🦠 微生物检测用水样采集——采样瓶、消毒剂失活、运输（PN-EN ISO 19458）
三句话速览
涵盖微生物样品全过程的标准：采样方案策划、采样点选择、无菌容器、用硫代硫酸盐使消毒剂失活、运输以及在检测开始前的保存。该检测依据 PN-EN ISO 19458:2007 (wersja polska; wprowadza EN ISO 19458:2006 [IDT] i ISO 19458:2006 [IDT])；范围：采样方案策划、微生物分析采样程序、运输、处理以及检测开始前的保存。整个程序共 7 个步骤；主要用于：供人类消费用水的微生物检测采样——从用户龙头和管网点采样、娱乐用水和游泳池水，包括浸入式采样、检测消毒效果——采样点选在反应已完成处。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 19458:2007 (wersja polska; wprowadza EN ISO 19458:2006 [IDT] i ISO 19458:2006 [IDT])
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 7
- 范围: 采样方案策划、微生物分析采样程序、运输、处理以及检测开始前的保存
- 常用体积: 测定的微生物类别少于五类时500 ml即可（每类接种最多100 ml）
- 特殊体积: 瓶装水每个参数250 ml；军团菌或沙门氏菌最多1 l；病毒、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、阿米巴——10升至数百升，现场富集
概述
范围，译自标准文本：本标准就水样采样方案的策划、微生物分析的采样程序以及检测开始前样品的运输、处理和保存提供指南。它侧重于微生物检测的采样。关于从各类水体采样的一般信息见ISO 5667系列的相应部分——因此本标准与PN-ISO 5667-5或PN-EN ISO 5667-6应结合阅读，而不能互相替代。
采样点——以及说明原因的三个例子。采样点必须能给出具有代表性的特征，并考虑垂直、水平和时间上的变化；采样点按照ISO 5667-1和ISO 5667-2的一般建议确定，并附加微生物学特有的考虑。应避免条件不稳定的点，并考虑水力系统的不均匀性。本标准给出了这种不均匀性的三个例子：表层下样品、表层样品以及在穿过表面膜取出时被“污染”的表层下样品并不相同——在湖泊和游泳池中，表面膜中的浓度可能比紧贴表面之下高一千倍；管网中并非所有点都等效，因为其中有末梢和流量减小的管段，尤其是管网由两个水源供水时；充分混合的水箱出口处的水质通常与水体主体相同，但可能与进口处水质有很大差异。检测消毒效果时，必须选择反应已经完成的点。
人员。本标准要求对所有采样人员描述正式培训、培训记录和能力确认方式——并且这些信息应妥善形成文件。这是体系要求而非技术要求，在程序中有时被忽略。
容器。常规样品（龙头水、娱乐用水、游泳池水）使用清洁无菌的瓶子，容积足够满足所有委托参数。浸入式采样时，瓶子内外都必须无菌并加以防护，例如用牛皮纸（使其在高压灭菌后保持干燥）、铝箔或塑料袋——塑料袋在采样前才打开，可当作握瓶的手套。如瓶子不能高压灭菌，允许采用γ射线或环氧乙烷灭菌。也可在浸入前立即用合适的消毒剂（例如异丙醇）对瓶子外表面消毒并晾干——但这不适用于产芽孢细菌的检测。
体积——标准中的数字。大多数情况下500 ml的瓶子就够了，因为测定的微生物类别少于五类，每类接种最多100 ml。瓶装水（每个参数250 ml）、军团菌属或沙门氏菌属（最多1 l）以及清洁水中的病毒、贾第鞭毛虫包囊、隐孢子虫卵囊和阿米巴需要更大体积——这些检测10升到数百升甚至更多，通常在现场用滤筒富集，再将滤筒运往实验室。瓶子可以是玻璃或塑料（聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚碳酸酯）；玻璃通常可重复使用，聚乙烯作为一次性用品。
消毒剂失活——本标准对供水企业的核心。评价经氧化剂（氯、氯胺、溴、臭氧）消毒的水的微生物质量时，必须在采样后立即向瓶中加入还原剂——硫代硫酸钠——以终止氧化剂的作用。本标准给出计算：中和1 mg氯所需的硫代硫酸钠（五水合物）理论质量为7.1 mg，因此每100 ml瓶容量加入0.1 ml硫代硫酸钠溶液（18 mg/ml）。这至少可中和2 mg/l，视反应动力学甚至可中和高达5 mg/l的余游离氯——对大多数样品已足够。氯浓度较高时（游泳池的儿童戏水池、供水管网中清除军团菌的行动），剂量必须按比例增加。硫代硫酸盐在高压灭菌和干热中不会被破坏，其溶液pH应接近中性，因为低pH会导致分解。硫代硫酸盐不影响样品，也可用于未加氯的水。如失活不可能或不可行，必须在报告中注明。
波兰供水企业的实践。一家供水企业引用本标准的作业说明给出了在龙头处的操作顺序：取下滤网，让水自由流出至少3分钟，关闭阀门，用刷子和洗涤剂清洗龙头，冲净后关闭，金属龙头用喷灯火焰或浸酒精的棉签灭菌，塑料龙头——浸入消毒剂中，不得灼烧，从塑料软管采样时剪去5–8 cm端头并浸入消毒液，打开阀门使水不飞溅，从包装膜中取出无菌瓶，打开瓶盖并防止其被污染，在不接触龙头的情况下将瓶子灌装至瓶颈收缩处，立即盖紧、标记并包装。
我们不提供的内容。我们有标准文本的预览，涵盖范围、采样点、人员、容器、消毒剂失活以及试剂和设备清单；关于运输和保存的第5章在无法获取的部分。因此我们不提供：本标准要求的允许运输时间和保存温度，以及各类微生物开始检测的期限。
方法原理
微生物样品必须以离开采样点时的状态到达实验室。由此产生本标准的三项措施：样品路径无菌（无菌容器、灭菌的龙头、操作时不接触与水接触的表面）、采样后立即终止消毒剂作用（瓶中加还原剂）以及抑制数量随时间的变化（冷却并尽快开始检测）。采样点的选择要考虑系统的不均匀性——表面膜、管网末梢、水箱进口与出口之间的差异。
应用领域
- 供人类消费用水的微生物检测采样——从用户龙头和管网点采样
- 娱乐用水和游泳池水，包括浸入式采样
- 检测消毒效果——采样点选在反应已完成处
- 军团菌属和沙门氏菌属采样（最多1 l）以及瓶装水（每个参数250 ml）
- 病毒、贾第鞭毛虫、隐孢子虫和阿米巴采样——在现场用滤筒富集
- 记录采样人员的能力
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 范围 | 采样方案策划、微生物分析采样程序、运输、处理以及检测开始前的保存 |
| 常用体积 | 测定的微生物类别少于五类时500 ml即可（每类接种最多100 ml） |
| 特殊体积 | 瓶装水每个参数250 ml；军团菌或沙门氏菌最多1 l；病毒、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、阿米巴——10升至数百升，现场富集 |
| 氯的失活——标准中的数字 | 每1 mg氯需7.1 mg五水硫代硫酸钠；每100 ml瓶容量加0.1 ml 18 mg/ml溶液；至少中和2 mg/l，最多5 mg/l游离氯 |
| 硫代硫酸盐——性质 | 在高压灭菌和干热中不被破坏；溶液pH接近中性（低pH导致分解）；不影响样品，也可用于未加氯的水 |
| 表面膜 | 在湖泊和游泳池中，表面膜中的浓度可能比紧贴表面之下高1000倍——表层样品和表层下样品并不相同 |
| 用异丙醇对瓶子消毒 | 浸入前对外表面消毒是允许的，但不适用于产芽孢细菌的检测 |
| 人员 | 正式培训、培训记录和能力确认——对所有采样人员进行描述并形成文件 |
| 运输和保存时间 | 我们不提供——标准第5章不在可获取的预览范围内 |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 19458:2007 (wersja polska; wprowadza EN ISO 19458:2006 [IDT] i ISO 19458:2006 [IDT])
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody -- Pobieranie próbek do analiz mikrobiologicznych
- 标准名称（英语）
- Water quality — Sampling for microbiological analysis
分步操作程序
-
选择采样点
具有代表性，考虑垂直、水平和时间上的变化以及水力系统的不均匀性。评价消毒时——选在反应已完成的点。
-
准备采样瓶
无菌，容积足够所有参数使用。浸入式采样时内外均无菌，用牛皮纸、铝箔或袋子防护。
-
加入还原剂
对经氧化剂消毒的水：每100 ml瓶容量加0.1 ml硫代硫酸钠溶液（18 mg/ml）。氯浓度较高时按比例增加剂量。无法失活时——在报告中注明。
-
准备龙头
取下滤网，放水至少3分钟，关闭，用刷子和洗涤剂清洗龙头，冲净。金属龙头用火焰或浸酒精的棉签灭菌；塑料龙头浸入消毒剂中，不得灼烧。
-
灌装
打开阀门使水不飞溅。打开瓶子并防止瓶盖被污染，在不接触龙头的情况下灌装至瓶颈收缩处。立即盖紧。
-
标记和包装
作持久标记：地点、日期、时间、水的类型。装入防护袋。
-
运输
在冷藏条件下运输，避免震动和光照，在采样当天送达实验室。标准要求的具体时间和温度我们不提供——第5章不在可获取的预览范围内。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 无菌瓶 | 玻璃（可重复使用）或塑料：聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚碳酸酯（聚乙烯通常一次性使用） | — |
| 浸入式采样用瓶的防护 | 牛皮纸、铝箔或塑料袋——塑料袋可当作握瓶的手套 | — |
| 喷灯或浸酒精的棉签 | 金属龙头灭菌；塑料龙头不得灼烧 | — |
| 带冰袋的便携式冷藏箱 | 冷藏条件下运输；温度计或温度记录仪 | — |
| 带绳索或链条的重锤 | 用于深处采样；建议至少下部为不锈钢 | — |
| 采样杆、长钳或不同深度的采样器 | 浸入式采样，不接触表面膜 | — |
| 现场测量仪器 | pH、氯、溶解氧、电导率 | — |
| 无菌手套 | 操作时不污染容器和瓶盖 | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 五水硫代硫酸钠——18 mg/ml溶液 | — | 使氧化性消毒剂失活：每100 ml瓶容量加0.1 ml |
| 硫化钠——0.1 mg/ml溶液 | — | 每1 l样品加1 ml（用途在标准中另行说明） |
| 碘——0.05 mol/l溶液 | — | 用碘量法检查瓶中是否有硫代硫酸盐，以淀粉或噻吩为指示剂 |
| 70 %（体积分数）乙醇或异丙醇 | — | 表面消毒；可在浸入前用异丙醇对瓶子外表面消毒——检测产芽孢细菌时不可 |
职业健康与安全
- 从湖泊、游泳池和水库浸入式采样——有落水风险；使用带绳重锤并做好保护
- 用火焰对龙头灭菌——在检查井或设备间内有明火；不得在易燃材料和蒸气附近使用
- 军团菌样品在热水系统中采集——有烫伤和接触气溶胶的风险
- 专业提示：用异丙醇对瓶子外表面消毒不适用于产芽孢细菌的检测
- 专业提示：金属瓶盖，尤其是铝盖，在高压灭菌后可能呈现毒性——耐热密封衬垫可防止这一点
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 19458:2007 (wersja polska; wprowadza EN ISO 19458:2006 [IDT] i ISO 19458:2006 [IDT]) — 《Water quality — Sampling for microbiological analysis》。
该方法的原理是什么？
微生物样品必须以离开采样点时的状态到达实验室。由此产生本标准的三项措施：样品路径无菌（无菌容器、灭菌的龙头、操作时不接触与水接触的表面）、采样后立即终止消毒剂作用（瓶中加还原剂）以及抑制数量随时间的变化（冷却并尽快开始检测）。
测量范围和准确度是多少？
范围：采样方案策划、微生物分析采样程序、运输、处理以及检测开始前的保存；常用体积：测定的微生物类别少于五类时500 ml即可（每类接种最多100 ml）；特殊体积：瓶装水每个参数250 ml；军团菌或沙门氏菌最多1 l；病毒、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、阿米巴——10升至数百升，现场富集；氯的失活——标准中的数字：每1 mg氯需7.1 mg五水硫代硫酸钠；每100 ml瓶容量加0.1 ml 18 mg/ml溶液；至少中和2 mg/l，最多5 mg/l游离氯。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 7 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
无菌瓶、浸入式采样用瓶的防护、喷灯或浸酒精的棉签、带冰袋的便携式冷藏箱、带绳索或链条的重锤、采样杆、长钳或不同深度的采样器、现场测量仪器、无菌手套。
该检测用于哪些场景？
供人类消费用水的微生物检测采样——从用户龙头和管网点采样；娱乐用水和游泳池水，包括浸入式采样；检测消毒效果——采样点选在反应已完成处；军团菌属和沙门氏菌属采样（最多1 l）以及瓶装水（每个参数250 ml）；病毒、贾第鞭毛虫、隐孢子虫和阿米巴采样——在现场用滤筒富集；记录采样人员的能力。
需要采取哪些安全防护措施？
从湖泊、游泳池和水库浸入式采样——有落水风险；使用带绳重锤并做好保护；用火焰对龙头灭菌——在检查井或设备间内有明火；不得在易燃材料和蒸气附近使用；军团菌样品在热水系统中采集——有烫伤和接触气溶胶的风险；专业提示：用异丙醇对瓶子外表面消毒不适用于产芽孢细菌的检测；专业提示：金属瓶盖，尤其是铝盖，在高压灭菌后可能呈现毒性——耐热密封衬垫可防止这一点。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 19458。