🦠 化妆品中的Pseudomonas aeruginosa（铜绿假单胞菌）——在Eugon LT 100肉汤中增菌并在西曲溴铵琼脂上分离的检出法
三句话速览
把化妆品样品（≥ 1 g或1 ml）在非选择性Eugon LT 100肉汤中增菌，在选择性西曲溴铵琼脂（西曲溴铵0。该检测依据 PN-EN ISO 22717:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 22717:2015 + Amd 1:2022)；样品：至少1 g或1 ml产品。整个程序共 6 个步骤；主要用于：化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的P. aeruginosa、高风险的水基产品（乳霜、凝胶、润肤乳、眼部产品）——批次放行、防腐配方研制过程中原料、工艺用水和产品的检验。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 22717:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 22717:2015 + Amd 1:2022)
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 6
- 样品: 至少1 g或1 ml产品
- 步骤: 非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定
- 增菌肉汤: Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤）
概述
ISO 22717:2015给出了检出和鉴定Pseudomonas aeruginosa的一般指南——它是化妆品中的“规定”微生物；规定微生物的清单可能因各国的惯例和法规而异。该方法基于在非选择性液体培养基（增菌肉汤）中检出P. aeruginosa，随后在选择性琼脂培养基上分离；视所要求的检出水平而定，其他方法也可能是适宜的（如转接到非选择性培养基并用试剂盒鉴定）。对于与水不混溶的产品，ISO 18415可能是适宜的；替代方法（如自动化方法）在证明等效后可以使用。该标准建议进行微生物风险分析；低风险产品（ISO 29621）包括水分活度低的、含水醇的和pH极端的产品。按标准，P. aeruginosa的主要鉴定特征包括在选择性西曲溴铵琼脂上的生长。
在波兰它以PN-EN ISO 22717:2016-01连同A1:2023-03修改单施行（取代了PN-EN ISO 22717:2010）。在检验化妆品微生物洁净度的实验室中，为观察P. aeruginosa的存在而使用西曲溴铵选择性培养基（Cetrimide Agar）——这与用于化妆品定量和定性检验的PN-EN ISO标准系列相一致。
方法原理
第一步是在非选择性肉汤中增菌，它使微生物数量增加而不会被选择性－鉴别性培养基中的选择性成分抑制；第二步（分离）在选择性培养基上进行，随后做鉴定试验。样品对微生物生长可能存在的抑制必须被中和，而产品抗菌性能的中和须经检查并证明（标准第11章，在大豆酪蛋白琼脂上的适用性试验）。样品为用于初始悬液的至少1 g或1 ml产品。按标准规定的培养基：作为菌悬液稀释液的胰蛋白胨氯化钠溶液、用于适用性试验的大豆酪蛋白琼脂、用于增菌的Eugon LT 100肉汤（也允许使用其他肉汤）、用于分离P. aeruginosa的西曲溴铵琼脂（其中每1000 ml含西曲溴铵即十六烷基三甲基溴化铵0.3 g和甘油10.0 ml；溶解后煮沸1 min并在121 °C下灭菌15 min），以及用于确证的、检出绿脓菌素的Pseudomonas P琼脂（含甘油10.0 ml/l；煮沸1 min，121 °C灭菌15 min）。
应用领域
- 化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的P. aeruginosa
- 高风险的水基产品（乳霜、凝胶、润肤乳、眼部产品）——批次放行
- 防腐配方研制过程中原料、工艺用水和产品的检验
- 化妆品行业的合同实验室和企业实验室（PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416系列）
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 样品 | 至少1 g或1 ml产品 |
| 步骤 | 非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定 |
| 增菌肉汤 | Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤） |
| 分离琼脂 | 西曲溴铵琼脂：西曲溴铵0.3 g/l，甘油10 ml/l |
| 确证琼脂 | Pseudomonas P琼脂（绿脓菌素），甘油10 ml/l |
| 有效性条件 | 已证明抗菌性能被中和（第11章） |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 22717:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 22717:2015 + Amd 1:2022)
- 标准名称（波兰语）
- Kosmetyki — Mikrobiologia — Wykrywanie obecności Pseudomonas aeruginosa
- 标准名称（英语）
- Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa
分步操作程序
-
风险分析与样品
确定产品是否需要检验（ISO 29621）。取至少1 g或1 ml产品，在增菌肉汤中配制初始悬液。
-
适用性试验
用参比菌株在胰蛋白胨氯化钠溶液中的悬液和大豆酪蛋白琼脂，证明产品抗菌性能已被中和（第11章）。
-
增菌
把初始悬液在非选择性Eugon LT 100肉汤中按标准给出的条件培养。
-
分离
从培养物接种西曲溴铵琼脂并培养；判定P. aeruginosa特征性菌落的生长情况。
-
确证与鉴定
把可疑菌落转接到Pseudomonas P琼脂上（绿脓菌素的产生）并做鉴定试验。
-
结果
报出受检产品样品（1 g或1 ml）中P. aeruginosa的存在或不存在，并说明已证明的中和情况。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 高压灭菌器121 °C | 培养基灭菌15 min | — |
| 用于培养的培养箱 | 条件按标准操作步骤各章的规定 | — |
| 水浴／电热板 | 灭菌前把培养基煮沸1 min | — |
| 培养皿、烧瓶、无菌移液管、接种环 | 分离和确证用接种 | — |
| 鉴定试剂盒 | 分离株的鉴定（按标准） | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 胰蛋白胨氯化钠溶液 | — | 菌悬液（参比菌株）的稀释液 |
| 大豆酪蛋白琼脂 | — | 方法适用性试验（中和） |
| Eugon LT 100肉汤 | — | 带防腐剂中和的非选择性增菌 |
| 西曲溴铵琼脂（西曲溴铵0.3 g/l，甘油10 ml/l） | — | P. aeruginosa的选择性分离 |
| Pseudomonas P琼脂（甘油10 ml/l） | — | 确证——绿脓菌素的产生 |
职业健康与安全
- P. aeruginosa是机会致病菌（眼部、伤口感染）——在微生物实验室条件下操作，对培养物高压灭菌
- 西曲溴铵（季铵盐）——有刺激性；称量时戴手套和护目镜
- 煮沸和高压灭菌后的高温培养基——有烫伤风险
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 22717:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 22717:2015 + Amd 1:2022) — 《Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa》。
该方法的原理是什么？
第一步是在非选择性肉汤中增菌，它使微生物数量增加而不会被选择性－鉴别性培养基中的选择性成分抑制；第二步（分离）在选择性培养基上进行，随后做鉴定试验。样品对微生物生长可能存在的抑制必须被中和，而产品抗菌性能的中和须经检查并证明（标准第11章，在大豆酪蛋白琼脂上的适用性试验）。
测量范围和准确度是多少？
样品：至少1 g或1 ml产品；步骤：非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定；增菌肉汤：Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤）；分离琼脂：西曲溴铵琼脂：西曲溴铵0.3 g/l，甘油10 ml/l。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 6 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
高压灭菌器121 °C、用于培养的培养箱、水浴／电热板、培养皿、烧瓶、无菌移液管、接种环、鉴定试剂盒。
该检测用于哪些场景？
化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的P. aeruginosa；高风险的水基产品（乳霜、凝胶、润肤乳、眼部产品）——批次放行；防腐配方研制过程中原料、工艺用水和产品的检验；化妆品行业的合同实验室和企业实验室（PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416系列）。
需要采取哪些安全防护措施？
P. aeruginosa是机会致病菌（眼部、伤口感染）——在微生物实验室条件下操作，对培养物高压灭菌；西曲溴铵（季铵盐）——有刺激性；称量时戴手套和护目镜；煮沸和高压灭菌后的高温培养基——有烫伤风险。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 22717。