🦠 水中的肠道肠球菌——用酶底物培养基的最可能数法MPN（β-D-葡萄糖苷酶；Enterolert-DW / Quanti-Tray）
三句话速览
向水样中加入含β-D-葡萄糖苷酶指示性底物的脱水培养基（Enterolert-DW），分装入Quanti-Tray定量盘，培养(26 ± 2) h，并计数由蓝色变为绿色的孔；每100 ml肠道肠球菌的最可能数由表查得。该检测依据 PN-EN ISO 7899-3:2025-11 (ISO 7899-3:2025)；检出水平：1 CFU/100 ml；最终结果在(26 ± 2) h内。整个程序共 6 个步骤；主要用于：生活饮用水——处理工艺有效性和配水管网严密性的控制（24 h后出结果）、淡水和海水浴场水（1:10稀释）、含大量悬浮物的水、异养菌本底很高、膜过滤法（ISO 7899-2）难以实施的水。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 7899-3:2025-11 (ISO 7899-3:2025)
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 6
- 检出水平: 1 CFU/100 ml；最终结果在(26 ± 2) h内
- 培养（制造商）: 41 ± 0.5 °C，24 h；结果在28 h内有效
- 读数: 颜色由蓝色变为绿色 = 阳性；无需紫外灯；与阴性对照比较
概述
ISO 7899-3:2025规定了水中肠道肠球菌——其中包括Enterococcus faecalis（粪肠球菌）、E. faecium、E. durans、E. avium、E. gallinarum、E. hirae和E. casseliflavus——的定量测定方法，该方法基于目标微生物在液体培养基中的生长，并由表格或程序计算最可能数（MPN）。它适用于生活饮用水和浴场水（淡水和海水）以及其他类似的水，包括含有大量悬浮物的水；即使在异养菌数很高的情况下，也能在1 CFU/100 ml的水平上检出肠球菌，并在(26 ± 2) h内得到最终结果。浴场水最好在1:10稀释后检验。该试验以β-D-葡萄糖苷酶的表达为基础，24 h后即给出确证结果，无需对阳性孔进行进一步检验。标准不适用于瓶装水，该方法未对瓶装水进行验证——实验室在自行验证后可在该领域使用。标准以一种特性已经确定的、经验证的产品为基础（附录C），并要求执行ISO 8199、ISO 11133和ISO 19458（采样）。肠道肠球菌的存在用于评定生活饮用水生产中处理工艺的有效性，并指示贮存和配水系统中污染物的渗入和不严密之处。
Enterolert-DW培养基的制造商（IDEXX）把该试验描述为基于特定底物技术（DST）、使用指示性营养底物邻硝基苯基-β-D-葡萄糖苷：当肠球菌代谢该底物时，样品的颜色由蓝色变为绿色——任何变为绿色的变化都是阳性结果，无需紫外灯。在41 ± 0.5 °C下培养24 h，结果在28 h内有效（除非当地法规另有规定）；24 h之前出现的阳性结果有效，28 h之后的阴性结果同样有效。培养基在2–25 °C下避光、避湿保存；该试验适用于饮用水，用于其他水时需经实验室验证。在波兰该标准以PN-EN ISO 7899-3:2025-11施行。
方法原理
肠道肠球菌在含有β-D-葡萄糖苷酶指示性营养底物的液体培养基中生长；底物（邻硝基苯基-β-D-葡萄糖苷）的分解使培养基的颜色由蓝色变为绿色。把加入培养基的样品分装入Quanti-Tray定量盘，封口并培养；经(26 ± 2) h（制造商：41 ± 0.5 °C下24 h，28 h内读数）后，把变绿的孔计为阳性——无需进一步确证——并由MPN表或程序（如制造商的MPN计算器）查得每100 ml肠道肠球菌的最可能数。该方法在异养菌数很高的情况下也能检出1 CFU/100 ml；浴场水（淡水和海水）按1:10稀释。培养基为单剂量包装的即用型产品，不含有毒成分；读数比较时使用阴性对照（无比色标准）。培养检验的通则（ISO 8199）、培养基质量（ISO 11133）和采样（ISO 19458）的规定均适用。
应用领域
- 生活饮用水——处理工艺有效性和配水管网严密性的控制（24 h后出结果）
- 淡水和海水浴场水（1:10稀释）、含大量悬浮物的水
- 异养菌本底很高、膜过滤法（ISO 7899-2）难以实施的水
- 自来水公司和卫生防疫站的实验室——无需对阳性孔进行确证
- 瓶装水——仅在实验室自行验证后（超出标准的适用范围）
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 检出水平 | 1 CFU/100 ml；最终结果在(26 ± 2) h内 |
| 培养（制造商） | 41 ± 0.5 °C，24 h；结果在28 h内有效 |
| 读数 | 颜色由蓝色变为绿色 = 阳性；无需紫外灯；与阴性对照比较 |
| 稀释 | 浴场水1:10 |
| 可检出的菌种 | E. faecalis、E. faecium、E. durans、E. avium、E. gallinarum、E. hirae、E. casseliflavus |
| 培养基的保存 | 2–25 °C，避免直射光和潮湿 |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 7899-3:2025-11 (ISO 7899-3:2025)
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody — Oznaczanie ilościowe enterokoków jelitowych — Część 3: Metoda najbardziej prawdopodobnej liczby
- 标准名称（英语）
- Water quality — Enumeration of intestinal enterococci — Part 3: Most probable number method
分步操作程序
-
采样
按ISO 19458采样；浴场水（淡水和海水）按1:10稀释。
-
加入培养基
向无菌容器中的样品加入Enterolert-DW试剂，盖塞并振摇，使内容物混匀至溶解。
-
分装与封口
把加入培养基的样品倒入Quanti-Tray定量盘，并在封口机中封口。
-
培养
培养(26 ± 2) h；按制造商说明为41 ± 0.5 °C下24 h，读数在28 h内有效。
-
读数
把颜色由蓝色变为绿色的孔（任何变为绿色的变化）判为阳性；与阴性对照比较。24 h之前出现的阳性结果有效；28 h后不出现绿色是有效的阴性结果，28 h之后才出现的绿色则需要重做。
-
计算与报告
由阳性孔的数目从MPN表或MPN程序查得每100 ml肠道肠球菌的最可能数；有稀释时计入稀释倍数。给出方法、样品标识和结果。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 恒温培养箱（制造商：41 ± 0.5 °C） | — | |
| Quanti-Tray封口机和Quanti-Tray定量盘 | 把样品分配到MPN的各孔中 | — |
| 盛100 ml样品的无菌容器 | 任何无菌容器（Quanti-Tray系统） | — |
| 用于颜色比较的阴性对照 | 无比色标准——与未接种的样品比较 | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| Enterolert-DW——单剂量包装的脱水培养基 | — | 供肠球菌β-D-葡萄糖苷酶作用的指示性营养底物邻硝基苯基-β-D-葡萄糖苷 |
| 稀释用无菌水 | — | 浴场水的1:10稀释 |
职业健康与安全
- 肠道肠球菌指示粪便污染——在微生物实验室的条件下工作，对用过的定量盘高压灭菌
- 封口机会发热——不要触碰加热元件
- 培养基不含有毒成分（按制造商说明）；对试剂仍应遵守一般的劳动安全卫生规则
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 7899-3:2025-11 (ISO 7899-3:2025) — 《Water quality — Enumeration of intestinal enterococci — Part 3: Most probable number method》。
该方法的原理是什么？
肠道肠球菌在含有β-D-葡萄糖苷酶指示性营养底物的液体培养基中生长；底物（邻硝基苯基-β-D-葡萄糖苷）的分解使培养基的颜色由蓝色变为绿色。把加入培养基的样品分装入Quanti-Tray定量盘，封口并培养；经(26 ± 2) h（制造商：41 ± 0.
测量范围和准确度是多少？
检出水平：1 CFU/100 ml；最终结果在(26 ± 2) h内；培养（制造商）：41 ± 0.5 °C，24 h；结果在28 h内有效；读数：颜色由蓝色变为绿色 = 阳性；无需紫外灯；与阴性对照比较；稀释：浴场水1:10。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 6 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
恒温培养箱（制造商：41 ± 0.5 °C）、Quanti-Tray封口机和Quanti-Tray定量盘、盛100 ml样品的无菌容器、用于颜色比较的阴性对照。
该检测用于哪些场景？
生活饮用水——处理工艺有效性和配水管网严密性的控制（24 h后出结果）；淡水和海水浴场水（1:10稀释）、含大量悬浮物的水；异养菌本底很高、膜过滤法（ISO 7899-2）难以实施的水；自来水公司和卫生防疫站的实验室——无需对阳性孔进行确证；瓶装水——仅在实验室自行验证后（超出标准的适用范围）。
需要采取哪些安全防护措施？
肠道肠球菌指示粪便污染——在微生物实验室的条件下工作，对用过的定量盘高压灭菌；封口机会发热——不要触碰加热元件；培养基不含有毒成分（按制造商说明）；对试剂仍应遵守一般的劳动安全卫生规则。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 7899-3。