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🦠 化妆品中的酵母菌和霉菌——在含氯霉素的沙氏琼脂上计数菌落（25 °C，3–5天）

微生物 PN-EN ISO 16212

三句话速览

把化妆品在中和性稀释液（SCDLP 20）中制成的初始悬液作倾注或涂布接种于沙氏葡萄糖氯霉素琼脂（SDCA，pH 5。该检测依据 PN-EN ISO 16212:2017-08 + A1:2023-01 (ISO 16212:2017 + Amd 1:2022)；培养：(25 ± 2.5) °C，3–5天，需氧；也可为(22.5 ± 2.5) °C，5–7天，不含抗生素。整个程序共 6 个步骤；主要用于：化妆品微生物洁净度的日常控制——酵母菌和霉菌数（CFU/g、CFU/ml）、高风险的水基产品（膏霜、凝胶、乳液）——批次放行、真菌数量低的产品——膜过滤变体。

要点速览

  • 标准: PN-EN ISO 16212:2017-08 + A1:2023-01 (ISO 16212:2017 + Amd 1:2022)
  • 类别: 微生物
  • 操作步骤数: 6
  • 培养: (25 ± 2.5) °C，3–5天，需氧；也可为(22.5 ± 2.5) °C，5–7天，不含抗生素
  • 样品: 至少1 g或1 ml产品用于制备初始悬液
  • 培养基: SDCA：每1 l含葡萄糖40 g、蛋白胨5 g、酪蛋白5 g、氯霉素0.050 g、琼脂15 g；pH 5.6 ± 0.2

概述

ISO 16212:2017给出了通过在选择性琼脂培养基上需氧培养后计数菌落来测定化妆品中所含酵母菌和霉菌数量的一般指南。标准建议进行微生物风险分析，以确定该方法适用于哪些产品；低风险产品（ISO 29621）是指水分活度低、含水醇、pH极端等的产品。由于产品多种多样，该方法可能并非在每个细节上都适用（例如对某些与水不混溶的产品）；在证明等效性后，也允许采用其他方法（如自动化方法）。计数所得的酵母菌可用参考文献所列标准中的试验加以鉴定，霉菌则用其他适当方法鉴定。标准把酵母菌定义为主要以出芽方式进行营养繁殖的单细胞真菌，把霉菌定义为形成菌丝体的微型真菌，连同其在试验条件下能够生长的孢子和分生孢子。

在波兰它以PN-EN ISO 16212:2017-08连同修改单A1:2023-01施行。检验化妆品的实验室在“需氧嗜温微生物”这一参数下，把它用于在SDA琼脂上测定真菌，并与PN-EN ISO 21149（TSA上的细菌）并行使用。

方法原理

该方法是在选择性琼脂培养基上计数菌落；样品对真菌生长可能产生的抑制必须被中和，并且产品抗真菌性质的中和效果必须经过检查和证明。平板计数：在规定的培养基上制备倾注平板或涂布平板，并接种规定量的初始悬液或稀释液；在(25 ± 2.5) °C下需氧培养3–5天；计数CFU并计算每毫升或每克产品中的酵母菌和霉菌数。膜过滤：把适量的已制备样品移入用无菌稀释液润湿过的过滤装置中，立即过滤并冲洗，把滤膜移至培养基表面（按ISO 21148）并按上述条件培养。可选的替代条件是在不含抗生素的培养基上于(22.5 ± 2.5) °C培养5–7天。培养基：中和性稀释液SCDLP 20（胰酶消化酪蛋白20.0 g、大豆卵磷脂5.0 g、聚山梨酯20 40 ml、水960 ml；聚山梨酯在(49 ± 2) °C水浴中溶解，加入各组分后加热约30 min；121 °C灭菌15 min；pH 7.3 ± 0.2）、A液（动物蛋白胨1.0 g/l，pH 7.1 ± 0.2）、用于酵母菌悬液的胰蛋白胨氯化钠溶液（胰蛋白胨1.00 g、NaCl 8.50 g，pH 7.0 ± 0.2）、沙氏葡萄糖氯霉素琼脂（SDCA：葡萄糖40.0 g、动物蛋白胨5.0 g、胰酶消化酪蛋白5.0 g、氯霉素0.050 g、琼脂15.0 g、水1000 ml；121 °C灭菌15 min；pH 5.6 ± 0.2），以及用于培养参比菌株的沙氏葡萄糖琼脂（SDA，不含氯霉素）；对于已知且未受细菌污染的产品，所用培养基不加氯霉素。在证明适用性后，也可使用其他稀释液、中和剂和培养基；允许使用组成或性能相当的脱水培养基和即用型培养基。

应用领域

关键参数

参数数值
培养(25 ± 2.5) °C，3–5天，需氧；也可为(22.5 ± 2.5) °C，5–7天，不含抗生素
样品至少1 g或1 ml产品用于制备初始悬液
培养基SDCA：每1 l含葡萄糖40 g、蛋白胨5 g、酪蛋白5 g、氯霉素0.050 g、琼脂15 g；pH 5.6 ± 0.2
中和性稀释液SCDLP 20（酪蛋白20 g、卵磷脂5 g、聚山梨酯20 40 ml/960 ml），pH 7.3 ± 0.2
有效性条件已证明产品抗真菌性质得到中和
结果每毫升或每克产品中酵母菌和霉菌的CFU数

标准

标准编号
PN-EN ISO 16212:2017-08 + A1:2023-01 (ISO 16212:2017 + Amd 1:2022)
标准名称（波兰语）
Kosmetyki — Mikrobiologia — Oznaczanie liczby drożdży i pleśni
标准名称（英语）
Cosmetics — Microbiology — Enumeration of yeast and mould

分步操作程序

  1. 初始悬液

    取至少1 g或1 ml产品，在中和性稀释液（如SCDLP 20）中制成初始悬液；制备稀释液。

  2. 中和的检查

    检查并证明对产品抗真菌性质的中和是有效的（标准第12章，附录D——中和剂）。

  3. 变体A——平板计数

    把规定量的初始悬液或稀释液作倾注或涂布接种于SDCA琼脂（对未受细菌污染的产品——使用不含氯霉素的培养基）。

  4. 变体B——膜过滤

    把适量样品移入用无菌稀释液润湿过的过滤装置中，立即过滤，按规程冲洗，并把滤膜移至琼脂表面（ISO 21148）。

  5. 培养

    在(25 ± 2.5) °C下需氧培养3–5天；也可在不含抗生素的培养基上于(22.5 ± 2.5) °C培养5–7天。

  6. 计数与结果

    计数CFU并计算每毫升或每克产品中的酵母菌和霉菌数；必要时鉴定酵母菌（用参考文献所列标准中的试验）或霉菌（用其他适当方法）。

所需设备与仪器

设备示例参考价格
培养箱(25 ± 2.5) °C或(22.5 ± 2.5) °C培养3–5天或5–7天—
高压灭菌器121 °C培养基灭菌15 min—
水浴(49 ± 2) °C在SCDLP 20中溶解聚山梨酯20—
膜过滤装置过滤变体（按ISO 21148）—
培养皿、移液管、均质器制备初始悬液和接种—

试剂、培养基与耗材

试剂CAS详情
SCDLP 20肉汤—中和防腐剂的稀释液
A液（动物蛋白胨1 g/l）—稀释液
胰蛋白胨氯化钠溶液—酵母菌悬液（参比菌株）的稀释液
沙氏葡萄糖氯霉素琼脂（SDCA）—计数酵母菌和霉菌并抑制细菌
沙氏葡萄糖琼脂（SDA）—培养参比菌株；不含抗生素的变体

职业健康与安全

常见问题

该检测依据哪项标准？

该检测依据的标准为 PN-EN ISO 16212:2017-08 + A1:2023-01 (ISO 16212:2017 + Amd 1:2022) — 《Cosmetics — Microbiology — Enumeration of yeast and mould》。

该方法的原理是什么？

该方法是在选择性琼脂培养基上计数菌落；样品对真菌生长可能产生的抑制必须被中和，并且产品抗真菌性质的中和效果必须经过检查和证明。平板计数：在规定的培养基上制备倾注平板或涂布平板，并接种规定量的初始悬液或稀释液；在(25 ± 2.

测量范围和准确度是多少？

培养：(25 ± 2.5) °C，3–5天，需氧；也可为(22.5 ± 2.5) °C，5–7天，不含抗生素；样品：至少1 g或1 ml产品用于制备初始悬液；培养基：SDCA：每1 l含葡萄糖40 g、蛋白胨5 g、酪蛋白5 g、氯霉素0.050 g、琼脂15 g；pH 5.6 ± 0.2；中和性稀释液：SCDLP 20（酪蛋白20 g、卵磷脂5 g、聚山梨酯20 40 ml/960 ml），pH 7.3 ± 0.2。

完成检测需要多长时间？

整个程序共 6 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。

需要哪些设备？

培养箱(25 ± 2.5) °C或(22.5 ± 2.5) °C、高压灭菌器121 °C、水浴(49 ± 2) °C、膜过滤装置、培养皿、移液管、均质器。

该检测用于哪些场景？

化妆品微生物洁净度的日常控制——酵母菌和霉菌数（CFU/g、CFU/ml）；高风险的水基产品（膏霜、凝胶、乳液）——批次放行；真菌数量低的产品——膜过滤变体；防腐效能试验——计数存活的酵母菌和霉菌；已知且未受细菌污染的产品——不含氯霉素的培养基，22.5 °C／5–7天的变体。

需要采取哪些安全防护措施？

霉菌产生孢子——开启平板时要小心，在安全柜中操作；过敏者应避免接触；培养基中的氯霉素——称量时避免吸入粉尘和接触皮肤；高温培养基（水浴、高压灭菌器）——有烫伤风险。

哪家实验室可以开展此项检测？

该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 16212。

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