🍎 可可脂和纯巧克力中可可脂等同物（CBE）的定量测定——4–5 g 磨碎的巧克力在沸腾盐酸中水解 15 min，残渣干燥后用石油醚在索氏提取器中提取 4 h（脂肪含量以 g/100 g 表示），0.5 mg/ml 溶液中的脂肪经带 FID 的高分辨毛细管气相色谱分离为甘油三酯 POP、POS、POO、SOS 和 SOO，以有证可可脂 IRMM-801 校准，可可脂中 CBE 含量用 PLS 回归方程计算：37.439 + 1.175 POP − 1.939 POS − 0.121 POO + 0.982 SOS − 0.097 SOO（g/100 g），并换算为巧克力中的含量，PN-EN ISO 23275-2

食品化学 PN-EN ISO 23275-2

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 23275-2:2006 样本（英文文本）：标题页、目录、前言、引言、第 1–8 章以及第 9 章至 9.3（可可脂中的 CBE 含量）——样本止于第 5 页。文本中缺少 5.3 和 7.2 的部分内容（开头几个词）以及目录中 8.1/8.2 的标题。9.4（换算为巧克力）、要求、精密度、试验报告和附录 A 我们未读；其标题来自目录。

根据 ISO 23275-2:2006 的文本。本标准由 ISO/TC 34“食品”第 SC 11 分委员会“动植物油脂”制定；系列分两部分——1：存在的检测，2：可可脂等同物的定量测定。引言（与第 1 部分相同）：可可脂等同物（CBE）是巧克力中替代可可脂的脂肪，与可可脂非常相似，因此极难定量，有时甚至难以检出；月桂酸含量低，富含对称单不饱和甘油三酯 POP、POS 和 SOS，仅通过精炼和分提获得；在欧盟，根据指令 2000/36/EC，可使用来自婆罗双树、油棕、娑罗树、乳木果、山竹子（kokum gurgi）和芒果仁的脂肪；第 2 部分可在 5 % 水平上可靠测定这些脂肪，与该指令的限值一致；“CoCal-1”工具包包括两部分经验证的方法、有证可可脂 IRMM-801 和用于计算的电子表格。范围（1）：用甘油三酯的高分辨毛细管气相色谱（HR-GC）和偏最小二乘（PLS）回归定量测定可可脂和纯巧克力中的 CBE；注：CBE 的存在可用第 1 部分的程序确定至 0.6 % 的水平（巧克力含 30 % 脂肪时）——两种方法的甘油三酯数量和计算方式不同：检测是对三种主要组分进行线性回归，定量是对五种组分进行 PLS 回归。定义（2）：CBE——在可可脂和巧克力中检出的脂肪；可可脂中的 CBE 含量——以 g/100 g 可可脂表示；巧克力中的 CBE 含量——以 g/100 g 巧克力表示（两者均按本部分程序测定）。原理（3）：可可脂或巧克力脂肪经 HR-GC 按分子量和不饱和度分离为甘油三酯组分，用 PLS 回归根据各组分比例估算添加的 CBE 数量。试剂（4）：IRMM-801；非氯化溶剂（如乙醚、正庚烷、异辛烷）；8 mol/l 盐酸；15 cm 折叠滤纸。仪器（5）：读数 0.1 mg 的天平；55 °C 烘箱（或加热块）；磨碎器——电机位于容器上方的食品加工机；20 ml 容量瓶；1 ml 移液管；10 µl 以内的微量注射器或自动进样器；带冷柱头进样和 FID 的色谱仪（若能达到 10.2 的结果，也可用其他进样器）；经验证的条件：色谱柱 25–30 m × 0.25 mm，50 % 聚苯基甲基硅氧烷，膜厚 0.1–0.15 µm，100 → 340 °C、30 °C/min，氦或氢 ≥ 99.999 %（附录 A 实验室间试验中的其他色谱柱和条件）；数据系统；索氏提取器（虹吸管约 100 ml，滤筒 33 mm × 88 mm，250 ml 锥形瓶，加热套）。取样（6）：不属于本方法，推荐程序见 ISO 5555。制备（7）：IRMM-801 在烘箱中熔化，倒转混合至少 20 s，转入密封小瓶，冷藏；巧克力冷却至变硬，磨成细颗粒，混匀，装于密封瓶中冷藏。提取和脂肪（8.1）：4–5 g 巧克力置于烧杯中，缓慢加入 45 ml 沸水至均匀悬浮，加 55 ml 8 mol/l HCl 和沸石，盖上表面皿缓慢加热至沸腾并微沸 15 min；用 100 ml 水冲洗表面皿，经折叠滤纸过滤，用水洗涤至滤液无氯化物；带残渣的滤纸置于滤筒中，于 100 °C 干燥 2 h，盖上玻璃棉；带沸石的烧瓶于 100 °C 干燥 1 h，在干燥器中冷却后称量；在索氏提取器中提取——用三份各 50 ml 石油醚将烧杯和表面皿冲洗入滤筒，加热 4 h，虹吸次数超过 30 次；蒸除溶剂，烧瓶于 102 °C 干燥至恒重（1.5 h；恒重——再干燥 1 h 的损失 < 0.05 % 脂肪），冷却后称量；两次测定的结果应在 0.1 % 脂肪以内一致；脂肪含量 cfat = mfat × 100 / m（g/100 g），保留两位小数；其他提取方法（加速溶剂、超临界 CO2、微波）在结果相同时可接受。色谱（8.2、8.3）：样品在烘箱中完全熔化，有沉淀时在烘箱中过滤，移液管加热至约 55 °C（避免部分分提）；约 0.2 g 溶于 20 ml 溶剂，取 1 ml 定容至 20 ml，柱头进样 0.5–1.0 µl（0.5 mg/ml）；以 IRMM-801 为参照，根据保留时间鉴定 POP、POS、POO、SOS 和 SOO。计算（9）：面积比例 Pref,i = Aref,i / ΣAref,i × 100 %，响应因子 Fi = wref,i / Pref,i（wref,i——IRMM-801 证书给出的质量比例），保留两位小数；样品中五种甘油三酯的比例 wtest,i = Fi × Atest,i / Σ(Fi × Atest,i) × 100 %；可可脂中的 CBE 含量（POP + POS + POO + SOS + SOO = 100 %）：cCBE,CB = 37.439 + 1.175 × POP − 1.939 × POS − 0.121 × POO + 0.982 × SOS − 0.097 × SOO，以 g/100 g 表示，保留两位小数；该方程由 798 个含 10 %、15 % 和 20 % CBE 的可可脂–CBE 混合物组成的校准集建立；强制使用 IRMM-801 进行校准和系统检查可确保实验室间结果的可比性；在 99 % 的情况下，当混合物使用商品脂肪时，预测误差相对于可可脂不超过 ± 2.60 %。

状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 搜索中（检索词“23275-2”，03.10.2026），PN-EN ISO 23275-2:2010（波兰文版，“Wprowadza: EN ISO 23275-2:2008 [IDT], ISO 23275-2:2006 [IDT]”）没有废止标注；PN-ISO 23275-2:2007（波兰文版）——“Wycofana i zastąpiona przez PN-EN ISO 23275-2:2009 – wersja angielska”，而后者——已废止并被波兰文版 PN-EN ISO 23275-2:2010 取代。卡片：发布日期 25.01.2010，19 页，KT 92 Nasion Roślin Oleistych, Tłuszczów Roślinnych i Zwierzęcych oraz ich Produktów Ubocznych，没有废止标注。在 iTeh 目录中（03.10.2026 读取），ISO 23275-2:2006 状态为“Published”，阶段 90.92（国际标准待修订），日期 24.09.2026。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，03.10.2026 读取）。编号 23275-2 出现在 3 家实验室的 4 条记录中：AB 285、AB 370（2）、AB 705。在现行 PCA 文件中（03.10.2026 读取；AB 285 第 28 版 13.01.2026，AB 705 第 21 版 06.05.2026，AB 370 第 25 版 04.08.2026），该编号出现在同样 3 家实验室的 3 行中；各文件页码标记数等于 PDF 页数，无重复；对 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件的检索未发现数据库副本之外的实验室。形式为“PN-EN ISO 23275-2:2010”——单独引用（AB 705）或与 PN-EN ISO 23275-1:2009 及报告“Report EUR 22666 EN:2007”一并引用（AB 285、AB 370）。这些项目均未暂停。“实验室”标签（检索词“PN-EN ISO 23275-2”）显示全部 3 家实验室——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上通过标签查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。对象：纯巧克力（AB 705），无添加巧克力（AB 285），巧克力、涂层巧克力、可可（AB 370）。特性和范围：可可脂等同物（CBE）含量 (1.0–7.0) %（AB 705）；CBE 含量 (1.30–5.00) g CBE/100 g 巧克力，乳脂 (3.80–28.27) g/100 g 脂肪，以及计算得出的 g/100 g 产品（AB 285）；CBE 和乳脂的存在及含量 (4–50) g/100 g 脂肪，也以计算得出的 g/100 g 产品表示（AB 370）。技术：GC-FID。

容易得到看似正确结果的地方。校准：PLS 方程是在含 10 %、15 % 和 20 % CBE 的混合物上建立的（9.3）——AB 370 的范围至 50 g/100 g 脂肪，AB 705 自 1.0 %，AB 285 自 1.30 g/100 g 巧克力；在此区间之外，我们所读的标准部分未提及预测误差。误差：99 % 的情况下相对于可可脂为 ± 2.60 %（9.3）——结果须结合该误差解读，尤其在接近 5 % 限值时。单位：可可脂中的含量（g/100 g 可可脂）和巧克力中的含量（g/100 g 巧克力）是不同的量（2.2）——AB 370 给出 g/100 g 脂肪，AB 285 给出 g/100 g 巧克力，AB 705 给出“%”。脂肪：换算为巧克力需要酸水解后索氏提取所得的脂肪含量（8.1）；两次脂肪测定应在 0.1 % 以内一致。基质：本标准涉及可可脂和纯巧克力（1）；涂层巧克力和可可（AB 370）以及乳脂（AB 285、AB 370）超出其范围——对乳脂，两个项目还引用了我们未读的报告 EUR 22666 EN:2007。存在：检测（是/否）属于第 1 部分，基于三种甘油三酯和线性回归——第 2 部分的数值不能替代第 1 部分的判定。

我们未提供的内容。CBE 含量换算为巧克力（9.4）、系统适用性要求、精密度数据和实验室间试验结果未予引用——它们在样本之外。指令 2000/36/EC 和报告 EUR 22666 EN:2007 的内容我们未提供。

方法原理

巧克力经盐酸水解后，用石油醚在索氏提取器中提取脂肪（同时测定脂肪含量）。0.5 mg/ml 脂肪溶液经带 FID 的高分辨毛细管气相色谱分离为甘油三酯 POP、POS、POO、SOS 和 SOO，响应因子取自有证可可脂 IRMM-801。将五种甘油三酯的比例（合计 100 %）代入 PLS 回归方程，得出以 g/100 g 可可脂表示的 CBE 含量；换算为巧克力时考虑脂肪含量。

应用领域

• 在指令 2000/36/EC 的 5 % 限值水平上定量测定可可脂和纯巧克力中的可可脂等同物（引言，1）
• 酸水解和索氏提取后巧克力的脂肪含量（8.1）
• 纯巧克力、无添加巧克力、巧克力、涂层巧克力和可可——PCA 中 3 家实验室认可范围内的项目

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 23275-2:2010

标准名称（波兰语）

Oleje i tłuszcze roślinne oraz zwierzęce — Odpowiedniki tłuszczu kakaowego w tłuszczu kakaowym i w czekoladzie naturalnej — Część 2: Oznaczanie ilościowe odpowiedników tłuszczu kakaowego

标准名称（英语）

Animal and vegetable fats and oils — Cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate — Part 2: Quantification of cocoa butter equivalents

分步操作程序

1. 制备

   IRMM-801 熔化并混匀；巧克力冷却后磨碎（7）。PN-EN ISO 23275-2:2010 在 PKN 中无废止标注（03.10.2026）。

2. 水解和脂肪

   4–5 g + 45 ml 沸水 + 55 ml 8 mol/l HCl，沸腾 15 min，过滤，100 °C 干燥 2 h，索氏提取 4 h，102 °C 至恒重；cfat 以 g/100 g 表示（8.1）。

3. 色谱

   0.5 mg/ml，进样 0.5–1.0 µl；以 IRMM-801 为参照鉴定 POP、POS、POO、SOS、SOO（8.2、8.3）。

4. 比例

   由 IRMM-801 得 Fi = wref,i / Pref,i；五种甘油三酯的 wtest,i，合计 100 %（9.1、9.2）。

5. 结果

   PLS 方程 → g CBE/100 g 可可脂；按 9.4 换算为巧克力（在样本之外）（9.3）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 沸腾的 8 mol/l 盐酸——在通风橱中操作，保护眼睛和双手
• 石油醚和乙醚——易燃；提取时远离火源（第 4 章警告）

常见问题