🍎 用 HPLC 测定普通和脱咖啡因生咖啡豆、焙炒咖啡豆以及普通和脱咖啡因咖啡提取物（速溶咖啡）中的咖啡因含量——取 1 g（提取物 0.5 g）在氧化镁存在下用 90 °C 水提取 20 min，滤液的一份在苯基修饰硅胶小柱上净化，C18 柱以甲醇/水 30 + 70 于 40 °C 分离，UV 254–280 nm 检测（咖啡因最大吸收 272 nm），结果以每 100 g 干物质中咖啡因克数表示；PN-ISO 10095:1997（01.08.2018 撤销）

食品化学 PN-ISO 10095

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 10095:1992 样本（第一版，1992-01-15，英文文本）——PN-ISO 10095:1997 以等效方式 [EQV] 采用该标准（PKN 卡片）。样本包含整份文件：前言、第 1–11 章和附录 A（参考文献），共 6 页。样本文本为扫描件，有字符识别错误；数字和单位根据句子上下文读取。

依据 ISO 10095:1992 正文。本标准由 ISO/TC 34“农产食品”第 SC 15 分委员会“咖啡”制定。范围（1）：用 HPLC 测定普通和脱咖啡因生咖啡豆、焙炒咖啡豆以及普通和脱咖啡因咖啡提取物粉中的咖啡因含量；参考方法（紫外吸收光谱法）为 ISO 4052:1983。引用文件（2）：ISO 1447:1978（生咖啡水分，常规方法）、ISO 3726:1983（速溶咖啡 70 °C 减压质量损失）、ISO 6673:1983（生咖啡 105 °C 质量损失）。原理（3）：在氧化镁存在下用 90 °C 水从试样中提取咖啡因；过滤，取一份在苯基修饰硅胶微柱上净化；用带 UV 检测的 HPLC 测定。试剂（4）：HPLC 级甲醇；0.3 mol/l 氨溶液与甲醇 90 + 10；洗脱溶剂甲醇/水/乙酸 75 + 25 + 1；流动相甲醇/水 30 + 70（600 ml 甲醇定容至 2 l，经 0.45 µm 过滤；改变甲醇浓度可调节保留时间）；乙醇/水 1 + 4；氧化镁；咖啡因储备液 0.5 g/l（125 mg 置于 250 ml 棕色容量瓶，用乙醇/水溶解；冷藏可保存一个月）；标准溶液 A 0.010 g/l（2 ml 定容至 100 ml）——用于脱咖啡因产品，标准溶液 B 0.05 g/l（5 ml 定容至 50 ml）——用于普通产品，均当天配制。仪器（5）：配 254–280 nm UV 检测器的 HPLC——优选接近 280 nm 的波长，咖啡因最大吸收在 272 nm；C18 色谱柱，最好为球形颗粒，理论塔板数至少 5000（由标准峰计算）；标准规定的条件适用于 110 mm × 4.6 mm 色谱柱——其他色谱柱可能需要另一种流动相；3 ml 苯基硅胶净化柱，颗粒约 40 µm；焙炒咖啡磨、带冷却的生咖啡研磨机、630 µm 筛、0.45 µm 滤膜、可搅拌的 90 ± 1 °C 水浴、0.0001 g 天平、250 ml 螺盖瓶。取样（6）：袋装生咖啡按 ISO 4072，速溶咖啡按 ISO 6670。制备（7）：研磨至通过筛子。步骤（8）：干物质由水分计算，生咖啡按 ISO 1447 或 ISO 6673，速溶咖啡按 ISO 3726；试样量生咖啡或焙炒咖啡 1 g，提取物 0.5 g；瓶中加 4 ± 0.5 g 氧化镁和 100 g 水，称准至 0.1 g；90 °C 搅拌 20 min，冷却后再称重——质量应相等，否则用新试样重新提取；过滤；净化柱用 5 ml 甲醇和 5 ml 水活化，不得干涸；上样 2.0 ml 滤液（普通咖啡）或 10.0 ml（脱咖啡因）；用 2 × 2.5 ml 氨/甲醇洗涤，吹入约 20 ml 空气；用 7.5 ml 洗脱溶剂将咖啡因洗脱至容量瓶并定容；净化柱可用甲醇再生，最多 10 次；HPLC——流速 0.5–1.5 ml/min，柱温 40 °C（提高温度可改善分离，但不应超过 60 °C），进样 10 µl 试液及同体积标准溶液；比尔定律通常在 0.0250 g/l 以下成立，否则需做校准曲线。结果（9）：每 100 g 干物质中咖啡因克数，由样品和标准峰面积、标准浓度、试样量和干物质计算——普通产品（标准 B）和脱咖啡因产品（标准 A）分别用不同公式。精密度（10）：ISO/TC 34/SC 15 于 1987 年组织的实验室间试验，18 家实验室，设计按 ISO 5725；表 1——重复性限和再现性限（g/100 g）：焙炒咖啡——两个含量水平，0.07 和 0.34 以及 0.04 和 0.12（扫描件中水平值无法辨认），脱咖啡因焙炒咖啡（< 0.1 g/100 g）0.01 和 0.02，速溶咖啡 0.09 和 0.36，脱咖啡因速溶咖啡（< 0.3 g/100 g）0.02 和 0.03。试验报告（11）：方法、结果、本标准未规定的细节以及可能影响结果的情况。

状态（截至 03.10.2026）。PKN 卡片 PN-ISO 10095:1997（波兰文版）：状态“已撤销”，发布日期 28.10.1997，撤销日期 01.08.2018，等效采用 ISO 10095:1992 [EQV]，KT 229“咖啡、茶和可可”；卡片未指明替代标准。ISO 10095:1992 在 iTeh 目录中的状态我们未能读取（自 03.10.2026 起目录页面需要运行脚本的浏览器）。撤销对结果意味着什么：卡片未指明继任标准，因此没有更新的 PN 文本可供比较方法——实验室仍按同一文件工作，引用的是已撤销标准。

实验室数量及引用形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。编号 10095 出现在 2 家实验室的 4 条记录中：AB 285（1 条）和 AB 381（3 条）。在 PCA 现行文件中（读取于 03.10.2026；AB 285 第 28 版 13.01.2026，AB 381 第 29 版 10.06.2026）该编号出现于相同的 2 家实验室；每份文件的页码标记数等于 PDF 页数，无重复；检索 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件，未发现数据库副本以外的实验室。两家均为“PN-ISO 10095:1997”。这些项目均未被暂停。“实验室”标签页（关键词“PN-ISO 10095”）显示这两家实验室——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上通过标签页查询核实。

实验室检测内容（PCA 中的项目）。AB 285：焙炒咖啡和速溶咖啡——咖啡因 (0.03–4.40) g/100 g 干物质，HPLC-DAD。AB 381：研磨咖啡、咖啡豆和速溶咖啡——(30–45 000) mg/kg；脱咖啡因咖啡和咖啡饮料——(30–3500) mg/kg；能量饮料——(0.5–400) mg/l；HPLC-UV/DAD。

容易得到看似正确结果的地方。结果基准：本标准以 g/100 g 干物质表示咖啡因（9），干物质来自另一项标准（8.1）；以产品 mg/kg 表示的结果（AB 381）基准不同。提取：加热后瓶的质量应等于加热前——否则用新试样重新提取（8.3.3）。标准溶液：脱咖啡因产品对照标准 A（0.010 g/l）并用 10 ml 滤液计算，普通产品对照标准 B（0.05 g/l）并用 2 ml（4.8、8.4.2、9）。净化柱：上样前干涸须重新准备；再生最多 10 次（8.4.1，注 4）。线性：单点计算假定比尔定律在 0.0250 g/l 以下成立——有偏离时需做曲线（8.5.2，注 6）。色谱柱：条件是针对特定的 110 × 4.6 mm 色谱柱选定的；其他色谱柱可能需要调整流动相（5.2）。范围：本标准针对咖啡；咖啡饮料和能量饮料（AB 381）在其范围之外（1）。状态：PN-ISO 10095:1997 自 01.08.2018 起已撤销。

我们不提供的内容。第 9 章公式的确切形式我们不引用——样本扫描件中部分无法辨认。本条目不概述 ISO 4052、ISO 1447、ISO 3726、ISO 6673、ISO 4072、ISO 6670 和 ISO 5725 的内容。我们不提供脱咖啡因咖啡或饮料中咖啡因含量的要求。

方法原理

在氧化镁存在下用 90 °C 水从咖啡样品中提取咖啡因。滤液的一份在苯基修饰硅胶小柱上净化——用氨的甲醇溶液洗去不需要的化合物，再用甲醇、水和乙酸混合液洗脱咖啡因。咖啡因在 C18 柱上分离，用 UV 检测器在约 272–280 nm 测定；由样品和标准的峰面积计算含量，并以干物质为基准。

应用领域

• 普通和脱咖啡因生咖啡豆和焙炒咖啡豆中的咖啡因（1）
• 普通和脱咖啡因咖啡提取物粉（速溶咖啡）中的咖啡因（1）
• 焙炒、研磨、豆状、速溶和脱咖啡因咖啡以及咖啡饮料和能量饮料——PCA 中 2 家实验室的 4 条认可范围记录

关键参数

标准

标准编号

PN-ISO 10095:1997

标准名称（波兰语）

Kawa — Oznaczanie zawartości kofeiny — Metoda wykorzystująca wysoko sprawną chromatografię cieczową

标准名称（英语）

Coffee — Determination of caffeine content — Method using high-performance liquid chromatography

分步操作程序

1. 样品制备

   研磨至通过 630 µm 筛；干物质按 ISO 1447、ISO 6673 或 ISO 3726 测定（7、8.1）。PN-ISO 10095:1997——01.08.2018 撤销（PKN）。

2. 提取

   试样加 MgO 和 100 g 水，90 °C 20 min；加热前后检查质量（8.2、8.3）。

3. 净化

   苯基柱：活化、上样滤液、氨/甲醇洗涤、洗脱咖啡因（8.4）。

4. HPLC

   试液和标准各 10 µl，40 °C，0.5–1.5 ml/min（8.5）。

5. 结果

   g 咖啡因/100 g 干物质；普通咖啡用标准 B，脱咖啡因用标准 A（9）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 本标准无单独的安全章节；使用甲醇、氨溶液和乙酸（4.1–4.3）

常见问题