⛽ 脂肪酸甲酯（FAME）中游离甘油、总甘油及单、双、三甘油酯的测定——80–125 mg 样品加四种内标（1,2,4-丁三醇、甘油单、双、三十九酸酯），在吡啶中用 MSTFA 硅烷化，以正庚烷稀释，在程序升温至 370 °C 的 15 m 色谱柱上用 GC-FID 分析；定量限游离甘油 0,001 %（m/m）、甘油酯 0,10 %（m/m）；总甘油由计算得出，PN-EN 14105

石油化工 PN-EN 14105

概述

本标准涵盖的内容。PKN 目录卡 PN-EN 14105:2025-04（英文版）的“范围”字段——其前两段重复下文所述正文第 1 章；标准正文我们读的是 SIST EN 14105:2024 样本（EN 14105:2024 文本未作修改），从标题页经目录、欧洲前言和第 1–8 章直至 9.7 开头（色谱柱性能核查，公式 1）（含）。样本之外的是第 10–13 章（结果的确定——积分、甘油校准函数、游离甘油、甘油酯、总甘油；结果表示；精密度；试验报告）以及附录 A–D（示例色谱图、校准函数的计算和示例、实验室间试验结果）。

依据 EN 14105:2024 文本（第 1–9.7 章）。本标准由 CEN/TC 307“油料种子、植物和动物油脂及其副产品——取样和分析方法”（秘书处 AFNOR）制定；取代 EN 14105:2020，唯一的技术变化是规定了称量准确度。范围（1）：测定 FAME 中的游离甘油和残留的单、双、三甘油酯，并计算总甘油；在所述条件下，游离甘油的定量限为 0,001 %（m/m），所有甘油酯为 0,10 %（m/m）；方法适用于由菜籽油、葵花籽油、大豆油、棕榈油、动物油脂及其混合物制得的 FAME，不适用于由椰子油和棕榈仁油（或添加了这些油）制得的 FAME，因为甘油酯峰重叠。注：“% (m/m)”指质量分数；在本标准通常的 GC 条件下，角鲨烯可能与甘油 α-单硬脂酸酯共流出——怀疑存在角鲨烯时可使用 EN 17057。警告：使用本标准可能涉及危险材料和操作；安全措施由使用者制定。引用文件（2）：EN ISO 5555 和 EN ISO 3170（取样）。原理（4）：在吡啶和 MSTFA（N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺）存在下，将甘油及单、双甘油酯转化为更易挥发、更稳定的硅烷化衍生物；硅烷化后的样品在短的薄膜毛细管柱上用柱头或等效进样器和火焰离子化检测器进行气相色谱分析；甘油在以 1,2,4-丁三醇为内标校准后测定，单、双、三甘油酯则直接相对于各组内标测定：甘油单十九酸酯（Mono C19）、双十九酸酯（Di C38）、三十九酸酯（Tri C57）。试剂（5）：MSTFA；含水不超过 0,1 % 的吡啶，保存于分子筛上（或硅烷化用吡啶）；四氢呋喃；正庚烷；甘油；1,2,4-丁三醇；Mono C19、Di C38、Tri C57。仪器（6）：带柱头或等效进样器、程序升温柱箱和 FID 的气相色谱仪；可程序升温至 400 °C 的毛细管柱（“高温”型），推荐：固定相 100 % 二甲基聚硅氧烷或 5 % 二苯基，长 15 m，内径 0,32 mm，膜厚 0,1 µm；A 级 50、20 和 10 ml 容量瓶；带螺帽和 PTFE 涂层隔垫的 10 ml 样品瓶；1 ml、100 µl 和 500 µl 精密移液器或注射器；10 ml 量筒；称量准确度 ± 1 mg 或更好、读数 ± 0,1 mg 或更好的天平；载气——氢气或氦气；辅助气体。溶液（7）：1,2,4-丁三醇 1 mg/ml（40–60 mg 溶于 50 ml 吡啶）；甘油 0,5 mg/ml（40–60 mg 溶于 10 ml 吡啶，再取 1 ml 定容至 10 ml）；参比甘油酯 2,5 mg/ml（每种 40–60 mg 置于同一 20 ml 四氢呋喃容量瓶中）——溶液在环境温度下须完全澄清，4 °C 保存后的沉淀须不加热自行溶解，4 °C 下稳定近 3 个月；市售单甘油酯混合物（单棕榈酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯等质量），约 100 mg 溶于 10 ml 吡啶——用于定位峰；四个校准溶液（表 1）：10、40、70 和 100 µl 甘油溶液加 80 µl 丁三醇溶液。取样（8）：按 EN ISO 5555 或 EN ISO 3170。条件（9.1）：根据色谱柱和载气调整；推荐分析时间约 30–35 min，以使三甘油酯流出；示例（表 2）：50 °C 保持 1 min，15 °C/min 升至 180 °C，7 °C/min 升至 230 °C，10 °C/min 升至 370 °C 保持 15 min，检测器 380 °C，氢气 80 kPa 或恒流约 2 ml/min，进样 1 µl。校准（9.2）：向每个校准溶液加 150 µl MSTFA，密封，振摇，室温放置 15 min，加 8 ml 正庚烷；仅分析程序的第一部分，至 230 °C；衍生化后的样品可稳定数小时，硅烷化标准溶液仅稳定一天。单甘油酯混合物（9.3）：200 µl 溶液加 150 µl MSTFA，避免接触水分，其余按 9.2 操作。样品（9.4）：称取 80–125 mg 均质样品（精确至 0,1 mg）于 10 ml 样品瓶；加 80 µl 丁三醇溶液、200 µl 参比甘油酯溶液、200 µl 吡啶和 200 µl MSTFA，避免接触水分；密封，振摇，15 min，加 8 ml 正庚烷，进样 1 µl；警告：用于将样品转移至自动进样瓶的聚乙烯巴斯德吸管可能产生与单甘油酯重叠的杂质峰——用这些吸管做空白进行检查。鉴别（9.5）：依据校准溶液的保留时间；甲酯和单甘油酯的流出区重叠，因此推荐注入硅烷化的市售混合物以鉴别单甘油酯；菜籽油和棕榈油 FAME（也含酯二聚体）的示例色谱图见附录 A。校准（9.6）：仅对甘油考察质量比与面积比的关系并确定校准函数；对甘油酯假定检测器在所考虑范围内响应线性。色谱柱核查（9.7）：每次分析均计算 Di C38 相对于 Tri C57 的相对响应因子 RF——RF = (A Di C38 / M Di C38) / (A Tri C57 / M Tri C57)，其中 A 为峰面积，M 为标准物质量（mg）。

状态（目录卡截至 03.10.2026）。PN-EN 14105:2025-04（英文版，发布于 02-04-2025，29 页，价格组 N）目录卡没有“已废止”标头：食品、农业和林业部门，KT 92 油料种子、植物和动物油脂及其副产品，ICS 67.200.10，“引入：EN 14105:2024 [IDT]”，“取代：PN-EN 14105:2021-05——英文版”。PN-EN 14105:2021-05（英文版）目录卡——“已废止” 02-04-2025，“被替代为：PN-EN 14105:2025-04”；它本身取代了波兰文版 PN-EN 14105:2012。2020 版与 2024 版之间，标准文本列出一项技术变化——规定称量准确度；对结果而言，这意味着要求天平准确度 ± 1 mg、读数 ± 0,1 mg（6.11）。PKN 检索（关键词“PN-EN 14105”，03.10.2026）还显示 2004 和 2012 版（波兰文版）以及 2011 版（英文版）。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。编号 14105 出现在 6 家实验室的 9 条记录中：AB 009、AB 387、AB 391、AB 484、AB 1668、AB 1679。在 PCA 网站上的现行范围中（读取于 03.10.2026，版本日期从 19.09.2025 到 30.07.2026），AB 391、AB 484、AB 1668 和 AB 1679 写作“PN-EN 14105:2025-04”，AB 009 和 AB 387 仅写编号不带年份（AB 387 在灵活范围中，“液体燃料 E”项下）。AB 009（第 28 版，03.06.2026）中含 PN-EN 14105 的整个条目以粗斜体排印，脚注写道：“应机构申请，以粗斜体标注的部分范围的认可自 03.06.2026 至 30.11.2026 暂停”（我们的翻译）——在读取之日该条目的认可处于暂停状态。不计暂停，持有该标准的实验室为 5 家。“实验室”选项卡（“PN-EN 14105”）显示全部 6 家，包括 AB 009；已于 03.10.2026 在生产服务器 labcoda.pl 上用选项卡查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的条目）。作为生物组分和液体生物燃料的脂肪酸甲酯（FAME），AB 387——灵活范围中的液体燃料；技术：GC-FID。范围（% m/m）：AB 391——游离甘油 0,005–0,050，单甘油酯 0,25–1,25，双、三甘油酯各 0,10–0,50；AB 484（两个条目）——游离甘油 0,001–0,050，单甘油酯 0,05–1,25 和 0,10–1,25，双甘油酯 0,05–0,50 和 0,10–0,50，三甘油酯 0,05–0,50 和 0,10–0,40；AB 1668——单甘油酯 0,10–1,00，双、三甘油酯 0,10–0,50，游离甘油 0,005–0,050；AB 1679——单甘油酯 0,25–0,70，双甘油酯 0,07–0,20，三甘油酯 0,05–0,20，游离甘油 0,002–0,200；AB 009（暂停条目）——游离甘油 0,002–0,050，单甘油酯 0,25–1,25，双甘油酯 0,10–0,50，三甘油酯 0,10–0,40；AB 387 未给出范围。AB 009、AB 1668 和 AB 1679 给出“由计算得出”的总甘油。甘油酯下限 0,05 %（AB 484、AB 1679）和 0,07 %（AB 1679）低于第 1 章的定量限（0,10 % m/m）；游离甘油下限（自 0,001 % 起）——等于或高于定量限。

容易得到看似正确结果的地方。硅烷化方面：标准要求吡啶含水不超过 0,1 % 并避免接触水分（5.2、9.3、9.4）；硅烷化标准仅稳定一天，样品——数小时（9.2）。鉴别方面：单甘油酯在甲酯区流出，角鲨烯可能与甘油 α-单硬脂酸酯一起流出——不注入硅烷化单甘油酯混合物，很容易把峰归属错（第 1 章注 2、9.5）；聚乙烯吸管会产生与单甘油酯重叠的峰（9.4）。色谱柱方面：程序过短不能洗脱三甘油酯——推荐分析时间 30–35 min（9.1）；Di C38 相对于 Tri C57 的相对响应因子（9.7 的 RF）在每次分析时计算，作为色谱柱性能核查——其评判标准在我们未读的部分。原料方面：含椰子油或棕榈仁油的 FAME 甘油酯峰重叠——本方法不适用（1）。计算方面：总甘油是计算量——其组分为游离甘油（相对于校准函数测量）和三类甘油酯（相对于三个内标测量，假定线性，9.6）；任一组分的误差都会传入总和。

我们未给出的内容。第 10–13 章和附录我们未读，因此不给出甘油酯折算为甘油的公式、积分方式、RF 的判据、精密度数据和试验报告要求。我们也不给出生物柴油中甘油的要求（如产品标准中的），因为其文本我们未读。

方法原理

甘油及单、双甘油酯在吡啶中用 MSTFA 转化为易挥发且稳定的三甲基硅烷基衍生物；用正庚烷稀释后，样品在程序升温至 370 °C 的短薄膜高温色谱柱上分离，使用柱头进样器和火焰离子化检测器。甘油由相对于 1,2,4-丁三醇的校准函数计算，各类甘油酯直接相对于各自内标（Mono C19、Di C38、Tri C57）计算；总甘油由结果计算。

应用领域

• 由菜籽油、葵花籽油、大豆油、棕榈油、动物油脂及其混合物制得的脂肪酸甲酯（FAME）——游离甘油、总甘油及单、双、三甘油酯（第 1 章）
• 不适用于由椰子油和棕榈仁油制得或添加了这些油的 FAME（第 1 章）
• 生物组分和液体生物燃料（FAME）、液体燃料——PCA 6 家实验室的认可范围，其中一家该条目暂停至 30.11.2026

关键参数

标准

标准编号

PN-EN 14105:2025-04

标准名称（波兰语）

Produkty przetwarzania olejów i tłuszczów — Estry metylowe kwasów tłuszczowych (FAME) — Oznaczanie zawartości wolnego i ogólnego glicerolu oraz mono-, di- i triacylogliceroli

标准名称（英语）

Fat and oil derivatives — Fatty acid methyl esters (FAME) — Determination of free and total glycerol and mono-, di-, triglyceride contents

分步操作程序

1. 溶液

   丁三醇 1 mg/ml、甘油 0,5 mg/ml（吡啶），参比甘油酯 2,5 mg/ml（THF）；四个校准溶液：10–100 µl 甘油加 80 µl 丁三醇。PN-EN 14105:2025-04 现行有效（PKN 目录卡截至 03.10.2026）。

2. 甘油校准

   150 µl MSTFA，密封，振摇，15 min，8 ml 正庚烷；分析至 230 °C；由质量比与面积比的关系得出校准函数。

3. 样品

   80–125 mg FAME；80 µl 丁三醇、200 µl 参比甘油酯、200 µl 吡啶、200 µl MSTFA，避免水分；15 min；8 ml 正庚烷；1 µl 注入 GC。

4. 鉴别与核查

   标准和硅烷化单甘油酯混合物的保留时间；每次分析计算 Di C38 相对于 Tri C57 的 RF。

5. 结果

   游离甘油由校准函数得出，甘油酯相对于内标，总甘油由计算得出。公式（第 10 章）在所读样本之外。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 使用本标准可能涉及危险材料和操作——安全措施由使用者制定（第 1 章警告）
• 吡啶、四氢呋喃和正庚烷易燃有害；MSTFA 遇水分反应——在通风橱中、在密封样品瓶中操作
• 氢气作载气——按色谱仪说明保证管路密封和安全措施

常见问题