🌿 急性毒性试验 — 大型溞
以大型溞（水蚤）为受试生物的急性毒性生物试验 — 测定暴露 24 h 和 48 h 后的 EC50（引起 50% 活动抑制的浓度）。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 6341:2013
- 类别: 环境
- 操作步骤数: 6
- 各步骤合计时间: 2 小时
- 受试生物: 大型溞 Daphnia magna Straus，幼溞 <24 h
- 暴露时间: 24 和 48 h
- 终点: EC50（活动抑制）
概述
大型溞试验是全球应用最广泛的生态毒理学生物测定之一。大型溞（Daphnia magna）是体长 2–5 mm 的淡水甲壳类，因对污染物敏感、生命周期短、易于实验室培养，成为水生毒理学的模式生物。
试验是将幼溞（<24 h）暴露于受试物质/样品的系列稀释液中，观察 24 和 48 小时后的活动抑制情况。结果为 EC50 — 引起 50% 个体活动抑制的浓度。该试验为化学品分类（REACH）、废水与水质评估以及废物分类所必需。
ISO 6341 与 OECD 202 导则协调一致，是水环境影响评价中所用生态毒理试验组合的组成部分。
方法原理
将幼溞（出生 <24 h，每重复 5 只，4 个重复）暴露于受试物质的 5–7 个浓度（等比系列）及对照（纯培养液）中。24 和 48 h 后观察活动受抑制个体数（轻摇后 15 s 内不能游动）。用概率单位法或逻辑斯蒂法计算 EC50 及其 95% 置信区间。
应用领域
- 化学品水生毒性分类（REACH、CLP）
- 工业和城市污水毒性评估
- 地表水水质监测
- 废物分类（水环境毒性）
- 环境影响评价（EIA）
- 污水处理厂效能研究
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 受试生物 | 大型溞 Daphnia magna Straus，幼溞 <24 h |
| 暴露时间 | 24 和 48 h |
| 终点 | EC50（活动抑制） |
| 温度 | 20 ± 2°C |
| 光周期 | 光照 16 h / 黑暗 8 h |
| 有效性判据 | 对照组活动抑制率 ≤10% |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 6341:2013
- 标准名称（波兰语）
- Jakość wody — Oznaczanie hamowania ruchliwości Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Test ostrej toksyczności
- 标准名称（英语）
- Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Acute toxicity test
分步操作程序
-
大型溞培养
在 ISO 培养液中于 20°C、16/8 h 光周期下维持种群。每日投喂藻类。取 <24 h 幼溞供试验用。
-
配制稀释液
按等比系列配制 5–7 个样品浓度（如 100、50、25、12,5、6,25%）。对照 = 纯培养液。
-
暴露
每个容器（50 mL 溶液）用巴斯德吸管移入 5 只幼溞。每浓度 4 个重复 = 20 只。试验期间不投饵。
-
24 h 观察
在体视显微镜下观察。计数活动受抑制个体（轻摇后 15 s 内不能游动）。
-
48 h 观察
重复观察。记录各浓度的抑制个体数。测量对照样的 pH 和溶氧。
-
EC50 计算
用概率单位法或逻辑斯蒂法计算 EC50 及 95% 置信区间。核查有效性：对照抑制率 ≤10%。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 人工气候箱/培养箱 | Binder KBF 240、Memmert ICH260L（20°C，光周期） | 15 000–40 000 PLN |
| 体视显微镜 | Olympus SZX7、Leica S9i、Zeiss Stemi 305 | 5 000–25 000 PLN |
| 溶氧仪 | WTW Oxi 3310、Hach HQ40d | 3 000–12 000 PLN |
| pH 计 | Mettler Toledo SevenCompact | 3 000–8 000 PLN |
| 试验容器（50–100 mL 烧杯） | 硼硅玻璃烧杯，配玻璃盖 | 10–30 PLN / 只 |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 培养液（ISO 水） | — | 去离子水中含 CaCl₂（294 mg/L）+ MgSO₄（123 mg/L）+ NaHCO₃（65 mg/L）+ KCl（5,75 mg/L） |
| 重铬酸钾 K₂Cr₂O₇ | 7778-50-9 | 有效性试验参比物质。24 h EC50：0,6–2,1 mg/L |
| 溞类饵料 | — | 小球藻（绿藻）培养液，0,1–0,2 mg C/只/天 |
职业健康与安全
- 重铬酸钾 — 1B 类致癌物、致突变。须在通风柜中操作并佩戴手套。
- 样品可能含有毒物质 — 必须佩戴丁腈手套
- 试验废物 — 收集于化学废物容器中
- 生物培养 — 保持无菌，避免污染
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 6341:2013 — 《Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Acute toxicity test》。
该方法的原理是什么？
将幼溞（出生 <24 h，每重复 5 只，4 个重复）暴露于受试物质的 5–7 个浓度（等比系列）及对照（纯培养液）中。24 和 48 h 后观察活动受抑制个体数（轻摇后 15 s 内不能游动）。
测量范围和准确度是多少？
受试生物：大型溞 Daphnia magna Straus，幼溞 <24 h；暴露时间：24 和 48 h；终点：EC50（活动抑制）；温度：20 ± 2°C。
完成检测需要多长时间？
各步骤所列时间合计约为 2 小时。整个程序共 6 个步骤。
需要哪些设备？
人工气候箱/培养箱、体视显微镜、溶氧仪、pH 计、试验容器（50–100 mL 烧杯）。核心仪器的参考价格（人工气候箱/培养箱）：15 000–40 000 PLN。
该检测用于哪些场景？
化学品水生毒性分类（REACH、CLP）；工业和城市污水毒性评估；地表水水质监测；废物分类（水环境毒性）；环境影响评价（EIA）；污水处理厂效能研究。
需要采取哪些安全防护措施？
重铬酸钾 — 1B 类致癌物、致突变。须在通风柜中操作并佩戴手套。；样品可能含有毒物质 — 必须佩戴丁腈手套；试验废物 — 收集于化学废物容器中；生物培养 — 保持无菌，避免污染。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 6341。