🧫 36 °C 菌落总数
以倾注平板法在酵母浸膏琼脂中培养 44±4 h，测定 36±2 °C 下可生长微生物的菌落总数。指示水中潜在致病微生物。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 6222:2004
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 10
- 各步骤合计时间: 5 小时 20 分钟
- 结果: cfu/1 mL（菌落形成单位）
- 判据（饮用水）: 无异常变化（实践中 <20 cfu/mL）
- 培养温度: 36 ± 2 °C
概述
36 °C 菌落总数（HPC 36 —— 36 °C 异养菌平板计数）是 22 °C 测定的补充指标，提供不同的诊断信息。在 36±2 °C（接近体温）下生长的微生物，是可能源自人或动物、更适应温血宿主条件的菌群，其在饮用水中的卫生学意义大于 22 °C 的菌群。
若 36 °C 计数相对 22 °C 偏高，可能提示水体受到新近的人或动物源生物污染、消毒不到位或供水管网污染。结果应与 22 °C 结果一并解读 —— HPC 36 °C / HPC 22 °C 的比值可提供关于污染性质的重要信息。
分析步骤与 22 °C 测定完全相同 —— YEA 琼脂倾注平板法 —— 区别在于培养条件为 36±2 °C、44±4 小时（约 2 天）。培养时间较短是因为嗜温菌在其最适温度下生长更快。
按卫生部条例，该指标为饮用水必测项目，规定值为「无异常变化」。实验室实践参考值：处理后水 <20 cfu/mL，管网中最高 100 cfu/mL。
方法原理
原理与 22 °C 测定相同（倾注平板法）：量取 1 mL 水样于无菌培养皿中，倒入 15–20 mL 熔化并冷却至 44–47 °C 的酵母浸膏琼脂（YEA），凝固后于 36±2 °C 培养 44±4 小时。36 °C 接近人体温度，有利于嗜温菌 —— 即潜在致病或指示性细菌 —— 的生长。菌落在琼脂表面与内部计数。
应用领域
- 饮用水质量控制（卫生部条例中的指示性指标）
- 卫生风险评价 —— 检出嗜温菌
- 水消毒效能监测（氯化、紫外）
- 瓶装水控制 —— 贮存期间的变化
- 医院与医疗机构用水检测
- 泳池水监测
- 与 HPC 36 °C / HPC 22 °C 比值对照 —— 诊断污染来源
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 结果 | cfu/1 mL（菌落形成单位） |
| 判据（饮用水） | 无异常变化（实践中 <20 cfu/mL） |
| 培养温度 | 36 ± 2 °C |
| 培养时间 | 44 ± 4 小时（约 2 天） |
| 取样量 | 1 mL（倾注平板） |
| 培养基 | 酵母浸膏琼脂（YEA） |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 6222:2004
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody — Oznaczanie ilościowe mikroorganizmów zdolnych do wzrostu — Oznaczanie ogólnej liczby kolonii metodą posiewu w agarze odżywczym
- 标准名称（英语）
- Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium
分步操作程序
-
配制 YEA 培养基
按厂家说明溶解 YEA 琼脂，121 °C/15 分钟高压灭菌，并在 44–47 °C 水浴中保温（最长 4 小时）。
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样品准备
轻轻混匀样品（颠倒瓶子 25 次），若含氯则用硫代硫酸钠中和。
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倾注平板接种
用移液器量取 1 mL 样品于无菌培养皿中（做平行两份）。疑似污染较重的样品应配制 10⁻¹、10⁻² 稀释液。
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倾注 YEA 琼脂
立即倒入 15–20 mL 熔化的 YEA（44–47 °C），以轻缓旋转（画「8」字）动作混匀，不得产生气泡。
-
凝固
将培养皿置于平整台面直至凝固（15–20 分钟），凝固前不得移动。
-
36 °C 培养
将培养皿倒置于 36±2 °C 培养箱中培养 44±4 小时（约 2 天）。
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判读结果
用放大镜或自动计数器计数全部菌落（表面与内部），最佳范围：每皿 15–300 个菌落。
-
结果计算
结果 = 平行样平均值 × 稀释倍数，以 cfu/1 mL 报告，保留两位有效数字。例如 127 → 130 cfu/mL。
-
诊断性解读
与 22 °C 结果比较。HPC 36 °C / HPC 22 °C > 1 提示外源性新近污染；< 1 则为天然水体菌群繁殖的典型情形。
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质量控制与处置
阴性对照：仅含琼脂的培养皿；温度控制：培养箱内记录仪；判读后 121 °C/30 分钟高压灭菌。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 36 °C 培养箱 | Binder BD 56、Memmert IN30、Pol-Eko CLN 32 | 5 000–15 000 PLN |
| 44–47 °C 水浴 | Memmert WNB 7、Julabo TW2 | 3 000–8 000 PLN |
| 高压灭菌器 | Tuttnauer ELV 2540、Systec VX-40 | 20 000–45 000 PLN |
| 1 mL 移液器 | Eppendorf Research Plus 100–1000 µL、Gilson Pipetman L | 800–2 500 PLN/支 |
| 90 mm 无菌培养皿 | 聚苯乙烯，一次性，无菌。Citotest、Gosselin | 150–300 PLN/包（500 个） |
| 放大镜／菌落计数器 | Stuart SC6+、Interscience Scan 500 | 1 500–25 000 PLN |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 酵母浸膏琼脂（YEA） | — | 成分：蛋白胨 5 g/L、酵母浸粉 2,5 g/L、葡萄糖 1 g/L、琼脂 9–18 g/L。厂商：Merck、Oxoid、Biokar |
| 硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃） | 7772-98-7 | 用于中和自来水样品中的氯，1,8% 片剂 |
| 缓冲蛋白胨水 | — | 用于稀释样品，无菌 9 mL 管装，0,1% 蛋白胨 + 0,85% NaCl |
职业健康与安全
- 水样可能含嗜温病原体 —— 佩戴丁腈手套、护目镜并穿实验服
- 熔化的琼脂（44–47 °C）—— 倾注时有烫伤风险
- 嗜温菌落可能含条件致病菌 —— 处置前须高压灭菌
- 使用本生灯时须谨慎 —— 实验室内有明火
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 6222:2004 — 《Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium》。
该方法的原理是什么？
原理与 22 °C 测定相同（倾注平板法）：量取 1 mL 水样于无菌培养皿中，倒入 15–20 mL 熔化并冷却至 44–47 °C 的酵母浸膏琼脂（YEA），凝固后于 36±2 °C 培养 44±4 小时。36 °C 接近人体温度，有利于嗜温菌 —— 即潜在致病或指示性细菌 —— 的生长。
测量范围和准确度是多少？
结果：cfu/1 mL（菌落形成单位）；判据（饮用水）：无异常变化（实践中 <20 cfu/mL）；培养温度：36 ± 2 °C；培养时间：44 ± 4 小时（约 2 天）。
完成检测需要多长时间？
各步骤所列时间合计约为 5 小时 20 分钟。整个程序共 10 个步骤。
需要哪些设备？
36 °C 培养箱、44–47 °C 水浴、高压灭菌器、1 mL 移液器、90 mm 无菌培养皿、放大镜／菌落计数器。核心仪器的参考价格（36 °C 培养箱）：5 000–15 000 PLN。
该检测用于哪些场景？
饮用水质量控制（卫生部条例中的指示性指标）；卫生风险评价 —— 检出嗜温菌；水消毒效能监测（氯化、紫外）；瓶装水控制 —— 贮存期间的变化；医院与医疗机构用水检测；泳池水监测；与 HPC 36 °C / HPC 22 °C 比值对照 —— 诊断污染来源。
需要采取哪些安全防护措施？
水样可能含嗜温病原体 —— 佩戴丁腈手套、护目镜并穿实验服；熔化的琼脂（44–47 °C）—— 倾注时有烫伤风险；嗜温菌落可能含条件致病菌 —— 处置前须高压灭菌；使用本生灯时须谨慎 —— 实验室内有明火。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 6222。