🍎 防腐剂（山梨酸盐、苯甲酸盐）— HPLC
以 HPLC-UV 测定食品中的山梨酸和苯甲酸（防腐剂 E200、E210）。批准使用的食品添加剂合规性控制。
要点速览
- 标准: PN-EN 12856:2001
- 类别: 食品化学
- 操作步骤数: 5
- 各步骤合计时间: 1 小时 5 分钟
- 所测物质: 山梨酸（E200）、苯甲酸（E210）
- 测量范围: 5–5000 mg/kg
- 检出限: 2 mg/kg
概述
山梨酸（E200）和苯甲酸（E210）及其盐类是食品中最常用的防腐剂。其允许浓度由欧盟 1333/2008 号法规规定：山梨酸 150–2000 mg/kg（视产品类别而定），苯甲酸 150–2000 mg/kg。
HPLC-UV 法包括从食品样品中提取防腐剂、净化、在 C18 柱上分离并进行紫外检测：山梨酸 255 nm，苯甲酸 228 nm。该方法简便、快速、选择性好。
方法原理
将样品与水一起均质、超声提取，并用 Carrez 试剂去蛋白。过滤（0,22 µm）后在 C18 柱上以缓冲流动相（乙酸铵 pH 4,2 + 甲醇）进行 HPLC 分析。在 228 nm（苯甲酸）和 255 nm（山梨酸）处紫外检测。用校准曲线定量。
应用领域
- 食品防腐剂使用合规性控制（欧盟 1333/2008 号法规）
- 软饮料和果汁分析
- 水果制品（果酱、果冻）分析
- 乳制品（奶酪、酸奶）质量控制
- 酱料、调味汁和腌渍液分析
- 未申报防腐剂的检出
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 所测物质 | 山梨酸（E200）、苯甲酸（E210） |
| 测量范围 | 5–5000 mg/kg |
| 检出限 | 2 mg/kg |
| 波长 | 228 nm（苯甲酸）、255 nm（山梨酸） |
| 精密度（CV） | 2–5% |
标准
- 标准编号
- PN-EN 12856:2001
- 标准名称（波兰语）
- Artykuły żywnościowe — Oznaczanie kwasu sorbowego i benzoesowego metodą HPLC
- 标准名称（英语）
- Foodstuffs — Determination of acesulfame-K, aspartame and saccharin — HPLC method
分步操作程序
-
提取
称取 5 g 样品，加入 40 mL 水，超声 15 min。用 Carrez I+II 去蛋白。定容至 50 mL。
-
过滤
经 0,22 µm PVDF 滤器过滤至小瓶。
-
校准
标准液：山梨酸与苯甲酸混合液 5、10、50、100、500 mg/L。
-
HPLC 分析
C18 柱，20 mM 乙酸铵 pH 4,2 / MeOH 梯度，1 mL/min，UV 228+255 nm。
-
计算
由校准曲线得浓度，换算为产品中的 mg/kg。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 带 UV/DAD 检测器的 HPLC 系统 | Agilent 1260、Shimadzu Nexera、Waters Alliance | 200 000–400 000 PLN |
| C18 色谱柱 | Agilent Zorbax Eclipse Plus C18，150×4,6 mm，5 µm | 1 500–3 500 PLN |
| 超声波清洗槽 | Bandelin Sonorex RK 510 | 3 000–8 000 PLN |
| 0,22 µm 针头滤器 | PVDF 或尼龙，ø 13 mm | 1–3 PLN / 只 |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 山梨酸（标准品） | 110-44-1 | 纯度 ≥99%，CRM |
| 苯甲酸（标准品） | 65-85-0 | 纯度 ≥99,5%，CRM |
| 乙酸铵 | 631-61-8 | 流动相：20 mmol/L，pH 4,2 |
| 甲醇 HPLC 级 | 67-56-1 | 流动相组分（梯度 10–60%） |
职业健康与安全
- 甲醇 — 有毒、易燃。必须在通风柜中操作。
- 山梨酸 — 有刺激性，须戴丁腈手套
- HPLC 废液 — 收集于有机废液容器
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN 12856:2001 — 《Foodstuffs — Determination of acesulfame-K, aspartame and saccharin — HPLC method》。
该方法的原理是什么？
将样品与水一起均质、超声提取，并用 Carrez 试剂去蛋白。过滤（0,22 µm）后在 C18 柱上以缓冲流动相（乙酸铵 pH 4,2 + 甲醇）进行 HPLC 分析。
测量范围和准确度是多少？
所测物质：山梨酸（E200）、苯甲酸（E210）；测量范围：5–5000 mg/kg；检出限：2 mg/kg；波长：228 nm（苯甲酸）、255 nm（山梨酸）。
完成检测需要多长时间？
各步骤所列时间合计约为 1 小时 5 分钟。整个程序共 5 个步骤。
需要哪些设备？
带 UV/DAD 检测器的 HPLC 系统、C18 色谱柱、超声波清洗槽、0,22 µm 针头滤器。核心仪器的参考价格（带 UV/DAD 检测器的 HPLC 系统）：200 000–400 000 PLN。
该检测用于哪些场景？
食品防腐剂使用合规性控制（欧盟 1333/2008 号法规）；软饮料和果汁分析；水果制品（果酱、果冻）分析；乳制品（奶酪、酸奶）质量控制；酱料、调味汁和腌渍液分析；未申报防腐剂的检出。
需要采取哪些安全防护措施？
甲醇 — 有毒、易燃。必须在通风柜中操作。；山梨酸 — 有刺激性，须戴丁腈手套；HPLC 废液 — 收集于有机废液容器。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN 12856。