🍎 生乳和热处理乳（全脂、半脱脂、脱脂、调味）及牛、绵羊、山羊乳基饮料以及复原乳粉中的碱性磷酸酶（ALP，EC 3.1.3.1）活性——连续直接动力学测定：pH 10二乙醇胺缓冲液中的非荧光底物2′-[2-苯并噻唑基]-6′-羟基苯并噻唑磷酸酯被ALP水解为强荧光产物，在38 °C读数3 min（第一分钟用于温度平衡），滤光片荧光计激发440 nm、发射520–560 nm，用Fluoroyellow®溶液0 / 17.24 / 34.48 × 10⁻³ µmol/l校准；结果以mU/l表示，上限7000 mU/l，超过时用无ALP乳稀释（95 °C加热5 min，< 10 mU/l）；PN-EN ISO 11816-1:2024-07
三句话速览
碱性磷酸酶是乳中的一种酶，在生乳和热处理乳中测定其活性。该检测依据 PN-EN ISO 11816-1:2024-07；测量范围（1）：至7000 mU/l；超过时用无ALP乳稀释。整个程序共 5 个步骤；主要用于：生乳和热处理乳——全脂、半脱脂、脱脂和调味乳（1）、牛、绵羊和山羊的乳及乳基饮料；复原后的乳粉（1）、乳以及乳和乳基饮料——碱性磷酸酶活性——PCA中2家实验室的2条认可范围记录。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 11816-1:2024-07
- 类别: 食品化学
- 操作步骤数: 5
- 状态（截至2026年10月3日）: PN-EN ISO 11816-1:2024-07（波兰文版和英文版），采用EN ISO 11816-1:2024和ISO 11816-1:2024 [IDT]；无撤销标注；PN-EN ISO 11816-1:2014-02于2024年7月1日撤销（PKN记录）
- 测量范围（1）: 至7000 mU/l；超过时用无ALP乳稀释
- 测量（4、6.1）: 38 °C，3 min（第2和第3分钟测量）；激发440 nm，发射520–560 nm
概述
本标准涵盖的内容。我们阅读的是ISO 11816-1:2024 | IDF 155-1:2024（第四版，2024-01，英文文本）的iTeh样本——PN-EN ISO 11816-1:2024-07等同采用EN ISO 11816-1:2024和ISO 11816-1:2024（PKN检索）：ISO和IDF前言、第1–8章及第9章至9.1.1——样本止于第4页。仪器性能核查的其余部分（9.1.2–9.1.5）、工作底物核查（9.2）、校准（9.3）、测定（9.4）、与试样相关的对照（9.5，包括干扰物质试验和耐热微生物磷酸酶对照试验）、计算（10）、精密度（11）、试验报告（12）以及附录A（实验室间研究）我们未阅读；其标题来自目录。
依据ISO 11816-1:2024文本。本标准由ISO/TC 34“食品”第SC 5分委员会“乳和乳制品”与IDF联合编制，并与CEN/TC 302合作（维也纳协议）；工作由IDF/ISO行动组P19完成。第四版代替第三版（ISO 11816-1 | IDF 155-1:2013）；主要变化：已停产的FLM200仪器由FLM300版本取代；按FLM300的新界面和电子系统修订了操作说明——测定方法和试验程序未变；加热块现已成为仪器的一部分。范围（1）：用荧光法测定生的和热处理的全脂乳、半脱脂乳、脱脂乳和调味乳中碱性磷酸酶（EC 3.1.3.1）活性；适用于牛、绵羊和山羊的乳及乳基饮料；也适用于复原后的乳粉；测定ALP的仪器可读取至7000 mU/l的活性，活性更高时用无ALP乳稀释，使结果不超过7000 mU/l。无规范性引用文件（2）。定义（3.1）：ALP活性——按规定程序测定的产品中该酶的活性，以每升样品的毫单位表示（mU/l）。原理（4）：连续荧光直接动力学测定；非荧光的芳香族单磷酸酯底物——2′-[2-苯并噻唑基]-6′-羟基苯并噻唑磷酸酯——在样品ALP存在下其磷酸基团水解，生成强荧光产物；使用Fluorophos®仪器在38 °C下测定3 min（底物和样品预孵育，然后多次动力学读取反应速率）；注：第一分钟是平衡期，实际测量从第二分钟开始到第三分钟结束（2 min）。试剂（5）：试剂5.1–5.5和仪器6.1–6.4（6.3.3除外）构成Fluorophos®检测系统（商品名仅供参考；能得到相同结果的等效产品可以使用）；Fluorophos®底物——每瓶144 mg（580 g/mol），未开封于2–8 °C保存2年，避光；二乙醇胺缓冲液c(DEA) = 2.4 mol/l，pH 10.0，每瓶240 ml，2–8 °C保存2年；工作底物——将一瓶缓冲液（240 ml）加入一瓶底物（144 mg），颠倒混合3 min（约1.0 mmol/l，pH 10），用棕色玻璃瓶，使用前在室温下至少放置30 min；用A/D试验（9.2）检查适用性——读数高于1200 FLU时不得使用；2–8 °C避光可稳定60天，38 °C下8 h；240 ml约可做115次测定；Fluoroyellow®校准溶液（2′-(2-苯并噻唑基)-6′-羟基苯并噻唑）溶于缓冲液——A 0、B 17.24 × 10⁻³和C 34.48 × 10⁻³ µmol/l，2–8 °C保存18个月；每日仪器对照溶液34.48 × 10⁻³ µmol/l。仪器（6）：带恒温比色皿架(38 ± 1) °C和直角光路的滤光片荧光计，激发440 nm，发射520–560 nm；12 × 75 mm一次性非荧光玻璃比色皿；2.0 ml分液器；0.075 ml正排量或空气置换移液器——移液技术对准确度至关重要；2 ml和3 ml移液管；(38 ± 1) °C孵育块；石蜡封口膜；涡旋混合器；(63 ± 1) °C和(95 ± 1) °C水浴；100 ml单标线容量瓶。采样（7）不属于本方法——推荐ISO 707 | IDF 50。无ALP乳（8.1）：将所测类型的乳小心分装入试管，乳不得接触管口和管壁，置于95 °C水浴中——乳样中心达到95 °C后（用温度计或热敏电阻测量）开始计时加热5 min——然后迅速冷却；经此处理的乳ALP活性必须低于10 mU/l。试样（8.2）：所有试样使用前仔细混匀；通常无需预热；巴氏杀菌试样按送达状态使用；高活性试样用无ALP乳稀释至分析范围内（< 7000 mU/l）。仪器性能核查（9.1.1）：分析前检查漂移、杂散光和稳定性；每日A/D试验、用对照溶液进行的每日仪器试验（电子和光学漂移）以及推荐的外部阳性、阴性和正常对照。
状态（截至2026年10月3日）。在PKN检索中（检索词“PN-EN ISO 11816-1”，2026年10月3日），PN-EN ISO 11816-1:2024-07有波兰文版和英文版，“采用：EN ISO 11816-1:2024 [IDT]，ISO 11816-1:2024 [IDT]”，无撤销标注；早期版本（2014-02、2007、2006、2002）均为“已撤销并替代”。PN-EN ISO 11816-1:2014-02记录（波兰文版；2026年10月3日读取）：发布日期2015-12-09，撤销日期2024-07-01，采用EN ISO 11816-1:2013 [IDT]和ISO 11816-1:2013 [IDT]，KT 35“乳和乳制品”，由PN-EN ISO 11816-1:2024-07（英文版）替代。撤销对结果意味着什么：根据ISO 11816-1:2024前言，变化涉及仪器（FLM300代替FLM200，内置加热块）和操作说明，测定方法和试验程序未变。
实验室数量及引用形式（认可范围数据库副本，数据截至2026年9月17日，2026年10月3日读取）。编号11816-1出现在2家实验室的2条记录中：AB 485和AB 704。在PCA现行文件中（2026年10月3日读取；AB 704第23版，2026年4月20日；AB 485第27版，2026年8月19日）该编号出现在同样的2家实验室；每份文件的页码标记数等于PDF页数，无重复；检索2026年10月3日从BIP下载的全部PCA文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法：“PN-EN ISO 11816-1:2024-07”（AB 485）和“PN-EN ISO 11816-1:2014-02”（AB 704——2024年7月1日已撤销的版本）。上述项目均未暂停。“实验室”选项卡（检索词“PN-EN ISO 11816-1”）显示两家实验室——2026年10月3日在labcoda.pl生产服务器上通过选项卡查询核实。
实验室检测内容（PCA项目）。AB 485：乳——碱性磷酸酶活性（10–7000）mU/l，荧光法。AB 704：乳及乳基饮料——碱性磷酸酶活性（10–800）mU/l，荧光法。
容易得到貌似正确结果的环节。量程：仪器读数上限7000 mU/l——更高活性用无ALP乳稀释，而不是用水（1、8.2.3）；AB 704的范围上限为800 mU/l，高于此值的样品需稀释，否则超出其认可项目。稀释用乳：与被测乳类型相同，从乳样中心达到95 °C起加热5 min，乳不接触容器口和壁，并经核查（< 10 mU/l）（8.1）。工作底物：使用前至少放置30 min，A/D试验——高于1200 FLU时弃用；2–8 °C可稳定60天，38 °C下仅8 h（5.3）。移液：0.075 ml样品——移液技术对准确度至关重要（6.3.2）。仪器：分析前进行每日A/D试验和34.48 × 10⁻³ µmol/l对照溶液试验（9.1.1）。版本：AB 704引用2024年7月1日已撤销的2014年版——根据新版前言，程序未变，仪器有变（前言）。其他物种和产品：本方法适用于牛、绵羊和山羊的乳及其乳基饮料；乳粉仅在复原后适用（1）。
我们未提供的内容。校准和测定程序（9.2–9.5）、计算公式（10）、精密度数据（11）以及实验室间研究结果（附录A）我们未予转述——它们在样本范围之外。不提供根据ALP活性评价巴氏杀菌效果的判定标准。
方法原理
样品中的碱性磷酸酶从非荧光底物（2′-[2-苯并噻唑基]-6′-羟基苯并噻唑磷酸酯）上切下磷酸基团，生成强荧光产物。将含底物的pH 10缓冲液中的样品放入恒温38 °C的荧光计；经过一分钟温度平衡后，仪器测量两分钟内荧光的增加（激发440 nm，发射520–560 nm），并根据用荧光产物溶液进行的校准，将反应速率换算为以mU/l表示的活性。
应用领域
- 生乳和热处理乳——全脂、半脱脂、脱脂和调味乳（1）
- 牛、绵羊和山羊的乳及乳基饮料；复原后的乳粉（1）
- 乳以及乳和乳基饮料——碱性磷酸酶活性——PCA中2家实验室的2条认可范围记录
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 状态（截至2026年10月3日） | PN-EN ISO 11816-1:2024-07（波兰文版和英文版），采用EN ISO 11816-1:2024和ISO 11816-1:2024 [IDT]；无撤销标注；PN-EN ISO 11816-1:2014-02于2024年7月1日撤销（PKN记录） |
| 测量范围（1） | 至7000 mU/l；超过时用无ALP乳稀释 |
| 测量（4、6.1） | 38 °C，3 min（第2和第3分钟测量）；激发440 nm，发射520–560 nm |
| 工作底物（5.3） | 约1.0 mmol/l，溶于2.4 mol/l DEA缓冲液pH 10；使用前 ≥ 30 min；A/D试验 > 1200 FLU弃用 |
| 校准（5.4） | Fluoroyellow® 0；17.24 × 10⁻³；34.48 × 10⁻³ µmol/l |
| 无ALP乳（8.1） | 达到95 °C后加热5 min，迅速冷却；< 10 mU/l |
| 样品体积（6.3.2） | 0.075 ml——移液技术至关重要 |
| 认可范围覆盖情况（2026年10月3日读取） | 2家实验室，数据库副本2条记录，PCA中同样2条（AB 704——2014-02版，已撤销）；“实验室”选项卡（“PN-EN ISO 11816-1”）——生产服务器上两家均显示 |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 11816-1:2024-07
- 标准名称（波兰语）
- Mleko i przetwory mleczne — Oznaczanie aktywności fosfatazy alkalicznej — Część 1: Metoda fluorymetryczna dla mleka i napojów na bazie mleka
- 标准名称（英语）
- Milk and milk products — Determination of alkaline phosphatase activity — Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks
分步操作程序
-
配制工作底物
缓冲液 + 底物，混合3 min，室温 ≥ 30 min，A/D试验 ≤ 1200 FLU（5.3）。PN-EN ISO 11816-1:2024-07——无撤销标注（PKN，2026年10月3日）。
-
仪器核查
每日A/D试验、对照溶液、推荐的外部对照（9.1.1）。
-
无ALP乳
95 °C加热5 min，迅速冷却，核查 < 10 mU/l（8.1）。
-
试样准备
混匀；巴氏杀菌乳——按送达状态；高活性——用无ALP乳稀释（8.2）。
-
测量
38 °C，3 min，以mU/l动力学读数（4）；校准和测定的细节——在样本范围之外（9.3、9.4）。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 滤光片荧光计 | 恒温比色皿架(38 ± 1) °C，直角光路，440 / 520–560 nm（6.1） | — |
| 一次性比色皿 | 非荧光玻璃，12 × 75 mm（6.2） | — |
| 移液器和分液器 | 2.0 ml分液器；0.075 ml正排量或空气置换移液器；2 ml和3 ml移液管（6.3） | — |
| 孵育块 | (38 ± 1) °C，放置比色皿（6.4） | — |
| 水浴 | (63 ± 1) °C和(95 ± 1) °C（6.7） | — |
| 涡旋混合器、石蜡封口膜、100 ml容量瓶 | （6.5、6.6、6.8） | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| Fluorophos®底物 | — | 2′-[2-苯并噻唑基]-6′-羟基苯并噻唑磷酸酯，每瓶144 mg，580 g/mol（5.1） |
| 二乙醇胺缓冲液 | — | c(DEA) = 2.4 mol/l，pH 10.0，240 ml（5.2） |
| Fluoroyellow®校准溶液 | — | A、B、C：0；17.24 × 10⁻³；34.48 × 10⁻³ µmol/l（5.4） |
| 每日仪器对照溶液 | — | 34.48 × 10⁻³ µmol/l Fluoroyellow®（5.5） |
职业健康与安全
- 底物、缓冲液和校准溶液在2–8 °C下保存并避光；工作底物用棕色玻璃瓶（5.1–5.4）
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 11816-1:2024-07 — 《Milk and milk products — Determination of alkaline phosphatase activity — Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks》。
该方法的原理是什么？
样品中的碱性磷酸酶从非荧光底物（2′-[2-苯并噻唑基]-6′-羟基苯并噻唑磷酸酯）上切下磷酸基团，生成强荧光产物。将含底物的pH 10缓冲液中的样品放入恒温38 °C的荧光计；经过一分钟温度平衡后，仪器测量两分钟内荧光的增加（激发440 nm，发射520–560 nm），并根据用荧光产物溶液进行的校准，将反应速率换算为以mU/l表示的活性。
测量范围和准确度是多少？
状态（截至2026年10月3日）：PN-EN ISO 11816-1:2024-07（波兰文版和英文版），采用EN ISO 11816-1:2024和ISO 11816-1:2024 [IDT]；无撤销标注；PN-EN ISO 11816-1:2014-02于2024年7月1日撤销（PKN记录）；测量范围（1）：至7000 mU/l；超过时用无ALP乳稀释；测量（4、6.1）：38 °C，3 min（第2和第3分钟测量）；激发440 nm，发射520–560 nm；工作底物（5.3）：约1.0 mmol/l，溶于2.4 mol/l DEA缓冲液pH 10；使用前 ≥ 30 min；A/D试验 > 1200 FLU弃用。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 5 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
滤光片荧光计、一次性比色皿、移液器和分液器、孵育块、水浴、涡旋混合器、石蜡封口膜、100 ml容量瓶。
该检测用于哪些场景？
生乳和热处理乳——全脂、半脱脂、脱脂和调味乳（1）；牛、绵羊和山羊的乳及乳基饮料；复原后的乳粉（1）；乳以及乳和乳基饮料——碱性磷酸酶活性——PCA中2家实验室的2条认可范围记录。
需要采取哪些安全防护措施？
底物、缓冲液和校准溶液在2–8 °C下保存并避光；工作底物用棕色玻璃瓶（5.1–5.4）。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 11816-1。