🍎 动植物油脂（不含蜡）中不皂化物含量——约5 g样品用50 ml约1 mol/l乙醇氢氧化钾回流皂化1 h，用正己烷（或40–60 °C石油醚）每次50 ml萃取三次，用10 %乙醇洗涤萃取液至加酚酞不显色，蒸发，残留物在103 °C下每次干燥15 min直至质量差小于1.5 mg，空白 ≤ 1.5 mg，可选游离脂肪酸校正（0.28·V·c）；结果以质量百分数表示，取两次测定的平均值；结果系统性低于ISO 3596方法；PN-EN ISO 18609:2002

食品化学 PN-EN ISO 18609

概述

本标准涵盖的内容。我们阅读的是ISO 18609:2000（2000年8月15日第一版，英文文本）的iTeh样本——PN-EN ISO 18609:2002等同采用EN ISO 18609:2001和ISO 18609:2000（PKN检索）。样本包括前言、第1–12章以及附录A开头（参加者、样品和结果摘要）；样本中没有各实验室结果和统计的表A.1–A.4。

依据ISO 18609:2000文本。本标准由ISO/TC 34“农产食品”第SC 11分委员会“动植物油脂”编制；第一版代替ISO 3596-2:1988及其修改单1:1999，属小修订。范围（1）：用三次正己烷萃取测定动植物油脂中不皂化物含量；适用于所有油脂，但不适用于蜡；注意：与ISO 3596的方法相比，本方法结果系统性偏低。引用文件（2）：ISO 661（试样制备）。定义（3.1）：不皂化物——产品经氢氧化钾皂化并用正己烷萃取后，在规定操作条件下不挥发的全部物质；注：包括天然脂质，如甾醇、高级烃和醇、脂肪族醇和萜烯醇，以及被溶剂萃取、在103 °C下不挥发的外来有机物（如矿物油）。原理（4）：油脂与乙醇氢氧化钾溶液回流煮沸皂化；用正己烷（或无正己烷时用石油醚）从皂液中萃取不皂化物；蒸发溶剂，残留物干燥后称量。试剂（5）：正己烷或40–60 °C馏程的石油醚，溴值小于1，二者均无残留；10 %（体积分数）乙醇；酚酞10 g/l，溶于95 %乙醇；乙醇氢氧化钾约1 mol/l——60 g KOH溶于50 ml水，用95 %乙醇稀释至1000 ml，溶液无色或呈淡黄色。仪器（6）：250 ml磨口圆底烧瓶、回流冷凝管、带聚四氟乙烯活塞和塞子的250 ml分液漏斗、沸水浴、(103 ± 2) °C烘箱或真空干燥装置（如旋转蒸发仪）。采样（7）不属于本方法——推荐ISO 5555；试样按ISO 661制备（8）。试样（9.1）：约5 g，精确至0.01 g。皂化（9.2）：加50 ml氢氧化钾溶液和防爆沸颗粒，回流缓慢煮沸1 h；停止加热后从冷凝管顶端加50 ml水并旋摇。萃取（9.3）：冷却后将溶液转入分液漏斗；用正己烷（共50 ml）多次冲洗烧瓶和防爆沸颗粒并倒入分液漏斗；塞紧，剧烈振摇1 min，定期倒置漏斗并小心打开活塞放气；静置至两相完全分离，将下层尽量放入第二个分液漏斗；如形成乳状液，加入少量乙醇、浓氢氧化钾或氯化钠溶液破乳；水乙醇皂液再用50 ml正己烷同样萃取两次；三份正己烷萃取液合并于一个分液漏斗。洗涤（9.4）：合并的萃取液用25 ml 10 %乙醇洗涤三次，剧烈振摇，每次洗后放出水乙醇相（留下2 ml，绕轴转动漏斗，静置几分钟后放出其余部分至活塞孔）；继续用乙醇溶液洗涤，直至洗液加一滴酚酞不再显粉红色。蒸发溶剂（9.5）：将正己烷溶液从分液漏斗顶部定量转入预先在103 °C干燥、冷却并称量至0.1 mg的250 ml烧瓶；在沸水浴上蒸发溶剂。干燥和测定（9.6.1）：将烧瓶几乎水平放置于103 °C烘箱中干燥残留物15 min，在干燥器中冷却，称量至0.1 mg；或接真空干燥装置，在沸水浴上以水泵最大真空干燥约15 min，在最大真空下冷却至室温，擦净烧瓶后称量至0.1 mg；以每次15 min重复干燥，直至两次称量之间质量损失小于1.5 mg；三次干燥后仍未恒重，则不皂化物可能被污染，须重新测定。校正（9.6.2）：如认为需要校正游离脂肪酸，称量后将残留物溶于4 ml正己烷，加入20 ml以酚酞为指示剂预先中和至淡粉色的乙醇，用0.1 mol/l乙醇氢氧化钾标准溶液滴定至同样颜色；游离脂肪酸以油酸计，相应校正残留物质量。对同一试样进行两次测定（9.7）；空白试验不加试样——若残留物超过1.5 mg，检查操作技术和试剂（9.8）。结果（10）：以样品质量百分数表示的不皂化物含量 = 100·(m1 − m2 − m3)/m0，其中m0——试样质量，m1——残留物质量，m2——空白残留物质量，m3——游离脂肪酸质量 = 0.28·V·c（V——乙醇氢氧化钾标准溶液体积，ml；c——其准确浓度，mol/l）；结果取两次测定的算术平均值。试验报告（12）：样品标识、采样方法（如已知）、引用本标准的方法、未规定的操作细节和意外情况、结果。附录A：由Institut des corps gras Centre technique industriel组织的协作研究，6个国家（法国、德国、匈牙利、马来西亚、荷兰、英国）的14家实验室；样品：粗葵花籽油、粗棕榈油、粗牛脂；样品A因Cochran和Dixon检验剔除两家实验室，样品C因Dixon检验剔除一家；三个样品不皂化物平均含量为0.15 %–0.58 %（质量分数）；重复性限约0.06 %（质量分数），重复性变异系数3.6 %–10.5 %；再现性限约0.18 %，再现性变异系数9 %–36 %。

状态（截至2026年10月3日）。PKN检索（检索词“PN-EN ISO 18609”，2026年10月3日）得到一条结果：PN-EN ISO 18609:2002——波兰文版，“采用：EN ISO 18609:2001 [IDT]，ISO 18609:2000 [IDT]”，无撤销标注。

实验室数量及引用形式（认可范围数据库副本，数据截至2026年9月17日，2026年10月3日读取）。编号18609出现在2家实验室的2条记录中：AB 285和AB 433。在PCA现行文件中（2026年10月3日读取；AB 285第28版，2026年1月13日；AB 433第26版，2026年6月11日）该编号出现在同样的2家实验室；每份文件的页码标记数等于PDF页数，无重复；检索2026年10月3日从BIP下载的全部PCA文件，未发现数据库副本以外的实验室。两家的写法均为“PN-EN ISO 18609:2002”。上述项目均未暂停。“实验室”选项卡（检索词“PN-EN ISO 18609”）显示两家实验室——2026年10月3日在labcoda.pl生产服务器上通过选项卡查询核实。

实验室检测内容（PCA项目）。AB 285：动植物油脂——不皂化物含量（0.10–5.00）%，重量法。AB 433：动植物油脂——不皂化物（1.4–31.6）g/kg，重量法。

容易得到貌似正确结果的环节。方法选择：标准明确警告结果系统性低于ISO 3596（1）——两种方法的结果不能不加说明地比较。范围：本方法不适用于蜡（1）。洗涤：萃取液须洗至加酚酞不显粉红色（9.4）——残留的皂会增加残留物质量。干燥：恒重指15 min后两次称量间损失小于1.5 mg；三次干燥后仍未恒重表示污染，须重做（9.6.1）。空白：残留物超过1.5 mg提示溶剂或操作问题（9.8）——正己烷必须无残留（5.1）。游离酸：校正m3 = 0.28·V·c是可选的（9.6.2）——报告应说明是否采用。结果含义：不皂化物还包括在103 °C下不挥发的外来物质，如矿物油（3.1，注）——结果不能将其与甾醇区分。单位：AB 285以%表示，AB 433以g/kg表示（1.4–31.6 g/kg即0.14–3.16 %）。

我们未提供的内容。表A.1–A.4中各实验室结果和实验室间研究的完整统计我们未阅读——样本只含其摘要。本条目不概述ISO 3596、ISO 661或ISO 5555。

方法原理

油脂与乙醇氢氧化钾溶液回流煮沸皂化，形成水乙醇皂液。不能皂化的成分（甾醇、高级烃和醇，以及如矿物油）用正己烷萃取三次，洗去萃取液中残留的皂，蒸发溶剂，残留物在103 °C下干燥后称量。从质量中扣除空白以及（可选）经滴定测定的游离脂肪酸。

应用领域

• 除蜡以外的所有动植物油脂（1）
• 甾醇、高级烃和醇以及在103 °C下不挥发的外来物质，如矿物油（3.1，注）
• 动植物油脂——不皂化物——PCA中2家实验室的2条认可范围记录

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 18609:2002

标准名称（波兰语）

Oleje i tłuszcze roślinne oraz zwierzęce — Oznaczanie substancji niezmydlających się — Metoda ekstrakcji heksanem

标准名称（英语）

Animal and vegetable fats and oils — Determination of unsaponifiable matter — Method using hexane extraction

分步操作程序

1. 试样和皂化

   约5 g（± 0.01 g），50 ml乙醇KOH，回流煮沸1 h，加50 ml水（9.1、9.2）。PN-EN ISO 18609:2002——无撤销标注（PKN，2026年10月3日）。

2. 萃取

   三次各50 ml正己烷，振摇1 min，合并萃取液（9.3）。

3. 洗涤

   10 %乙醇每次25 ml，洗至加酚酞不显粉红色（9.4）。

4. 蒸发和干燥

   烧瓶称量至0.1 mg；103 °C每次15 min至损失 < 1.5 mg（9.5、9.6.1）。

5. 校正和结果

   可选游离酸（0.28·V·c）；% = 100·(m1 − m2 − m3)/m0；空白 ≤ 1.5 mg；两次测定的平均值（9.6.2–10）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 在分液漏斗中振摇正己烷时，定期倒置漏斗并小心打开活塞放气（9.3）

常见问题