，空白试验（ISO 6557-2，2.4.3.3–2.4.5）。分光光度：1–5 ml 溶液 + pH 4 缓冲液 + 过量染料 + 10 ml 二甲苯，振摇 6–10 s，离心，在 500 nm 处测二甲苯层吸光度，用 0.2–0.8 ml 染料制作标准曲线，两次测定；必要时用对苯二酚修正或做甲醛试验（ISO 6557-2，3.4.3.3–3.4.6、3.7）。

5. 计算和结果

   mg/100 g = (V0 − V1) × m1 / m0 × 100，取测定平均值；分光光度法两次测定之差 ≤ 平均值的 3 %；报告中写明方法和偏离（ISO 6557-2，2.5、3.5–3.6、第 4 章）。PN-A-04019:1998——现行有效（PKN 卡片状态，08.11.2026；波兰文版）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 二甲苯在高浓度下有麻醉作用——所有涉及二甲苯的操作均在通风橱内进行（ISO 6557-2，3.2.5 中的警告）
• 修正和配制溶液时使用的 40 % 甲醛、草酸、冰乙酸和盐酸——戴手套、护目镜，在通风橱内操作（一般原则；我们未读波兰标准文本）
• 技术提示：结果只包括 L-抗坏血酸——与测定抗坏血酸和脱氢抗坏血酸之和的方法的结果不可互换（2013 年的文章）

常见问题