🍎 检测可可脂和纯巧克力中的可可脂等同物（CBE）——用非氯化溶剂从 10–40 g 磨碎的巧克力中提取脂肪，0.5 mg/ml 溶液采用冷柱头进样和 FID 的高分辨毛细管气相色谱分离，以有证可可脂 IRMM-801 为参照鉴定甘油三酯 POP、POS、POO、SOS 和 SOO，并由 POP、POS 和 SOS 的比例（归一化至 100 %）检查是否满足 POP < 44.025 − 0.733 × SOS；定性结果：CBE 存在或不存在，PN-EN ISO 23275-1

食品化学 PN-EN ISO 23275-1

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 23275-1:2006 法文版样本（“Corps gras d’origines animale et végétale — Équivalents au beurre de cacao dans le beurre de cacao et dans le chocolat de ménage — Partie 1: Détermination de la présence d’équivalents au beurre de cacao”）：标题页、目录、前言、引言、第 1–9 章以及第 10 章至 10.2 b)（检测器响应因子）——样本止于第 5 页。文本中缺少 7.2 的结尾和公式 (2) 的分母。其余要求、精密度、试验报告以及含实验室间试验结果的附录 A 我们未读；其标题来自目录。

根据 ISO 23275-1:2006 的文本。本标准由 ISO/TC 34“食品”第 SC 11 分委员会“动植物油脂”制定；ISO 23275 系列分两部分：1——可可脂等同物存在的检测，2——其定量测定。引言：可可脂等同物（CBE）是巧克力中替代可可脂的脂肪的统称；其组成和性质与可可脂非常相似，因此极难定量，有时甚至难以检出；按定义，它们是月桂酸含量低、富含 POP、POS 和 SOS 型对称单不饱和甘油三酯、可与可可脂混溶且仅通过精炼和分提获得的脂肪；在欧盟，根据指令 2000/36/EC，可单独或混合使用来自婆罗双树（婆罗洲脂、tengkawang，Shorea spp.）、油棕（Elaeis guineensis、E. olifera）、娑罗树（Shorea robusta）、乳木果（Butyrospermum parkii）、山竹子（kokum gurgi，Garcinia indica）和芒果仁（Mangifera indica）的脂肪。第 1 部分描述这些脂肪的检测（限制仅涉及纯婆罗双树脂样品），第 2 部分描述在 5 % 水平上的可靠定量，与指令 2000/36/EC 的限值一致。为两部分编制了“CoCal-1”工具包：经验证的方法、用于校准的有证可可脂标准物质 IRMM-801 以及计算结果的电子表格（信息见 IRMM 网站）。范围（1）：用高分辨毛细管气相色谱（HR-GC）分析甘油三酯并进行回归分析，检测可可脂和纯巧克力中的 CBE；本方法可检出可可脂中 2 % 的 CBE，假定巧克力含 30 % 脂肪时相当于巧克力中约 0.4 % CBE。定义（2.1）：CBE——按本部分程序检出的脂肪；定性结果：存在/不存在（是/否）。原理（3）：可可脂或从巧克力中提取的脂肪经 HR-GC 按分子量和不饱和度分离为甘油三酯组分；通过对各甘油三酯比例进行线性回归检出 CBE 的存在。试剂（4）：有证可可脂标准物质 IRMM-801，用于校准和系统适用性检查；提取溶剂——非氯化溶剂，如乙醚、正庚烷、异辛烷。仪器（5）：读数 0.1 mg 的天平；55 °C 烘箱（或加热块）；电机位于容器上方的食品加工机，以免样品熔化；旋转蒸发仪；1 ml 移液管；20 ml 容量瓶；10 µl 以内的微量注射器或自动进样器；带冷柱头进样和 FID 的色谱仪——若能达到 10.2 的结果，也可用其他进样器（分流、PTV、移动针）；经验证的条件：25–30 m × 0.25 mm 熔融石英柱，固定相为 50 % 聚苯基甲基硅氧烷，膜厚 0.1–0.15 µm，程序升温 100 °C → 340 °C、30 °C/min，载气氦或氢（≥ 99.999 %）；数据系统。取样（6）：不属于本方法，推荐程序见 ISO 5555。制备（7）：IRMM-801 安瓿在烘箱中加热至熔化，倒转混合至少 20 s，转入密封小瓶中冷藏；约 200 g 巧克力冷却至变硬后磨成细屑，混匀后冷藏。步骤（8）：用两至三份各 100 ml 溶剂从 10–40 g 磨碎的巧克力中提取脂肪，离心、倾析、蒸发并在氮气流中干燥（其他方法——索氏提取、超临界 CO2、微波——在结果相同时可接受）；样品（可可脂、巧克力脂肪、IRMM-801）在烘箱中完全熔化，有沉淀时在烘箱中过滤，移液管加热至约 55 °C，以避免脂肪部分分提；约 0.2 g 溶于 20 ml 溶剂，取此溶液 1 ml 定容至 20 ml，柱头进样 0.5–1.0 µl（0.5 mg/ml）；通过与 IRMM-801 比较保留时间鉴定五种主要甘油三酯——POP（1,3-二棕榈酰-2-油酰甘油）、POS、POO、SOS 和 SOO（按碳数递增洗脱，碳数相同时按不饱和度递增）。计算（9）：由 IRMM-801 分析得出响应因子 Fi——将标准物质中五种甘油三酯的面积比例与证书给出的质量比例比较；样品中 POP、POS 和 SOS 的比例 wtest,i = Fi × Atest,i / Σ(Fi × Atest,i) × 100 %，保留两位小数。判定（9.3）：可可脂的变异由直线 POP = 43.734 − 0.733 × SOS 描述（残差标准差 0.125），且 POP + POS + SOS = 100 %；POP 和 SOS 变化很大时，可可脂中的 POS 含量几乎不变，而与 CBE 的混合物偏离这条“可可脂直线”的程度，随其 POS 与可可脂 POS 的差异增大而增大；该直线由 74 个真正可可脂样品的谱图确定；在 99 % 的分析中纯可可脂满足 POP < 44.025 − 0.733 × SOS，POP 值更高则表示样品不是纯可可脂；用 IRMM-801 校准可将实验室结果与该数据库关联，而无需确定自己的直线。要求（10）：色谱细节取决于设备、色谱柱、进样方式和样品量——满足系统适用性要求即可更改；这些要求必须用 IRMM-801 检查：POS/POO 和 SOS/SOO 两对峰的分离度至少 1.0（否则优化条件），在正常运行的系统中五种主要甘油三酯的响应因子在 0.80–1.20 范围内。

状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 搜索中（检索词“23275-1”，03.10.2026），PN-EN ISO 23275-1:2009（波兰文版，“Wprowadza: EN ISO 23275-1:2008 [IDT], ISO 23275-1:2006 [IDT]”）没有废止标注；PN-ISO 23275-1:2007（波兰文版）——“Wycofana i zastąpiona przez PN-EN ISO 23275-1:2009 – wersja angielska”，而后者——已废止并被波兰文版 PN-EN ISO 23275-1:2009 取代。波兰文版卡片：发布日期 03.12.2009，19 页，KT 92 Nasion Roślin Oleistych, Tłuszczów Roślinnych i Zwierzęcych oraz ich Produktów Ubocznych，没有废止标注。在 iTeh 目录中（03.10.2026 读取），ISO 23275-1:2006 状态为“Published”，阶段 90.92（国际标准待修订），日期 24.09.2026。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，03.10.2026 读取）。编号 23275-1 出现在 3 家实验室的 4 条记录中：AB 285、AB 370（2）、AB 705。在现行 PCA 文件中（03.10.2026 读取；AB 285 第 28 版 13.01.2026，AB 705 第 21 版 06.05.2026，AB 370 第 25 版 04.08.2026），该编号出现在同样 3 家实验室的 3 行中（AB 370 的两条记录——脂肪中的结果和产品中的计算结果——在文件中共用一行引用）；各文件页码标记数等于 PDF 页数，无重复；对 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件的检索未发现数据库副本之外的实验室。形式为“PN-EN ISO 23275-1:2009”——单独引用（AB 705）或与 PN-EN ISO 23275-2:2010 及报告“Report EUR 22666 EN:2007”一并引用（AB 285、AB 370）。这些项目均未暂停。“实验室”标签（检索词“PN-EN ISO 23275-1”）显示全部 3 家实验室——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上通过标签查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。对象：纯巧克力（AB 705），无添加巧克力（AB 285），巧克力、涂层巧克力、可可（AB 370）。特性：可可脂等同物的存在（AB 705——仅引用第 1 部分）；根据甘油三酯组成测定可可脂等同物（CBE）和乳脂（MF）的存在及含量——CBE 和 MF 均为 (4–50) g/100 g 脂肪，也以计算得出的 g/100 g 产品表示（AB 370）；CBE 的存在及含量 (1.30–5.00) g CBE/100 g 巧克力，乳脂 (3.80–28.27) g/100 g 脂肪（AB 285）。技术：GC-FID。

容易得到看似正确结果的地方。结果性质：第 1 部分仅给出是/否（2.1）；数值由第 2 部分给出——AB 705 的“存在”对应第 1 部分，“含量”对应第 2 部分，即两部分分工而非互相替代。限值：可检出可可脂中 2 % 的 CBE，仅在假定 30 % 脂肪时相当于巧克力中约 0.4 %（1）——脂肪含量不同的巧克力此数值会变化；第 2 部分的注释中同一限值给为 0.6 %。基质：本标准涉及可可脂和纯巧克力（1）；AB 370 还检测涂层巧克力和可可，AB 285 和 AB 370 还检测乳脂——本标准未描述该特性（两家实验室对此还引用了我们未读的报告 EUR 22666 EN:2007）。婆罗双树脂：引言指出纯婆罗双树脂样品存在限制。校准：IRMM-801 是系统检查的必需品（10.2）——POS/POO 和 SOS/SOO 分离度 ≥ 1.0，响应因子 0.80–1.20；否则依据 POP–SOS 直线的判定就失去与 74 个样品数据库的关联。制备：脂肪须完全熔化，移液管加热至约 55 °C，因为部分分提会改变甘油三酯谱图（8.2）。

我们未提供的内容。精密度数据、试验报告以及附录 A 的实验室间试验结果未予引用——它们在样本之外。指令 2000/36/EC 和报告 EUR 22666 EN:2007 的内容我们未提供。

方法原理

可可脂或从巧克力中提取的脂肪（0.5 mg/ml 溶液）经带 FID 的高分辨毛细管气相色谱分离为甘油三酯 POP、POS、POO、SOS 和 SOO，以有证可可脂 IRMM-801 为参照进行鉴定和校准。POP、POS 和 SOS 的比例归一化至 100 %；在 99 % 的分析中纯可可脂满足 POP < 44.025 − 0.733 × SOS，POP 值更高表示存在可可脂等同物（结果为是/否）。

应用领域

• 检测可可脂和纯巧克力中的可可脂等同物——可可脂中 CBE 自 2 % 起（含 30 % 脂肪的巧克力中约 0.4 %）（1）
• 检查可可脂的纯度（9.3）
• 纯巧克力、无添加巧克力、巧克力、涂层巧克力和可可——PCA 中 3 家实验室认可范围内的项目

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 23275-1:2009

标准名称（波兰语）

Oleje i tłuszcze roślinne oraz zwierzęce — Odpowiedniki tłuszczu kakaowego w tłuszczu kakaowym i w czekoladzie naturalnej — Część 1: Oznaczanie obecności odpowiedników tłuszczu kakaowego

标准名称（英语）

Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate — Part 1: Determination of the presence of cocoa butter equivalents

分步操作程序

1. 制备

   IRMM-801 熔化并混匀；约 200 g 巧克力冷却后磨碎（7）。PN-EN ISO 23275-1:2009 在 PKN 中无废止标注（03.10.2026）。

2. 脂肪提取

   10–40 g 巧克力，2–3 × 100 ml 溶剂，蒸发，氮气下干燥（8.1）。

3. 色谱

   约 0.2 g / 20 ml，1 ml / 20 ml（0.5 mg/ml），进样 0.5–1.0 µl；以 IRMM-801 为参照鉴定 POP、POS、POO、SOS、SOO（8.2、8.3）。

4. 计算

   由 IRMM-801 得出响应因子；POP、POS、SOS 比例保留两位小数（9.1、9.2）。

5. 判定

   POP < 44.025 − 0.733 × SOS——纯可可脂；更高——存在 CBE（9.3）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 乙醚和正庚烷——易燃；在通风橱中操作，远离火源（第 4 章警告）
• 氢气作载气——可燃；管路须密封

常见问题