🍎 油脂的脂肪酸组成（包括芥酸、反式异构体、ω-3脂肪酸）——在极性毛细管柱上用火焰离子化检测器分离脂肪酸甲酯（FAME），按峰面积百分比、校正因子或内标计算，PN-EN ISO 12966-4

食品化学 PN-EN ISO 12966-4

概述

本标准描述的内容。PN-EN ISO 12966-4:2026-08（现行版）PKN目录卡上的范围，全文（我们对波兰文卡片文本的翻译）：“本文件规定了用毛细管气相色谱法（GLC）测定由油脂和脂肪酸经酯交换或酯化得到的脂肪酸甲酯（FAME）的方法。本文件可分离C4至C24的FAME，包括饱和FAME、顺式和反式单不饱和FAME以及顺式和反式多不饱和FAME。本文件适用于动物和植物来源的粗制、精炼、部分或完全氢化的油脂和脂肪酸，以及从食品中提取的脂肪。本文件不适用于乳及乳制品（或来自乳及乳制品的脂肪）或添加共轭亚油酸（CLA）的产品。本文件不适用于二聚、三聚、聚合、羟基化和氧化的脂肪酸及油脂。附录E提出了以面积%表示液态植物油中FAME组成的测定方法。”我们没有2026版的文本。以下技术内容取自2015版（ISO 12966-4:2015，第一版）的试读片段，从封面到第12章（检测报告，第7页）开头——这是所有实验室在认可范围中引用的版本；与2026版相关的只有其目录卡的“范围”字段。

2026版的变化——仅限于两张PKN卡片“范围”字段所能看出的内容。（1）分离范围：2015版——“C8至C24”，2026版——“C4至C24”。（2）适用对象：2026版增加了“从食品中提取的脂肪”。（3）乳的排除：2015版——该方法“不适用于”来自反刍动物乳的油脂和添加CLA的产品，乳及乳制品（其脂肪）不在范围内；2026版——本文件“不适用于”乳及乳制品（其脂肪）或添加CLA的产品——两版都保留了这一排除。（4）脂肪酸的排除：2026版增加了羟基化脂肪酸。（5）新增附录E（2026版）——液态植物油中以面积%表示的FAME组成。2026版卡片：52页，2015版（英文版）卡片——32页。色谱条件、公式、色谱柱检查或精密度是否有变化，不提供——我们未读过2026版文本。

依据2015版（第1–11章）。本标准由ISO/TC 34/SC 11“动植物油脂”起草；第一版代替ISO 5508:1990和ISO 15304:2002（技术修订）。ISO 12966系列：第1部分——现代FAME气相色谱指南，第2部分——甲酯的制备，第3部分——用三甲基氢氧化硫（TMSH）制备甲酯，第4部分——毛细管气相色谱法测定。规范性引用文件：ISO 661（试样制备）、ISO 3696（水）、ISO 6353（试剂）、ISO 12966-2和ISO 12966-3。原理：FAME在强极性固定相上按链长、不饱和程度以及双键的几何构型和位置分离。试剂：用于鉴定的纯FAME标准混合物和/或已知组成的油；具有认证组成的油脂，例如标准物质BCR 162；FAME标准品，特别是十八碳烯酸（油酸）、十八碳二烯酸（亚油酸）和十八碳三烯酸（α-亚麻酸）的顺式和反式异构体——亚油酸和α-亚麻酸的反式异构体可在实验室用对甲苯磺酸制备。要得到克/100克的结果需要FAME内标（也可用脂肪酸混合物外标校准）；按脂肪类型举例：C11:0、C17:0、C19:0、C21:0、C23:0；建议对样品另做一次不加内标的分析，以核查用作内标的脂肪酸的天然含量，并在计算中予以考虑；内标纯度用TLC、HPLC、GC或其他适当技术确认。溶液示例：C21:0 FAME（二十一烷酸甲酯，纯度 > 99 %）5,0 mg/ml，溶于异辛烷或MTBE；C21:0甘油三酯（三(二十一烷酸)甘油酯，纯度 > 99 %）5,0 mg/ml溶于氯仿或2 mg/ml溶于甲苯（稍加温即溶解，冷藏时结晶析出）；TAG内标在制备甲酯前加入，FAME内标在制备前或后加入，二者链长不同可用于评价衍生化效率；冷时难溶的TAG内标需按ISO 12966-2:2011（4.3–4.5）进行热甲酯化；加入TAG内标后除去异辛烷以外的溶剂。溶剂：异辛烷、MTBE、氯仿、正己烷、正庚烷、甲苯。仪器：配火焰离子化检测器、分流或不分流进样器（也可用柱头进样和PTV）及数据采集系统的气相色谱仪；熔融石英毛细管柱100 m × 0,25 mm，100 %氰丙基硅氧烷固定相（例如SP-2560或CP-Sil 88），膜厚0,20 µm——此类色谱柱可分离大多数C18:1反式和顺式异构体；不需要该分离时，50 m或60 m色谱柱即可，其他固定相（例如BPX70、DB-23、SP-2380）也可使用，但洗脱顺序可能改变，10–15 m短柱——用于快速GC，信息有限；10 µl微量注射器；载气为氢气（推荐）或氦气，纯度至少99,999 5 %，干燥，氧含量去除至0,1 mg/kg以下——不得使用氮气作载气；火焰气体（氢气、空气）和尾吹气（氮气或氦气）。取样不属于本方法（推荐ISO 5555）；试样按ISO 661制备，甲酯按ISO 12966-2或ISO 12966-3制备；内标加入量应使加入油脂后其质量分数为每毫克油脂0,05至0,10毫克内标，其溶剂在甲酯化前蒸发除去；FAME溶于正庚烷、正己烷或异辛烷，分流进样时约15–20 mg/ml。步骤：每批的第一个样品始终是仅含溶剂的空白——其中不得出现色谱峰。在100 m色谱柱上经验证适用于C4至C24 FAME的条件（也可用其他条件）：进样口和检测器250 °C；柱温从120 °C以4 °C/min升至240 °C，在240 °C保持7 min；氢气柱前压220 kPa，线速度30–40 cm/s，流量约1,0 ml/min；分流比1:100；进样1 µl（15–20 µg FAME）。用涵盖待测脂肪酸的FAME混合物检查色谱柱性能；必要时调整进样量、浓度或柱温——柱温最好按1 °C调整；在所有氰丙基硅氧烷色谱柱上，柱温对13t-和14t-C18:1、16t-C18:1、14c-C18:1、9c,12c,15t-C18:3、11c-C20:1和9c,12c,15c-C18:3等的洗脱顺序影响很大。鉴定（10.1）：根据与FAME标准品和氢化参考油相比的保留时间；未知峰不计入峰面积总和，除非已确认为脂肪酸——也可将其单独汇总；标准指出顺式和反式异构体存在轻微共洗脱，尤其在C18:1（顺-9-油酸）区域。计算：（10.2.1）面积分数xi = Ai/ΣA × 100——对大多数油脂相当于以克/100克表示的甘油三酯分数；按AOCS Ce 1h-05，FAME换算为TAG的因子在0,9114（C8:0）至0,9965（C24:1）之间，标准认为可忽略；结果以克/100克表示，保留一位小数。（10.2.2）存在碳原子数少于16的脂肪酸时（含C10、C12、C14的月桂酸类油脂），用为每台仪器以认证组成材料测定的因子Fi校正面积：Fi = (mi × ΣA)/(Ai × Σm)，wi = Fi·Ai/Σ(Fi·Ai)；应客户要求可不使用该因子，但报告中必须注明是否使用；理论FID校正因子（附录A）与之不同，二者差异较大时须检查整个系统。（10.2.3）使用内标（例如并非所有脂肪酸都被定量时、C16和C18之外还存在C4和C6脂肪酸时或需要某脂肪酸的绝对含量时）：wi = (mIS × Fi × Ai)/(m × FIS × AIS)，内标质量按纯度校正（通常为0,99）；结果保留一位小数。精密度（11）：重复性r和再现性R见表D.1–D.3，来自实验室间试验（数值可能不适用于其他浓度范围和基质）。目录还列出第12章（检测报告）和资料性附录A（理论FID校正因子）、B（色谱图示例）、C（两种色谱柱上FAME组成的比较）、D（实验室间试验）。

状态（目录卡状态截至02.10.2026）。PN-EN ISO 12966-4:2026-08（英文版）卡片没有“已废止”标记——该版为现行版：发布于31-08-2026，52页，价格组U，食品、农业和林业部门，KT 92油料种子、动植物油脂及其副产品技术委员会，ICS 67.200.10，“采用：EN ISO 12966-4:2026 [IDT]，ISO 12966-4:2026 [IDT]”，“代替：PN-EN ISO 12966-4:2015-07 - 波兰文版，PN-EN ISO 12966-4:2015-07 - 英文版”。目录中没有2026版的波兰文版：以“PN-EN ISO 12966-4”检索PKN（02.10.2026）显示三项——2026-08（英文）和2015-07（波兰文和英文）。PN-EN ISO 12966-4:2015-07两种语言版本的卡片：“已废止，由PN-EN ISO 12966-4:2026-08 - 英文版代替”，废止日期31-08-2026（英文版——发布于10-07-2015，32页；波兰文版——03-10-2022，28页）；2015版代替了PN-EN ISO 5508:1996和PN-EN ISO 15304:2003（含更正AC:2005）。从2015版改为2026版对结果意味着什么：根据“范围”字段——分离范围从C4起而非从C8起，从食品中提取的脂肪明确纳入范围，附录E给出植物油的面积百分比；乳和CLA产品的排除保留；其余我们不知道。我们未在ISO网站上核实ISO 12966-4:2026的状态。法规：欧盟委员会关于食品中某些污染物最高限量的条例（EU）2023/915（19.08.2026合并文本——根据CELLAR数据库为最新版；第2.1点措辞与原始法令相同，OJ L 119，5.5.2023）对芥酸（包括结合在脂肪中的芥酸）规定的最高限量（g/kg）为：植物油脂——20,0；亚麻荠油、芥子油和琉璃苣油——50,0；芥末（调味品）——35,0；未指明测定方法（合并文本全文中未出现编号12966）。

实验室数量及形式（认可范围数据库副本，数据截至17.09.2026，读取于02.10.2026）。编号12966-4出现在9家实验室的17条记录中：AB 343、AB 515、AB 552、AB 562（各3条），AB 444、AB 775、AB 819、AB 1179、AB 1679（各1条）。PCA网站上的现行范围（读取于02.10.2026，范围版本日期从24.11.2025到18.09.2026）：该编号出现在13行中——AB 515和AB 562各3行，其余七家各1行（AB 343和AB 552的一条参考文件条目涵盖多个对象，副本将其拆分为单独记录）。版本：均为2015-07，AB 444未注明日期（“PN-EN ISO 12966-4”）——因此全部9家实验室目前引用的是31.08.2026已废止的版本。这些项目均未暂停（AB 1179关于24.04.2026至21.10.2026部分范围暂停的脚注针对粗斜体行——含12966-4的行不是这种字体）。“实验室”标签检索以“PN-EN ISO 12966-4”开头的条目，显示全部9家实验室——已于02.10.2026在生产服务器labcoda.pl上通过该标签查询核实：9（“EN ISO 12966-4”和“ISO 12966-4”下——0）。

实验室测定的内容（PCA中的项目）。芥酸——AB 343（植物油脂(0,1–7,0) %（质量），婴儿配方食品(0,1–1,5) %，芥末(10–50) %），AB 552（油(0,1–6,0) %（以脂肪计），特殊营养用途食品(0,1–3,0) %，芥末(10,0–55,0) %（以脂肪计），每项还有“产品中芥酸含量（计算所得）”），AB 562（油脂(0,2–10,0) %，婴儿配方及较大婴儿配方食品(0,2–2,0) %，同时测亚油酸(0,2–50,0) %），AB 775（油菜籽(0,1–5,0) %）。带脂肪酸清单的完整脂肪酸组成——AB 515（从C6:0到C24:1，范围(0,08–100) %，计算所得包括饱和、单不饱和及多不饱和脂肪酸总和、反式异构体、ω-3、-6、-9、CLA、必需脂肪酸以及按份或按千卡换算），AB 819（从C4:0到C22:6，(0,1–75,0) %，含“计算所得”总和），AB 1179（从C4:0到C22:6，(0,06–100) %和g/100 g，含“计算所得”总和）；无清单——AB 444（“脂肪酸组成”和“丁酸含量”，食品），AB 1679（作为食品和液体生物燃料的植物油，(0,1–63,0) % (m/m)），AB 562（ω-3脂肪酸比例，(0,2–50,0) %）。所有项目的技术：气相色谱-火焰离子化检测（GC-FID）。

与本标准并列（同一PCA项目）。PN-EN ISO 12966-2:2017-05（甲酯的制备）——全部9家实验室，部分有排除或指定条款：AB 562——不包括5.2、5.3和5.5；AB 1679——不包括5.4和5.5；AB 819——5.3；AB 1179——5.2；AB 444未注明日期。PN-EN ISO 12966-1:2015-01（指南），含或不含更正AC:2015-06——7家实验室（除AB 343和AB 444外）。PN-ISO 1444:2000（肉中游离脂肪）——AB 343。内部程序——AB 1179（IB-17第4版，10.03.2021；IB-05第6版，12.05.2021）。状态（目录卡状态截至02.10.2026）：PN-EN ISO 12966-2:2017-05（波兰文版，发布于14-11-2022）、PN-EN ISO 12966-1:2015-01（波兰文版，发布于06-07-2021，附加文件AC:2015-06）和PN-ISO 1444:2000——卡片均无“已废止”标记。按PN-EN ISO 12966-2制备甲酯、PN-EN ISO 12966-1指南和按PN-ISO 1444测定肉中游离脂肪在知识库中有单独条目。

容易得到表面正确结果的地方。样品选择：两版范围都排除乳及乳制品（乳脂）和添加CLA的产品，2015版还排除来自反刍动物乳的脂肪——然而引用本标准的认可范围中有：“乳及乳制品”（AB 562，ω-3脂肪酸）、食品中的“丁酸含量”（AB 444）、计算所得量中的“CLA含量”（AB 515）以及婴儿配方食品（AB 343、AB 515、AB 562）；AB 819在对象中排除了乳、乳制品和乳源脂肪。此类样品的色谱图可以计算，但结果不在本标准范围内。短链脂肪酸：2015版范围说分离C8至C24，同版9.2的条件说C4至C24的FAME，2026版范围则从C4起；在AB 515、AB 819和AB 1179的认可范围中，C4:0和C6:0与2015版并列。测量：C18:1区域顺式和反式异构体共洗脱，柱温影响C18:1、C18:3和C20:1反式异构体的洗脱顺序——柱温改变几度就可能调换峰的顺序和命名；50–60 m色谱柱不能分离大多数C18:1反式和顺式异构体，氰丙基硅氧烷以外的固定相可能改变洗脱顺序；不得使用氮气作载气；每批第一次进样——空白，无峰。计算：面积百分比（10.2.1）只对大多数油脂等于“克/100克”——存在C16以下脂肪酸时需要为本仪器测定的校正因子，不使用时须在报告中注明；未知峰除非确认为脂肪酸，否则不计入总和；使用内标时，须单独分析核查样品中内标的天然含量并加以考虑。“计算所得”的量（饱和、反式、ω-3总和、产品中含量）是由本方法结果计算的：产品中的比例还需要用其他方法测定的脂肪含量（AB 343旁边为PN-ISO 1444——一项关于肉类的标准）；条例（EU）2023/915中芥酸的最高限量以g/kg给出。实验室选择的PN-EN ISO 12966-2版本和条款（甲酯化）是结果的一部分——见该标准的条目。

我们未提供的内容。我们没有2026版的文本（目录卡“范围”字段除外）——不提供其色谱条件、公式、色谱柱检查、精密度和附录E的内容。2015版中我们没有第12章（检测报告——a项除外）和附录A–D，包括r和R值。我们不提供甲酯的制备（PN-EN ISO 12966-2、12966-3）和取样规则（ISO 5555）。

方法原理

将油脂转化为脂肪酸甲酯（按ISO 12966-2或12966-3），然后用毛细管气相色谱在强极性氰丙基硅氧烷固定相上按链长、双键数目及其位置和几何构型（顺式/反式）分离，并用火焰离子化检测器检测。根据与标准品比较的保留时间鉴定色谱峰，组成按峰面积百分比计算，使用为仪器测定的校正因子（C16以下脂肪酸）或在需要以克/100克表示的绝对含量时使用内标（例如C21:0）。

应用领域

• 植物油脂、芥末、油菜籽和婴儿配方食品中的芥酸——AB 343、AB 552、AB 562、AB 775
• 食品的完整脂肪酸谱（C4:0–C24:1），含“计算所得”的饱和、反式、ω-3和ω-6脂肪酸总和——AB 515、AB 819、AB 1179
• 作为食品和液体生物燃料的植物油的脂肪酸组成——AB 1679

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 12966-4:2026-08 (wersja angielska; EN ISO 12966-4:2026, ISO 12966-4:2026 IDT)

标准名称（波兰语）

Oleje i tłuszcze roślinne oraz zwierzęce — Chromatografia gazowa estrów metylowych kwasów tłuszczowych — Część 4: Oznaczanie techniką kapilarnej chromatografii gazowej

标准名称（英语）

Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography of fatty acid methyl esters — Part 4: Determination by capillary gas chromatography

分步操作程序

1. 样品和甲酯

   试样按ISO 661制备；甲酯按ISO 12966-2或12966-3制备；内标（需要时）——每毫克油脂0,05–0,10毫克，其溶剂在甲酯化前蒸发除去。PN-EN ISO 12966-4:2026-08现行（目录卡状态截至02.10.2026）；实验室引用2015-07版。

2. FAME溶液

   FAME溶于正庚烷、正己烷或异辛烷，分流进样时约15–20 mg/ml。

3. 空白和色谱柱检查

   每批首先进仅含溶剂的空白，无峰；用涵盖待测脂肪酸的FAME混合物检查分离，必要时将柱温按1 °C调整。

4. 色谱分析

   例如进样口和检测器250 °C；柱温120 °C → 240 °C（4 °C/min），240 °C保持7 min；氢气220 kPa，约1,0 ml/min；分流1:100；1 µl（2015版，示例条件）。

5. 鉴定

   根据与FAME标准品和氢化参考油比较的保留时间；未知峰除非确认为脂肪酸，否则不计入总和。

6. 计算

   面积分数xi = Ai/ΣA × 100；存在C16以下脂肪酸时——使用为仪器测定的校正因子Fi（是否使用——在报告中注明）；内标——wi = (mIS·Fi·Ai)/(m·FIS·AIS)；结果以g/100 g表示，保留一位小数。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 氢气作载气可加快分析，但具有危险性——标准要求使用氢气发生器和安全装置；有毒溶剂——在通风橱中操作
• 氯仿——标准将其列为第3类致癌溶剂；正己烷和正庚烷之后——警示长期吸入和吞咽暴露
• 技术提示：本方法不适用于乳及乳制品和添加CLA的产品（两版均如此）；实验室引用的2015-07版已于31-08-2026废止

常见问题