🍎 用高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素（环己基氨基磺酸盐）——用水从样品中提取环己基氨基磺酸钠（液体产品和可得澄清溶液的产品——稀释至约 400 mg/l；半固体产品、巧克力和脂肪乳液——用卡雷兹试剂澄清，巧克力和蛋黄酱先用石油醚脱脂），取 20 ml 溶液用硫酸和次氯酸钠转化为 N,N-二氯环己胺，用正庚烷萃取，在反相（C18，甲醇–水 80:20）上测定，紫外检测 314 nm；外标法校准，结果以环己基氨基磺酸计，单位 mg/kg 或 mg/l，不保留小数，PN-EN 12857

食品化学 PN-EN 12857

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 SIST EN 12857:2000 样本，即 EN 12857:1999（英文文本；文件为扫描件——页面按图像阅读）：EN 标题页、目录、前言和第 1–9 章（至试验报告，EN 第 7 页）。样本不含附录 A（次氯酸盐溶液中有效氯的测定）、B（图——示例色谱图）、C（精密度数据）和 D（参考文献）；其标题来自目录。

根据 EN 12857:1999 的文本。本标准由 CEN/TC 275“食品分析——横向方法”（秘书处 DIN）制定，CEN 于 16.04.1999 批准；各国标准最迟须在 1999 年 10 月采用。范围（1）：用 HPLC 测定食品中环己基氨基磺酸钠的方法；按 ISO 5725:1986 在柠檬水、橙汁饮料、水果酸奶和喷射奶油上经实验室间研究验证；据经验该方法也适用于酸黄瓜、罐装樱桃、菠萝、橙子果肉饮料、杏和黑莓果酱、樱桃果肉饮料、硬糖、水果和草莓酸奶、水果夸克、苹果葡萄干米布丁、巧克力和香草布丁粉、香草冰淇淋以及百香果–橙冰淇淋。引用文件（2）：EN ISO 3696（分析实验室用水）。原理（3）：用水从样品中提取环己基氨基磺酸钠，转化为 N,N-二氯环己胺，在反相色谱柱上用 HPLC 测定，紫外检测 314 nm。试剂（4）：分析纯，水至少符合 EN ISO 3696 的 1 级；HPLC 级甲醇和正庚烷；沸程 40–60 °C 的石油醚；无水硫酸钠（必要时用正庚烷洗涤）；碳酸钠溶液 50 g/l；含 1,7 % 有效氯的次氯酸钠溶液（由市售品稀释，定期检查氯含量，例如按附录 A）；硫酸 50 %（质量分数）；标准溶液——约 898 mg 环己基氨基磺酸钠溶于 200 ml（环己基氨基磺酸 800 mg/200 ml），取 0,25、1、2,5、5、10 和 20 ml 稀释至 100 ml，得到 10、40、100、200、400 和 800 mg/l 的酸；4.8 的脚注：环己基氨基磺酸钠换算为环己基氨基磺酸的系数 0,8909；卡雷兹溶液 1 号——15 g 亚铁氰化钾溶于 100 ml；2 号——30 g 硫酸锌溶于 100 ml；流动相——甲醇和水 80 + 20（体积比），过滤（例如 0,45 µm）并脱气，必要时略调比例；EDTA 调理溶液 10 g/l；纤维素粉（≥ 99,9 %，酸洗）。仪器（5）：带 314 nm 紫外检测器的色谱仪（最好为二极管阵列）；反相色谱柱，例如 RP C18，5 µm，250 mm × 4 mm，带 RP C18 预柱（尤其推荐用于固体样品）；色谱柱适用性判据——甜蜜素峰达到基线分离；若二极管阵列检测器或第二波长测量显示干扰，须选择其他色谱条件；超声浴、均质器、60 °C 水浴、至少 1400 g 的离心机、分液漏斗、折叠滤纸，可选相分离滤纸。溶液制备（6.1）：液体产品和可得澄清溶液的产品（例如澄清果汁、过滤的酸黄瓜汁液、硬糖）——用水稀释至甜蜜素约 400 mg/l，或直接进行衍生化；半固体产品（例如乳制品、甜点、喷射奶油、浑浊果汁、果酱）——约 15 g 置于 100 ml 容量瓶中加 80 ml 水，超声 10 min，加卡雷兹 1 号和 2 号各 1–2 ml，用水定容，过滤并弃去最初 10 ml；巧克力——约 15 g 于 60 °C 熔化，用 25 ml 石油醚萃取脂肪两次并离心，蒸除残余石油醚，加 30 ml 水，转入 100 ml 容量瓶，加卡雷兹 1 号和 2 号各 1 ml，20 °C，定容，过滤；脂肪乳液（例如蛋黄酱）——约 15 g 加 2,5 g 纤维素，用 25 ml 石油醚萃取两次，加 40 ml 水，之后同巧克力；不溶性无脂残渣超过约 3 g 时，建议过滤前离心并洗涤沉淀两次；取 20 ml 用于衍生化。衍生化（6.2）：警告——会生成氯气，须在有效的通风橱中操作；在分液漏斗中将 20 ml 样品或标准溶液与 1 ml 硫酸、10,0 ml 正庚烷和 2,5 ml 次氯酸钠剧烈振摇 1 min，弃去下层水相，庚烷层用 25 ml 碳酸钠溶液洗涤（30 s），用 1 g 硫酸钠干燥（乳液约 7 g，或用相分离滤纸）并过滤；衍生化后的溶液在 +4 °C 下稳定 24 h。鉴定（6.3）：通过与标准品比较保留时间、共进样或向样品中加标，并在适当波长范围记录光谱；标准品进样间隔至少 15 min，样品之间间隔足够长（例如 30 min）；对 5.1.2 的色谱柱已验证的条件：流速 1,0 ml/min，进样 20 µl，314 nm；每日调理：水 10 min，EDTA 溶液 30 min，水 10 min。测定（6.4）：外标法——峰面积或峰高与最接近浓度的标准品比较，或用校准曲线（环己基氨基磺酸浓度，mg/l），并检查线性。计算（7）：w 或 ρ = A1 · V1 · m1 · F / (A2 · V2 · m0) · 1000（外标；V1 和 V2 均为 100 ml，m1——标准品中甜蜜素质量，mg，m0——试样质量或体积，F——附加稀释系数），或 w 或 ρ = ρcs · V1 · F / m0（校准曲线）；结果以环己基氨基磺酸计，mg/kg 或 mg/l，不保留小数；7.3 的注：环己基氨基磺酸钠换算为环己烷氨基磺酸的系数 0,8906。精密度（8）：实验室间研究数据（附录 C）可能不适用于其他浓度范围和基质；重复性 r 和再现性 R：柠檬水（均值 435,9 mg/l）——r 16,7，R 38,1 mg/l；橙汁饮料（178,3 mg/l）——r 15,4，R 24,4 mg/l；喷射奶油（280,9 mg/kg）——r 26,0，R 49,7 mg/kg；水果酸奶（647,6 mg/kg）——r 42,4，R 168,4 mg/kg。试验报告（9）：样品标识、引用本标准、采样日期和方式（如已知）、收样和检测日期、带单位的结果、方法未涵盖的观察和操作。

现行状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 检索（关键词“12857”，03.10.2026）中唯一结果是 PN-EN 12857:2002（波兰文版，“采用：EN 12857:1999 [IDT]”），无撤销标注。目录卡：发布日期 06.05.2002，15 页，KT 235 食品分析，ICS 67.050，无撤销标注。在 iTeh 目录中（读取于 03.10.2026）EN 12857:1999 状态为“Published”，阶段 90.93（“Decision to confirm”），复审完成日期 30.09.2026；该卡上的“Withdrawal Date 31-Oct-1999”字段是撤销相冲突国家标准的期限，并非 EN 12857 被撤销。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据载入至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。编号 12857 出现在 4 家实验室的 4 条记录中：AB 377、AB 400、AB 451、AB 583。在现行 PCA 文件中（读取于 03.10.2026；AB 451 第 26 版，24.11.2025；AB 377 第 29 版，12.12.2025；AB 583 第 22 版，29.01.2026；AB 400 第 37 版，07.08.2026），该编号出现在同样 4 家实验室的 4 行中；每份文件的页码标记数等于 PDF 页数，无重复；检索 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法为“PN-EN 12857:2002”（AB 451、AB 583）、带空格的“PN - EN 12857:2002”（AB 377），以及不带年份的“PN-EN 12857”并与程序 PB-262 一起列于灵活认可范围（AB 400）。这些项目均未暂停。“实验室”标签页（关键词“PN-EN 12857”）显示 3 家实验室——AB 400、AB 451、AB 583——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上用标签页查询核实；AB 377 在连字符两侧加了空格，因此按前缀匹配检索不到。数据库副本中没有其他与甜蜜素相关的参考文件（检索“cyklamin”，03.10.2026）。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。检测对象：食品浓缩物、无酒精饮料（含气、不含气、果汁、糖浆）、膳食补充剂（AB 377）；无酒精饮料、膳食补充剂（AB 451）；无酒精饮料、糖果制品、膳食补充剂（AB 583）；食品——灵活范围，“食品添加剂含量”（AB 400）。特性和范围：甜蜜素酸在固体样品中（50–2000）mg/kg、在液体样品中（10–800）mg/l，环己基氨基磺酸钠（56–2245）mg/kg 和（11–898）mg/l（AB 377）；甜蜜素酸（18–534）mg/l 或 mg/kg（AB 451）；甜蜜素（10–2000）mg/l 或 mg/kg（AB 583）。技术：HPLC-DAD（AB 377、AB 400）、HPLC-UV/VIS（AB 451）、HPLC-UV（AB 583）。

容易得到表面正确结果的环节。关于量：标准以环己基氨基磺酸给出结果（7.1–7.3），而标准品按环己基氨基磺酸钠称量；换算系数在标准中出现两次，第四位数字不同——4.8 脚注为 0,8909，7.3 的注为 0,8906；AB 377 分别给出酸和环己基氨基磺酸钠的范围（例如 2000 和 2245 mg/kg）。关于基质：验证在柠檬水、橙汁饮料、水果酸奶和喷射奶油上进行，精密度数据可能不适用于其他基质和范围（1、8.1）；经验基质清单未提及膳食补充剂，而有三家实验室的范围包含它。关于制备：巧克力和蛋黄酱在澄清前须用石油醚脱脂（6.1.3、6.1.4），不溶残渣较多（超过约 3 g）时建议离心，以考虑沉淀体积。关于衍生化：次氯酸盐溶液应含 1,7 % 有效氯，并定期检查（4.6）；衍生化后的溶液在 +4 °C 下仅稳定 24 h（6.2）。关于色谱：二极管阵列或第二波长发现的干扰需要改变条件（5.1.2），进样间隔过短可能与先前样品的峰混淆（6.3）。关于范围：精密度数据覆盖 178,3–647,6 mg/l 或 mg/kg；实验室给出的范围为 10 至 2000 mg/l 或 mg/kg。

我们不提供的内容。有效氯测定程序（附录 A）、示例色谱图（附录 B）、详细精密度数据（附录 C）和参考文献我们不引用——它们在样本之外。我们不提供食品添加剂法规中甜蜜素的最大允许限量。

方法原理

用水从样品中提取环己基氨基磺酸钠——经稀释、卡雷兹试剂澄清或石油醚脱脂后——取 20 ml 溶液用硫酸酸化，并在正庚烷存在下用次氯酸钠氧化，使甜蜜素转化为进入庚烷相的 N,N-二氯环己胺。庚烷层经碳酸钠洗涤、硫酸钠干燥后在反相色谱柱（C18，甲醇–水 80:20）上分离，于 314 nm 测定吸光度。用外标法或校准曲线求得环己基氨基磺酸的浓度，单位 mg/kg 或 mg/l。

应用领域

• 食品中的甜蜜素：在柠檬水、橙汁饮料、水果酸奶和喷射奶油上验证；据经验也适用于水果制品、果酱、果肉饮料、糖果、甜点和冰淇淋（1）
• 液体、半固体产品、巧克力和脂肪乳液——各有制备程序（6.1）
• 无酒精饮料、食品浓缩物、糖果制品、膳食补充剂、食品——PCA 中 4 家实验室认可范围内的项目

关键参数

标准

标准编号

PN-EN 12857:2002

标准名称（波兰语）

Artykuły żywnościowe — Oznaczanie zawartości cyklaminianu — Metoda wysokosprawnej chromatografii cieczowej

标准名称（英语）

Foodstuffs — Determination of cyclamate — High performance liquid chromatographic method

分步操作程序

1. 样品溶液

   液体——稀释至约 400 mg/l；半固体——15 g、水、超声、卡雷兹；巧克力和蛋黄酱——石油醚脱脂（6.1）。PN-EN 12857:2002 在 PKN 中无撤销标注（03.10.2026）。

2. 衍生化

   20 ml + 硫酸 + 正庚烷 + 次氯酸盐，1 min；碳酸钠洗涤，硫酸钠干燥；在通风橱中操作（6.2）。

3. 色谱

   用水和 EDTA 调理色谱柱；进样 20 µl，1,0 ml/min，314 nm；按保留时间和光谱鉴定（6.3）。

4. 校准

   外标或用 10–800 mg/l 溶液绘制校准曲线，检查线性（6.4）。

5. 结果

   按公式（1）或（2），以环己基氨基磺酸计 mg/kg 或 mg/l，不保留小数（7）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 衍生化会释放氯气——只能在有效的通风橱中进行（6.2 中的警告）
• 石油醚、正庚烷和甲醇——易燃；次氯酸盐和硫酸——腐蚀性

常见问题