🧫 22 °C 菌落总数
以倾注平板法在酵母浸膏琼脂中培养 68±4 h，测定 22±2 °C 下可生长微生物的菌落总数。饮用水质量指标。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 6222:2004
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 10
- 各步骤合计时间: 5 小时 19 分钟
- 结果: cfu/1 mL（菌落形成单位）
- 判据（饮用水）: 无异常变化（实践中 <100 cfu/mL）
- 培养温度: 22 ± 2 °C
概述
22 °C 菌落总数（HPC 22 —— 异养菌平板计数）是饮用水的基础微生物指标，反映水的总体卫生状况与处理工艺效能。结果以每 1 mL 样品中的菌落形成单位（cfu）表示。
在 22±2 °C 培养 68±4 小时后生长的微生物主要是环境（土著）菌，天然存在于水与土壤中，包括假单胞菌、气单胞菌、黄杆菌、柄杆菌、节杆菌等。饮用水中含适量此类菌属正常现象，但数量突然升高可能提示：管网二次污染、水滞留、管道破损、生物膜形成或消毒失效。
按 PN-EN ISO 6222:2004 的方法采用倾注平板法 —— 量取 1 mL 样品加入无菌培养皿，倒入熔化并冷却的酵母浸膏琼脂（YEA），轻轻混匀，凝固后于 22±2 °C 培养 68±4 小时。菌落在琼脂表面与内部均可生长。
饮用水的规定值：波兰卫生部条例未规定具体数值，但要求「无异常变化」。实践中：<100 cfu/mL 视为可接受，>200 cfu/mL 属警示信号。
方法原理
倾注平板法：用移液器量取 1 mL 水样于无菌培养皿中，倒入 15–20 mL 熔化并冷却至 44–47 °C 的酵母浸膏琼脂（YEA），以轻缓旋转动作使样品与琼脂混匀。培养基凝固后于 22±2 °C 培养 68±4 小时。在此条件下可生长的微生物形成肉眼可见的菌落，用放大镜或自动计数器计数。
应用领域
- 饮用水质量控制（卫生部条例中的指示性指标）
- 供水管网监测 —— 发现二次污染
- 水处理工艺效能评价
- 瓶装水与泉水控制
- 泳池水检测
- 地下水取水口监测
- 内部供水系统滞水状况评价
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 结果 | cfu/1 mL（菌落形成单位） |
| 判据（饮用水） | 无异常变化（实践中 <100 cfu/mL） |
| 培养温度 | 22 ± 2 °C |
| 培养时间 | 68 ± 4 小时（约 3 天） |
| 取样量 | 1 mL（倾注平板） |
| 培养基 | 酵母浸膏琼脂（YEA） |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 6222:2004
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody — Oznaczanie ilościowe mikroorganizmów zdolnych do wzrostu — Oznaczanie ogólnej liczby kolonii metodą posiewu w agarze odżywczym
- 标准名称（英语）
- Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium
分步操作程序
-
配制 YEA 培养基
将 YEA 琼脂溶于蒸馏水，121 °C/15 分钟高压灭菌，灭菌后置于 44–47 °C 水浴中保温（最长 4 小时）。
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样品准备
轻轻混匀水样（颠倒瓶子 25 次）。含氯时使用硫代硫酸钠片剂中和。
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倾注平板接种
用移液器量取 1 mL 样品于无菌培养皿中。需稀释时：取 1 mL 加入 9 mL 蛋白胨水，依次稀释。
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倾注琼脂
向样品中倒入 15–20 mL 冷却至 44–47 °C 的熔化 YEA，立即以轻缓旋转（画「8」字）动作混匀，避免产生气泡。
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凝固
将培养皿置于水平台面直至琼脂完全凝固（约 15–20 分钟）。每个样品做平行两份。
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22 °C 培养
将培养皿倒置（底朝上）于 22±2 °C 培养箱中培养 68±4 小时（约 3 天），不必要时不要打开培养箱。
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判读结果
用带照明的放大镜或自动计数器计数全部可见菌落（表面与内部）。最佳计数范围：每皿 15–300 个菌落。
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结果计算
结果 = 平行样算术平均值 × 稀释倍数，以 cfu/1 mL 报告，保留两位有效数字。
-
质量控制
阴性对照：仅含琼脂的培养皿（培养基无菌性）；每 10 个样品做平行样；培养箱温度控制（记录仪）。
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废弃处置
判读后将培养皿 121 °C/30 分钟高压灭菌，按感染性废物处置。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 22 °C 培养箱 | Binder KB 53、Memmert IPP 110、Pol-Eko CLW 53（带制冷） | 8 000–20 000 PLN |
| 45–47 °C 水浴 | Memmert WNB 7、Julabo TW2 —— 用于保温熔化的琼脂 | 3 000–8 000 PLN |
| 高压灭菌器 | Tuttnauer ELV 2540、Systec VX-40 | 20 000–45 000 PLN |
| 1 mL 移液器 | Eppendorf Research Plus 100–1000 µL、Gilson Pipetman L | 800–2 500 PLN/支 |
| 90 mm 无菌培养皿 | 聚苯乙烯，一次性，无菌。Citotest、Gosselin | 150–300 PLN/包（500 个） |
| 放大镜／菌落计数器 | Stuart SC6+、Interscience Scan 500 | 1 500–25 000 PLN |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 酵母浸膏琼脂（YEA） | — | 成分：蛋白胨 5 g/L、酵母浸粉 2,5 g/L、葡萄糖 1 g/L、琼脂 9–18 g/L。厂商：Merck、Oxoid、Biokar |
| 硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃） | 7772-98-7 | 用于中和自来水样品中的氯 |
| 缓冲蛋白胨水 | — | 用于稀释样品，无菌 9 mL 管装 |
职业健康与安全
- 水样可能含病原体 —— 佩戴丁腈手套、护目镜并穿实验服
- 熔化的琼脂（44–47 °C）—— 有烫伤风险，使用耐热手套
- 平板上的菌落按潜在感染性材料处理 —— 处置前须高压灭菌
- 使用本生灯 —— 须谨慎，不得无人看管
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 6222:2004 — 《Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium》。
该方法的原理是什么？
倾注平板法：用移液器量取 1 mL 水样于无菌培养皿中，倒入 15–20 mL 熔化并冷却至 44–47 °C 的酵母浸膏琼脂（YEA），以轻缓旋转动作使样品与琼脂混匀。培养基凝固后于 22±2 °C 培养 68±4 小时。
测量范围和准确度是多少？
结果：cfu/1 mL（菌落形成单位）；判据（饮用水）：无异常变化（实践中 <100 cfu/mL）；培养温度：22 ± 2 °C；培养时间：68 ± 4 小时（约 3 天）。
完成检测需要多长时间？
各步骤所列时间合计约为 5 小时 19 分钟。整个程序共 10 个步骤。
需要哪些设备？
22 °C 培养箱、45–47 °C 水浴、高压灭菌器、1 mL 移液器、90 mm 无菌培养皿、放大镜／菌落计数器。核心仪器的参考价格（22 °C 培养箱）：8 000–20 000 PLN。
该检测用于哪些场景？
饮用水质量控制（卫生部条例中的指示性指标）；供水管网监测 —— 发现二次污染；水处理工艺效能评价；瓶装水与泉水控制；泳池水检测；地下水取水口监测；内部供水系统滞水状况评价。
需要采取哪些安全防护措施？
水样可能含病原体 —— 佩戴丁腈手套、护目镜并穿实验服；熔化的琼脂（44–47 °C）—— 有烫伤风险，使用耐热手套；平板上的菌落按潜在感染性材料处理 —— 处置前须高压灭菌；使用本生灯 —— 须谨慎，不得无人看管。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 6222。