🦠 水中大肠埃希氏菌与大肠菌群
三句话速览
以膜过滤法在显色 CCA 培养基上定量测定水中 E。该检测依据 PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska)；修改单在认可范围中的规模与写法（测量于 23.09.2026）：四种定义，四个数字——而前两个数字都不干净（于 23.09.2026 重复测量）。按值的开头「PN-EN ISO 9308-1」匹配，也就是「实验室」标签页的查找方式：206 家实验室的 458 个条目。仅以编号核心「9308-1」在值中任意位置匹配：481 / 210。仅以字符串「9308」匹配，即连同第 2 和第 3 部分一起：726 / 225。正确的数字是第四个：所有带「EN」字样的写法，「PN」字样处的分隔符不限，但不含 1999 年那一代——207 家实验室的 465 个条目。这是因为，第一个与第二个数字之间相差的 23 个条目分为三类：13 个条目是该标准的上一代（「PN-ISO 9308-1:1999」11 次，「PN ISO 9308-1:1999」2 次）——引入 EN 版之前的另一份文件，编号核心把它错误地计入；7 个条目（9 条记录）是同一份标准的走样写法，前缀匹配会漏掉它们：用短破折号的「PN–EN」（3），连字符前有空格的「PN -EN」（4），不带连字符的「PN EN」（2）；3 个条目是不带「PN」字样的「ISO 9308-1」记录——直接援引国际文件，第四种定义有意不把它们计入。因此，正确的数字比标签页的数字多七，比编号核心的数字少十六。全部四个数字都在认可范围数据库的第二个独立副本上得到确认，分毫不差。这份标准仍是整个数据库中被援引最多的标准之一。200 家实验室写出了「A1」字样；只以不带「A1」字样的写法援引它的，是 6 家实验室的 23 个条目。整个程序共 10 个步骤（合计约 19 小时 19 分钟–1 天 1 小时 19 分钟）；主要用于：饮用水质量控制（波兰法律公报 2017 年 —— E. coli：0 CFU/100 mL）、供水管网监测 —— 用户端取样点、地下水与取水口检测。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska)
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 10
- 各步骤合计时间: 19 小时 19 分钟–1 天 1 小时 19 分钟
- A1 修改单的基本信息（PKN 卡片状态，截至 23.09.2026）: PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04——英语版，出版于 04-04-2017，12 页，KT 120（水质——微生物学与生物学检验），「采用：EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT]，ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]」，ICS 07.100.20。修改单涉及什么——我们不提供：「A」类修改单的内容 PKN 不免费公开（与国家勘误「Ap」不同），而我们没有其文本
- 这份修改单相对于标准的分量: 基础标准 PN-EN ISO 9308-1:2014-12（波兰语版，出版于 14-10-2015）有 18 页，而 A1 修改单本身就有 12 页，即相当于标准篇幅的三分之二。篇幅如此的修改单不是勘误
- 修改单在认可范围中的规模与写法（测量于 23.09.2026）: 四种定义，四个数字——而前两个数字都不干净（于 23.09.2026 重复测量）。按值的开头「PN-EN ISO 9308-1」匹配，也就是「实验室」标签页的查找方式：206 家实验室的 458 个条目。仅以编号核心「9308-1」在值中任意位置匹配：481 / 210。仅以字符串「9308」匹配，即连同第 2 和第 3 部分一起：726 / 225。正确的数字是第四个：所有带「EN」字样的写法，「PN」字样处的分隔符不限，但不含 1999 年那一代——207 家实验室的 465 个条目。这是因为，第一个与第二个数字之间相差的 23 个条目分为三类：13 个条目是该标准的上一代（「PN-ISO 9308-1:1999」11 次，「PN ISO 9308-1:1999」2 次）——引入 EN 版之前的另一份文件，编号核心把它错误地计入；7 个条目（9 条记录）是同一份标准的走样写法，前缀匹配会漏掉它们：用短破折号的「PN–EN」（3），连字符前有空格的「PN -EN」（4），不带连字符的「PN EN」（2）；3 个条目是不带「PN」字样的「ISO 9308-1」记录——直接援引国际文件，第四种定义有意不把它们计入。因此，正确的数字比标签页的数字多七，比编号核心的数字少十六。全部四个数字都在认可范围数据库的第二个独立副本上得到确认，分毫不差。这份标准仍是整个数据库中被援引最多的标准之一。200 家实验室写出了「A1」字样；只以不带「A1」字样的写法援引它的，是 6 家实验室的 23 个条目
概述
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是水体粪便污染最重要的指示菌。饮用水中检出 E. coli 表明受到人或动物粪便污染，并可能存在致病菌、病毒与肠道原虫的风险。大肠菌群（coliforms）范围更广 —— 除 E. coli 外还包括克雷伯氏菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌 —— 可作为处理工艺卫生状况的一般性指标。
按 PN-EN ISO 9308-1 的方法是将水样经 0,45 µm 滤膜过滤以截留细菌，再将滤膜置于选择性显色 CCA 培养基（显色大肠菌群琼脂）上。该培养基含酶底物：Salmon-GAL（6-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷）用于大肠菌群的 β-半乳糖苷酶，X-Glucuronide（5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡萄糖醛酸苷）用于 E. coli 的 β-葡萄糖醛酸酶。
在 36±2 °C 培养 18–24 小时后，大肠菌群菌落呈粉红至红色（β-半乳糖苷酶活性），E. coli 菌落呈深蓝紫色（两种酶均有活性）。结果可直接判读 —— 无需生化确认，大大加快分析速度。
该方法适用于本底菌群少的水 —— 饮用水、处理后水、地下水。对地表水与污水（本底菌群多）应采用 PN-EN ISO 9308-2（Colilert 培养基 MPN 法）。
注意修改单 A1 的写法（2026 年 9 月 23 日）。本条目此前写作「PN-EN ISO 9308-1:2014+A1:2017」，即编号中带加号——而在 PKN 目录中，编号中的加号表示合并版（一整份采用已修改 EN 的标准），这里指的却是附加在标准之后的单独修改单：PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04。基础标准：波兰语版，出版于 14-10-2015，18 页，KT 120 水质——微生物学与生物学检验技术委员会（PKN 卡片，2026 年 9 月 23 日读取）。
方法原理
水样经 0,45 µm 滤膜（直径 47 mm）过滤以截留细菌，滤膜转移至显色 CCA 培养基表面。培养基含两种显色底物：Salmon-GAL 被 β-半乳糖苷酶（大肠菌群的酶）水解，生成鲑肉粉色产物；X-Glucuronide 被 β-葡萄糖醛酸酶（E. coli 特有酶）水解，生成深蓝色产物。培养基的选择性由 Tergitol-7 提供，它可抑制革兰氏阳性菌与多数非大肠菌群的生长。
应用领域
- 饮用水质量控制（波兰法律公报 2017 年 —— E. coli：0 CFU/100 mL）
- 供水管网监测 —— 用户端取样点
- 地下水与取水口检测
- 处理与消毒后水的控制
- 瓶装水与泉水检测
- 公共建筑（医院、学校）用水监测
- 食品工业生产用水
- 应急检测 —— 供水管网事故后
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| A1 修改单的基本信息（PKN 卡片状态，截至 23.09.2026） | PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04——英语版，出版于 04-04-2017，12 页，KT 120（水质——微生物学与生物学检验），「采用：EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT]，ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]」，ICS 07.100.20。修改单涉及什么——我们不提供：「A」类修改单的内容 PKN 不免费公开（与国家勘误「Ap」不同），而我们没有其文本 |
| 这份修改单相对于标准的分量 | 基础标准 PN-EN ISO 9308-1:2014-12（波兰语版，出版于 14-10-2015）有 18 页，而 A1 修改单本身就有 12 页，即相当于标准篇幅的三分之二。篇幅如此的修改单不是勘误 |
| 修改单在认可范围中的规模与写法（测量于 23.09.2026） | 四种定义，四个数字——而前两个数字都不干净（于 23.09.2026 重复测量）。按值的开头「PN-EN ISO 9308-1」匹配，也就是「实验室」标签页的查找方式：206 家实验室的 458 个条目。仅以编号核心「9308-1」在值中任意位置匹配：481 / 210。仅以字符串「9308」匹配，即连同第 2 和第 3 部分一起：726 / 225。正确的数字是第四个：所有带「EN」字样的写法，「PN」字样处的分隔符不限，但不含 1999 年那一代——207 家实验室的 465 个条目。这是因为，第一个与第二个数字之间相差的 23 个条目分为三类：13 个条目是该标准的上一代（「PN-ISO 9308-1:1999」11 次，「PN ISO 9308-1:1999」2 次）——引入 EN 版之前的另一份文件，编号核心把它错误地计入；7 个条目（9 条记录）是同一份标准的走样写法，前缀匹配会漏掉它们：用短破折号的「PN–EN」（3），连字符前有空格的「PN -EN」（4），不带连字符的「PN EN」（2）；3 个条目是不带「PN」字样的「ISO 9308-1」记录——直接援引国际文件，第四种定义有意不把它们计入。因此，正确的数字比标签页的数字多七，比编号核心的数字少十六。全部四个数字都在认可范围数据库的第二个独立副本上得到确认，分毫不差。这份标准仍是整个数据库中被援引最多的标准之一。200 家实验室写出了「A1」字样；只以不带「A1」字样的写法援引它的，是 6 家实验室的 23 个条目 |
| 附加「A1」字样的七种写法 | 「:2014-12+A1」、「:2014-12 +A1」、「:2014-12+ A1」、「:2014-12 + A1」、「:2014-12/A1」、「:2014-12/ A1」、「:2014-12 /A1」。这一本应服务于精确性的字样，恰恰是这一援引的所有组成部分中写法最不统一的 |
| 语言版本互不一致 | 基础标准有波兰语版，而 A1 修改单只有英语版——以波兰语标准文本工作的实验室，要么阅读修改单的原文，要么阅读自己的译文 |
| 结果 | CFU/100 mL（菌落形成单位） |
| 限值（饮用水） | E. coli：0 CFU/100 mL；大肠菌群：0 CFU/100 mL |
| 培养温度 | 36 ± 2 °C |
| 培养时间 | 18–24 小时 |
| 取样量 | 100 mL（标准）或 250 mL |
| 适宜计数范围 | 滤膜上 10–100 个菌落（最佳） |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska)
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody — Oznaczanie ilościowe Escherichia coli i bakterii grupy coli — Część 1: Metoda filtracji membranowej do wód o małej ilości flory towarzyszącej
- 标准名称（英语）
- Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora
分步操作程序
-
工作台准备
对过滤装置灭菌（121 °C/15 分钟高压灭菌或火焰灼烧）。准备 CCA 平板 —— 使用前 30 分钟从冰箱取出。
-
中和余氯
若样品含氯（自来水），加入硫代硫酸钠（1,8% 片剂 —— 每 100 mL 样品 0,1 mL），轻轻混匀。
-
膜过滤
将无菌 0,45 µm 滤膜置于滤器上，倒入 100 mL 样品，开启真空泵。过滤后用 20 mL 无菌蛋白胨水冲洗滤杯。
-
将滤膜转移至培养基
用无菌镊子将滤膜移至 CCA 平板，确保滤膜平整贴合、下方无气泡。
-
培养
将平板倒置（底朝上）于 36±2 °C 培养箱中培养 18–24 小时，不得超过 24 小时。
-
判读 —— 大肠菌群
计数粉红至红色菌落（β-半乳糖苷酶阳性）= 大肠菌群。最佳计数范围：滤膜上 10–100 个菌落。
-
判读 —— E. coli
计数深蓝至紫色菌落（β-半乳糖苷酶与 β-葡萄糖醛酸酶均阳性）= E. coli。E. coli 计入大肠菌群总数。
-
氧化酶试验（确认）
将可疑菌落点在氧化酶试纸上。E. coli 为氧化酶阴性（不变色）。氧化酶阳性菌落应剔除。
-
结果计算
结果 = 每 100 mL 样品中确认菌落数。饮用水要求 E. coli 与大肠菌群均为 0 CFU/100 mL。
-
质量控制
每日做阴性对照（无菌水），每 10 个样品做平行样，并测定 CRM 控制样，回收率 90–110%。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 膜过滤装置 | Sartorius Combisart、Merck EZ-Fit、Pall MicroFunnel | 3 000–12 000 PLN |
| 真空泵 | KNF Laboport N 810、Sartorius 16612 | 3 000–8 000 PLN |
| 36 °C 细菌培养箱 | Binder BD 56、Memmert IN30、Pol-Eko CLN 32 | 5 000–15 000 PLN |
| 灭菌用高压灭菌器 | Tuttnauer ELV 2540、Systec VX-40 | 20 000–45 000 PLN |
| 紫外灯／本生灯 | 操作台用 UVC 杀菌灯、Teclu 燃烧器 | 200–1 500 PLN |
| 生物安全柜（可选） | Esco Airstream、Telstar Bio II Advance | 15 000–40 000 PLN |
| 放大镜／菌落计数器 | Stuart SC6+、Interscience Scan 500 | 1 500–25 000 PLN |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 显色大肠菌群琼脂（CCA） | — | 符合 ISO 9308-1 的显色培养基，含 Salmon-GAL + X-Glucuronide + Tergitol-7。厂商：Merck、Biokar、Oxoid |
| 0,45 µm 滤膜 | — | 混合纤维素酯（MCE），直径 47 mm，无菌、带网格。Merck Millipore、Sartorius、Pall |
| 硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃） | 7772-98-7 | 用于中和样品中氯的片剂，每 500 mL 样品 18 mg/L |
| 林格液（1/4 浓度） | — | 用于稀释样品，无菌，9 mL 管装 |
| 缓冲蛋白胨水 | — | 稀释用替代液，0,1% 蛋白胨 + 0,85% NaCl，pH 7,0 |
| 氧化酶试剂（Kovacs） | 2436-85-3 | 氧化酶试纸，用于 E. coli 确认（氧化酶阴性）。四甲基对苯二胺 |
职业健康与安全
- 水样可能含病原体 —— 佩戴丁腈手套并穿实验服
- 培养后长有菌落的平板按感染性材料处理 —— 处置前须高压灭菌
- 使用本生灯 —— 有烫伤风险，不得无人看管
- 硫代硫酸钠 —— 风险低，避免接触眼睛
- 紫外灯 —— 不得直视光源，有眼损伤风险
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska) — 《Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora》。
该方法的原理是什么？
水样经 0,45 µm 滤膜（直径 47 mm）过滤以截留细菌，滤膜转移至显色 CCA 培养基表面。培养基含两种显色底物：Salmon-GAL 被 β-半乳糖苷酶（大肠菌群的酶）水解，生成鲑肉粉色产物；X-Glucuronide 被 β-葡萄糖醛酸酶（E.
测量范围和准确度是多少？
A1 修改单的基本信息（PKN 卡片状态，截至 23.09.2026）：PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04——英语版，出版于 04-04-2017，12 页，KT 120（水质——微生物学与生物学检验），「采用：EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT]，ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]」，ICS 07.100.20。修改单涉及什么——我们不提供：「A」类修改单的内容 PKN 不免费公开（与国家勘误「Ap」不同），而我们没有其文本；这份修改单相对于标准的分量：基础标准 PN-EN ISO 9308-1:2014-12（波兰语版，出版于 14-10-2015）有 18 页，而 A1 修改单本身就有 12 页，即相当于标准篇幅的三分之二。篇幅如此的修改单不是勘误；修改单在认可范围中的规模与写法（测量于 23.09.2026）：四种定义，四个数字——而前两个数字都不干净（于 23.09.2026 重复测量）。按值的开头「PN-EN ISO 9308-1」匹配，也就是「实验室」标签页的查找方式：206 家实验室的 458 个条目。仅以编号核心「9308-1」在值中任意位置匹配：481 / 210。仅以字符串「9308」匹配，即连同第 2 和第 3 部分一起：726 / 225。正确的数字是第四个：所有带「EN」字样的写法，「PN」字样处的分隔符不限，但不含 1999 年那一代——207 家实验室的 465 个条目。这是因为，第一个与第二个数字之间相差的 23 个条目分为三类：13 个条目是该标准的上一代（「PN-ISO 9308-1:1999」11 次，「PN ISO 9308-1:1999」2 次）——引入 EN 版之前的另一份文件，编号核心把它错误地计入；7 个条目（9 条记录）是同一份标准的走样写法，前缀匹配会漏掉它们：用短破折号的「PN–EN」（3），连字符前有空格的「PN -EN」（4），不带连字符的「PN EN」（2）；3 个条目是不带「PN」字样的「ISO 9308-1」记录——直接援引国际文件，第四种定义有意不把它们计入。因此，正确的数字比标签页的数字多七，比编号核心的数字少十六。全部四个数字都在认可范围数据库的第二个独立副本上得到确认，分毫不差。这份标准仍是整个数据库中被援引最多的标准之一。200 家实验室写出了「A1」字样；只以不带「A1」字样的写法援引它的，是 6 家实验室的 23 个条目；附加「A1」字样的七种写法：「:2014-12+A1」、「:2014-12 +A1」、「:2014-12+ A1」、「:2014-12 + A1」、「:2014-12/A1」、「:2014-12/ A1」、「:2014-12 /A1」。这一本应服务于精确性的字样，恰恰是这一援引的所有组成部分中写法最不统一的。
完成检测需要多长时间？
各步骤所列时间合计约为 19 小时 19 分钟–1 天 1 小时 19 分钟。整个程序共 10 个步骤。
需要哪些设备？
膜过滤装置、真空泵、36 °C 细菌培养箱、灭菌用高压灭菌器、紫外灯／本生灯、生物安全柜（可选）、放大镜／菌落计数器。核心仪器的参考价格（膜过滤装置）：3 000–12 000 PLN。
该检测用于哪些场景？
饮用水质量控制（波兰法律公报 2017 年 —— E. coli：0 CFU/100 mL）；供水管网监测 —— 用户端取样点；地下水与取水口检测；处理与消毒后水的控制；瓶装水与泉水检测；公共建筑（医院、学校）用水监测；食品工业生产用水；应急检测 —— 供水管网事故后。
需要采取哪些安全防护措施？
水样可能含病原体 —— 佩戴丁腈手套并穿实验服；培养后长有菌落的平板按感染性材料处理 —— 处置前须高压灭菌；使用本生灯 —— 有烫伤风险，不得无人看管；硫代硫酸钠 —— 风险低，避免接触眼睛；紫外灯 —— 不得直视光源，有眼损伤风险。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 9308-1。