🍎 各类乳粉、干态冰淇淋混合料（包括存在其他碳水化合物和还原性物质时）和再制干酪中乳糖含量——至少1 g试样溶于40–50 °C水中，用亚铁氰化钾、硫酸锌和NaOH沉淀蛋白，过滤，用β-半乳糖苷酶水解乳糖，再用β-半乳糖脱氢酶和NAD+氧化半乳糖，在1 cm比色池中于340 nm测定NADH吸光度，校正样品中原有的半乳糖；用乳糖标准溶液核查回收率100 % ± 2 %；结果以质量百分数表示；PN-ISO 5765-2:2015-09

食品化学 PN-ISO 5765-2

概述

本标准涵盖的内容。我们阅读的是ISO 5765-2:2002 | IDF 79-2:2002（2002年9月1日第一版，英文文本）的iTeh样本——PN-ISO 5765-2:2015-09等同采用ISO 5765-2:2002（PKN检索）：ISO和IDF前言、引言、第1–6章及第7章至7.5.2——样本止于第5页。测定本身（7.6，包括加样方案）、计算（8）、精密度（9）、试验报告（10）以及规范性附录A（酶法分析的良好实验室规范规则）我们未阅读；其标题来自目录。

依据ISO 5765-2:2002文本。本标准由ISO/TC 34“食品”第SC 5分委员会“乳和乳制品”与IDF联合编制，并与AOAC国际合作（ISO/IDF/AOAC乳糖和乳酸测定联合行动组）。引言：本方法利用乳糖的半乳糖部分，与利用葡萄糖部分的ISO 5765-1互补；选择取决于样品中葡萄糖或半乳糖的含量——葡萄糖含量远高于乳糖时推荐第2部分，半乳糖远高时推荐第1部分；两者含量都低时两种方法均可，两者含量都高时两种方法的准确度都显著降低；在热处理乳和乳制品中，部分乳糖可能已转化为乳果糖——第1部分不能测定，第2部分会将其部分测定为乳糖；在强烈热处理的产品（如灭菌乳）中，部分乳糖可能因美拉德反应与蛋白质结合，两种方法均无法测定；只有严格执行酶法分析的GLP规则（附录A）才能获得可靠结果。范围（1）：测定各类乳粉、存在其他碳水化合物和还原性物质的干态冰淇淋混合料以及再制干酪中的乳糖含量。定义（2.1）：乳糖含量——按本部分程序测定的物质的质量分数，以质量百分数表示。原理（3）：将试样溶液或悬浮液去蛋白；纯化后的提取液与β-半乳糖苷酶（将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖）和在NAD+存在下的β-半乳糖脱氢酶（将半乳糖氧化为半乳糖酸，NAD+还原为NADH）反应；由340 nm处吸光度测定NADH量；校正分析开始时样品中原有的半乳糖后，乳糖含量与NADH量成正比。试剂（4）：配制酶溶液的水至少经两次玻璃蒸馏；如所用酶悬液活性与规定不同，按比例增减加样方案中的体积；试剂4.4和4.6–4.8可购买商品试剂盒（脚注举例）；亚铁氰化钾——3.6 g三水合物溶于100 ml；硫酸锌——7.2 g七水合物溶于100 ml；NaOH 0.1 mol/l；柠檬酸盐缓冲液pH 6.6 ± 0.1（柠檬酸三钠、柠檬酸、硫酸镁；0–5 °C保存3个月）；磷酸盐（KH2PO4）缓冲液pH 8.6 ± 0.1（8周）；柠檬酸盐缓冲液中的NAD+——25 mg溶于5 ml（3周）；β-半乳糖苷酶悬液（来自大肠埃希菌，EC 3.2.1.23），溶于3.2 mol/l硫酸铵，至少60 U/ml，0–5 °C约保存12个月，使用时置于冰中；β-半乳糖脱氢酶悬液（来自荧光假单胞菌，EC 1.1.1.48），至少8 U/ml，至少保存6个月，使用时置于冰中；乳糖一水合物标准溶液0.8 mg/ml——400 mg在87 °C干燥至恒重的乳糖溶于500 ml水，0–5 °C保存2天。仪器（5）：分析天平（1 mg，可读至0.1 mg）、移液管、100 ml容量瓶、直径约15 cm的中速滤纸、可在340 nm测量并配1 cm比色池的分光光度计、比色池用塑料搅拌片、20–25 °C水浴（仅在室温低于20 °C时需要）、制备干酪悬浮液的匀浆器、(87 ± 2) °C烘箱、干酪研磨或擦碎器具。采样（6）不属于本方法——推荐ISO 707。程序核查（7.1）：在使用新批次NAD+、β-半乳糖苷酶或脱氢酶时，这些试剂未使用存放超过2周时，工作中断后重新开始时，或情况需要时，进行乳糖回收试验——将5.0和10.0 ml标准溶液分别移入100 ml容量瓶，然后按样品处理；考虑乳糖纯度后，两种稀释的回收率均应在100 % ± 2 %内；超出时检查试剂、操作技术、移液管和分光光度计，并重复试验。试样制备（7.2）：乳粉和冰淇淋混合料——在容积约为样品两倍的密封容器中反复振摇和倒转混匀；再制干酪——去除外皮、表面涂层或霉变层，研磨或擦碎（最好两次），混匀；与等量水制成悬浮液。试样（7.3）：称取1 g或以上，精确至1 mg，用至少20 ml 40–50 °C的水溶解，转入100 ml容量瓶并稀释至约60 ml；比色池中乳糖量最好为5–100 µg；吸光度A2（样品中的半乳糖）为0.1–0.4；乳糖低于0.2 %时需要大于1 g的试样——此时沉淀的脂肪、蛋白质等物质的体积可能显著影响溶液体积。试剂空白，双份（7.4）。去蛋白（7.5）：依次加入5.0 ml亚铁氰化钾、5.0 ml硫酸锌和10.0 ml NaOH，每次加入后充分旋摇，定容至100 ml，静置30 min且过滤前不再混匀，过滤并弃去初滤液。

状态（截至2026年10月3日）。PKN检索（检索词“PN-ISO 5765-2”，2026年10月3日）得到一条结果：PN-ISO 5765-2:2015-09——波兰文版，“采用：ISO 5765-2:2002 [IDT]”，无撤销标注。

实验室数量及引用形式（认可范围数据库副本，数据截至2026年9月17日，2026年10月3日读取）。编号5765-2出现在2家实验室的2条记录中：AB 285和AB 1447。在PCA现行文件中（2026年10月3日读取；AB 285第28版，2026年1月13日；AB 1447第16版，2026年6月1日）该编号出现在同样的2家实验室；每份文件的页码标记数等于PDF页数，无重复；检索2026年10月3日从BIP下载的全部PCA文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法：“PN-ISO 5765-2:2015-09”（AB 285）和“PN-ISO 5765-2:2015-09 IDF 79-2:2002”（AB 1447）。上述项目均未暂停。“实验室”选项卡（检索词“PN-ISO 5765-2”）显示两家实验室——2026年10月3日在labcoda.pl生产服务器上通过选项卡查询核实。

实验室检测内容（PCA项目）。AB 285：乳和乳制品——乳糖含量（0.09–80.96）%，酶-分光光度法。AB 1447：乳和乳制品——乳糖含量（0.10–85.00）%，酶法。

容易得到貌似正确结果的环节。基质：本标准范围为乳粉、干态冰淇淋混合料和再制干酪（1），而两个PCA项目笼统写为“乳和乳制品”——对其他乳制品，报告应说明采用本方法的依据。部分选择：葡萄糖高——第2部分，半乳糖高——第1部分；两者都高时两种方法的准确度都显著降低（引言）。热处理产品：乳果糖会被部分测定为乳糖，美拉德反应结合的乳糖无法检出（引言）。试剂：酶悬液置于冰中，新批次或较长时间存放后核查回收率100 % ± 2 %（4.7、4.8、7.1）。试样：比色池中乳糖最好为5–100 µg，A2为0.1–0.4；乳糖低于0.2 %时需要更大试样，沉淀体积会影响溶液体积（7.3）——两家实验室范围的下限（0.09和0.10 %）正处于此区域。去蛋白：试剂加入顺序以及过滤前静置30 min不再混匀（7.5.1）。标准：乳糖一水合物在87 °C干燥，溶液最多保存2天（4.9）。

我们未提供的内容。加样方案和测量条件（7.6）、计算公式（8）、精密度数据（9）以及附录A的GLP规则我们未予转述——它们在样本范围之外。本条目不概述ISO 5765-1或ISO 707。

方法原理

样品溶液用亚铁氰化钾、硫酸锌和氢氧化钠去蛋白，滤液中的乳糖由β-半乳糖苷酶分解为葡萄糖和半乳糖。随后半乳糖由β-半乳糖脱氢酶氧化，NAD+被还原为NADH，通过340 nm处吸光度测定其量。扣除水解前样品中原有的半乳糖后，由NADH的增量计算乳糖。

应用领域

• 各类乳粉（1）
• 干态冰淇淋混合料，包括含其他碳水化合物和还原性物质的（1）
• 再制干酪（1、7.2.2）
• 乳和乳制品——乳糖含量——PCA中2家实验室的2条认可范围记录

关键参数

标准

标准编号

PN-ISO 5765-2:2015-09

标准名称（波兰语）

Mleko w proszku, mieszanki lodziarskie w proszku i sery topione — Oznaczanie zawartości laktozy — Część 2: Metoda enzymatyczna wykorzystująca galaktozową część laktozy

标准名称（英语）

Dried milk, dried ice-mixes and processed cheese — Determination of lactose content — Part 2: Enzymatic method utilizing the galactose moiety of the lactose

分步操作程序

1. 程序核查

   使用新试剂或中断后，乳糖标准回收率100 % ± 2 %（7.1）。PN-ISO 5765-2:2015-09——无撤销标注（PKN，2026年10月3日）。

2. 试样制备

   粉末——在密封容器中混匀；再制干酪——研磨并与水制成悬浮液（7.2）。

3. 试样

   ≥ 1 g，40–50 °C水，100 ml容量瓶，约60 ml（7.3）；试剂空白双份（7.4）。

4. 去蛋白

   亚铁氰化钾、硫酸锌、NaOH，定容至100 ml，30 min，过滤并弃去初滤液（7.5）。

5. 酶法测定

   β-半乳糖苷酶和脱氢酶加NAD+，340 nm吸光度，校正游离半乳糖（3、7.6——在样本范围之外）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 酶悬液在0–5 °C保存，使用时将容器浸于碎冰中（4.7、4.8）

常见问题