🍎 用 PCR 方法定量测定食品（也包括饲料和植物样品）中的转基因生物（GMO）——用实时 PCR 或竞争性 PCR 测定转基因特异序列和内源性分类单元特异序列，结果以二者之比的百分数表示；用适当数量的校准点和重复（例如 4 × 2 或 6 × 1），以标准物质（最好为有证标准物质）或行为等效的质粒或合成双链 DNA 校准；每个试样的 DNA 至少做两个平行；一致性判据——稀释液间偏差 ± 33 %，试样间 −50 % 至 +100 %（ΔCt = 1）；结果为“X ± 不确定度 %”，任一序列低于 LOQ 时为定性结果，PN-EN ISO 21570

食品化学 PN-EN ISO 21570

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 21570:2005 样本（英文文本，2005 年版）：目录、前言、引言、第 1–10 章以及附录 A 开头至表 A.3（玉米 adh1 基因方法）——样本止于第 7 页。附录 A 其余部分以及附录 B（GTS 40-3-2 大豆的 35S 筛选方法）、C（九种构建体特异性方法：GTS 40-3-2、Event176、MON 810、Bt11、GA21、T25）和 D（Bt11 和 MON 810 的转化事件特异性方法）我们未读；其标题来自目录。修订单 ISO 21570:2005/Amd 1:2013 我们读的是单独的 iTeh 样本（俄文文本，“Изменение 1”，2013-04-15）：从封面至 A.2.10（新增水稻方法）；修订单其余部分我们未读。AC:2007 和 Ap1:2007 我们未读。

根据 ISO 21570:2005 的文本。本标准由 CEN/TC 275“食品分析——横向方法”与 ISO/TC 34 合作制定（维也纳协议）。引言：转基因成分检测——采样、提取（ISO 21571）、纯化、定量、稀释、分析（PCR）；定性方法——ISO 21569，一般要求——ISO 24276；符合本标准可能需要 PCR 技术许可。范围（1）：用 PCR 定量检测食品中转基因生物方法的一般框架；规定目标序列特异性扩增的要求，以测定转基因来源 DNA 的相对含量并确认身份；为食品基质制定，也适用于其他基质，例如饲料和环境中的植物样品。引用文件（2）：ISO 21569:2005、ISO 21571、ISO 24276（制定中）、ISO 指南 32。原理（4）：测定目标序列，每种方法规定所用序列；竞争性 PCR 或实时 PCR；遗传元件的量相对于规定参照、校准物和对照表示，在方法动态范围和试样范围内；分析：扩增、检测和确认（实时 PCR 中同时进行），以校准物定量；通常为转基因序列与内源性分类单元特异序列之比（百分数），有时相对于基质量（例如食品中的转基因微生物）；校准物尽可能溯源至有证标准物质。试剂（5）：与方法中规定的相同或等效，否则用分子生物学级。步骤（7）：序列浓度应在方法动态范围内；注——分类单元特异性对照运行可评估 DNA 的质量、纯度和数量是否足够，尤其对复杂和深度加工的基质；每个试样的 DNA 至少做两个平行；对照按 ISO 24276 表 1；须考虑不同来源品种中序列的等位稳定性和拷贝数；用适当数量的校准点和重复校准（例如四个点各两个平行或六个点各一个），校准质量影响不确定度；若已证明行为等效，可用质粒或合成双链 DNA 的稀释液代替基因组标准物质；叠加性状可能导致转基因含量被高估；LOQ 按 ISO 24276；由单倍体基因组拷贝数计算含量取决于纯合或杂合；ΔΔCt 法仅在两项测定扩增效率非常接近时有效；以百分数报告时的最低一致性要求：试样内——剔除低于 LOQ 的测量，稀释液和测量之间的最大偏差为按稀释预期值 ± 33 %；试样间——结果相差不得超过 −50 % 至 +100 %（实时 PCR 中 ΔCt = 1；例如 1,0 % 和 2,0 %——可接受，0,9 % 和 2,1 %——不可接受）；为保证正确度，须选择并检验该转化事件、基质相近的标准物质（最好为有证标准物质）；没有时——使用已证明稳定性、均匀性和计量溯源性的内部物质；不确定度须满足校准要求（ISO 指南 32）。结果判读（8）：结果适合定量的条件是按 ISO 21569:2005，8.1 为阳性、抑制可忽略、数值明确、含量在动态范围内且校准正确；否则不适合；不确定度须小到足以得出结论；转基因序列或分类单元特异序列含量低于 LOQ 时，结果只能定性给出（“低于实际 LOQ”并附其数值属于定性结果）。结果表示（9，表 1）：转基因序列相对于分类单元特异序列的量，附不确定度（例如标准偏差），方法的 LOD 和 LOQ 以及实际 LOD 和 LOQ；四种情况——未检出该物种 DNA；检出物种 DNA 但未检出转基因 DNA（附实际 LOD）；两者均检出但至少一个序列低于 LOQ——“检出转基因 DNA”（附实际 LOQ）；两者均高于 LOQ——“转基因 DNA 含量为 X ± 不确定度 %”（附单位）；也可在考虑不确定度后说明含量高于或低于某一值。试验报告（10）：按 ISO 24276 和 ISO 21569，另加方法的 LOQ 及其基质、实际 LOQ、DNA 提取方法、标准物质、按第 9 章表示的结果。附录 A.1（玉米 adh1 基因，实时 PCR 绝对定量，Ct 值对已知拷贝数回归）：引物 ADH-FF3 和 ADH-RR4 各 300 nmol/l，探针 ADH1-MDO（FAM/TAMRA）200 nmol/l，扩增子 134 bp；MgCl2 25 mmol/l，dNTP 各 2,5 mmol/l；反应体积 25 µl，模板 DNA 至多 250 ng 于 5 µl 中，2X 预混液 12,5 µl。

根据修订单 ISO 21570:2005/AMD 1:2013。修订单由 ISO/TC 34 第 SC 16 分委员会制定。对 ISO 21569、ISO 21571 和 ISO 24276 的引用改为 2005 年和 2006 年版及其 2013 年修订单；7.1 及附录中各方法描述里的“ISO 24276:—”改为“ISO 24276:2006”。第 8–10 章重新表述。结果判读（8）：PCR 结果适合定量的条件是按 ISO 21569 的 8.1 为阳性、抑制不显著、测量明确、序列量在动态范围内且校准适当（7.3）——否则不适合；两个平行出现 +/− 时重做两个 PCR，若仍为 +/− 或 −/−，该试样判为阴性；两个试样出现 ± 时重新提取并检测两个新试样，若再次 +/−，该试样判为阴性（ISO 24276:2006，6.3）；不确定度须小到实验室可以作出有依据的结论；由 DNA 量计算转基因量时通常考虑纯合或杂合；转基因序列或分类单元特异序列低于 LOQ 时，结果只能定性给出，“低于实际 LOQ”并附其数值视为定性表述。结果表示（9）：转基因序列相对于分类单元特异序列的量，附不确定度（例如标准偏差或变异系数），方法的 LOD 和 LOQ 以及实际值；结果仅针对转基因目标；采用筛选方法和复杂基质时，建议注明信号可能来自非目标分类单元；可在考虑不确定度后将含量表述为高于或低于某值；表 1 给出四种表述：未检出物种 DNA（“对物种 X 未检出 DNA”）、未检出转基因序列（按 ISO 21569，附方法 LOD 和标准物质，若不能证明 DNA 量足够——另加说明并附样品 LOD）、检出序列但低于实际 LOQ、定量结果“x ± u %”。试验报告（10）：按 ISO 24276 和 ISO 21569，至少包括方法 LOQ 及所用物质、实际 LOQ、提取方法、扩增方法、标准物质、按第 9 章的结果、PCR 目标和方法类型（转化事件特异性、构建体特异性、筛选）、不确定度的确定方式。附录 A 新增 A.2——水稻特异性方法（蔗糖磷酸合酶基因 SPS，81 bp 片段，TaqMan 探针实时 PCR）：GMDL-SJTU 实验室间研究，12 家实验室，八个 0,5–10 ng 的盲样 DNA；重复性变异系数 14,29–20,98 %，再现性 10,84–31,92 %，偏倚 −26,53 % 至 +8,92 %；实验室内研究中在 0,05–1,00 ng 动态范围内偏倚低于 25 %；绝对 LOQ 0,01 ng/µl，未评估相对 LOQ；特异性：11 种植物中仅水稻为阳性，12 个水稻品种全部为阳性；按 ISO 21571 用 CTAB 提取；提取、PCR 配制和扩增分区进行，使用带滤芯吸头和无粉手套。俄文文本中 A.2.4 描述的是 FAM 标记探针和“水稻 adh1 DNA”的定量，而表 A.6 给出的是 HEX 标记的 SPS 探针——由于我们未读修订单的英文文本，对这些不一致不作判断。

现行状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 检索（关键词“21570”，03.10.2026）中 PN-EN ISO 21570:2007（波兰文版，“采用：EN ISO 21570:2005 [IDT]，ISO 21570:2005 [IDT]”）无撤销标注；另有补充件 PN-EN ISO 21570:2007/A1:2013-06（英文版）。目录卡：发布日期 12.01.2007，110 页，KT 287 生物技术，ICS 67.050，“替代 PN-EN ISO 21570:2006（英文版）”，补充件 PN-EN ISO 21570:2007/AC:2007P、PN-EN ISO 21570:2007/Ap1:2007P 和 PN-EN ISO 21570:2007/A1:2013-06E，无撤销标注。在 iTeh 目录中（读取于 03.10.2026）ISO 21570:2005 状态为“Published”，阶段 90.60（复审结束），附修订单 Amendment 1。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据载入至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。编号 21570 出现在 3 家实验室的 3 条记录中：AB 465、AB 704、AB 868。在现行 PCA 文件中（读取于 03.10.2026；AB 465 第 31 版，23.12.2025；AB 868 第 21 版，06.03.2026；AB 704 第 23 版，20.04.2026），该编号出现在同样 3 家实验室的 3 行中；每份文件的页码标记数等于 PDF 页数，无重复；检索 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法均为不带年份的“PN-EN ISO 21570”——附程序 PBD-74.00.00 和 PBD-75.00.00（AB 465）、附“实验室制定的程序”（AB 704）或与 PN-EN ISO 21569 并列（AB 868）。这些项目均未暂停。“实验室”标签页（关键词“PN-EN ISO 21570”）显示全部 3 家实验室——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上用标签页查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。AB 465：饲料（灵活范围）——转基因修饰含量，实时 PCR；AB 704：农产品、食品（灵活范围）——转基因生物是否存在及含量，实时 PCR；AB 868：农产品和动物饲料（灵活范围）——转基因修饰是否存在及含量，PCR 和实时 PCR。

容易得到表面正确结果的环节。关于单位：结果是转基因序列与分类单元特异序列之比（通常为百分数），不是质量分数——须注明单位（4.3、表 1）。关于 LOQ：两个序列中任一低于 LOQ 时不给出数值——只给出附实际 LOQ 的定性结果（8）。关于一致性：两个试样须在 −50 % 至 +100 % 范围内一致（1,0 和 2,0 %——可以，0,9 和 2,1 %——不可以），稀释液中的测量须在 ± 33 % 以内（7.5）。关于计算：ΔΔCt 仅在两个反应效率非常接近时可用；单倍体基因组拷贝数取决于合子性；叠加性状会高估含量（7.4）。关于校准：校准物溯源至有证标准物质，质粒或合成双链 DNA 只有在证明等效后才可使用（4.3、7.3）。关于基质：复杂和深度加工基质的 DNA 可能不适合定量——宜做分类单元特异性对照运行（7.1）。关于结果不一致：按修订单 A1:2013，重复后仍为 +/− 的试样判为阴性（A1 修订后的第 8 章）。关于报告：修订单 A1:2013 要求注明实际 LOQ、标准物质、方法类型以及不确定度的确定方式（A1 修订后的第 10 章）。关于版本：各实验室均引用不带年份的标准，并附自有程序；PKN 目录卡列出三个补充件，修订单 A1:2013 重写了第 8–10 章。

我们不提供的内容。adh1 方法其余部分以及附录 B–D 的方法我们不引用——它们在样本之外。AC:2007、Ap1:2007、修订单 A1:2013 其余部分以及 ISO 24276 的内容我们未读。我们不提供法规中的转基因标识阈值。

方法原理

在从样品中提取的 DNA 中，用实时 PCR（或竞争性 PCR）测定两个序列：转基因特异序列（筛选元件、构建体或转化事件）和内源性分类单元特异序列。拷贝数由用标准物质（最好为有证标准物质）绘制的校准曲线求得，转基因含量表示为两个序列之比的百分数，并附不确定度。只有两个序列都高于 LOQ、且试样和稀释液中的测量满足一致性判据时，才给出数值结果。

应用领域

• 食品中转基因生物的定量测定；也用于饲料和环境中的植物样品（1）
• 玉米（adh1、Event176、MON 810、Bt11、GA21、T25）和 GTS 40-3-2 大豆的实时 PCR 示例方法（附录 A–D）
• 饲料、农产品和食品——PCA 中 3 家实验室认可范围内的项目（实时 PCR）

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 21570:2007

标准名称（波兰语）

Artykuły żywnościowe — Metody wykrywania organizmów zmodyfikowanych genetycznie i produktów pochodnych — Metody ilościowe oparte na kwasach nukleinowych

标准名称（英语）

Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Quantitative nucleic acid based methods

分步操作程序

1. DNA

   按 ISO 21571 提取；加工基质做分类单元特异性对照运行（7.1）。PN-EN ISO 21570:2007 在 PKN 中无撤销标注（03.10.2026）。

2. 校准

   在工作范围内设置校准点和重复，校准物溯源至有证标准物质（7.3）。

3. 测量

   转基因序列和分类单元特异序列，每个试样至少两个平行，对照按 ISO 24276（7.1）。

4. 一致性和判读

   稀释液 ± 33 %，试样间 −50 %…+100 %；适合定量的条件（7.5、8）。

5. 结果

   按表 1：X ± 不确定度 %，或附实际 LOD/LOQ 的定性结果；报告中给出方法的 LOD 和 LOQ（9、10）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 操作 DNA 和 PCR 试剂——防止交叉污染
• 试剂按制造商的安全数据表使用

常见问题