🦠 化妆品中的Candida albicans（白色念珠菌）——在Eugon LT 100肉汤中增菌并在含氯霉素的沙氏琼脂上分离的检出法
三句话速览
把化妆品样品（≥ 1 g或1 ml）在非选择性Eugon LT 100肉汤中增菌，在沙氏葡萄糖氯霉素琼脂（pH 5。该检测依据 PN-EN ISO 18416:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 18416:2015 + Amd 1:2022)；样品：至少1 g或1 ml产品。整个程序共 6 个步骤；主要用于：化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的C. albicans、微生物风险高的水基产品（乳霜、润肤乳、凝胶）——批次放行、防腐配方研制过程中原料和产品的检验。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 18416:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 18416:2015 + Amd 1:2022)
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 6
- 样品: 至少1 g或1 ml产品
- 步骤: 非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定
- 增菌肉汤: Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤）
概述
ISO 18416:2015给出了检出和鉴定Candida albicans的一般指南——它是化妆品中的“规定”微生物；规定微生物的清单可能因国而异。该方法基于在非选择性液体培养基（增菌肉汤）中检出C. albicans，随后在选择性琼脂培养基上分离；视所要求的检出水平而定，其他方法也可能是适宜的（如转接到非选择性培养基并用试剂盒鉴定）。对于与水不混溶的产品，ISO 18415可能是适宜的；替代方法（如自动化方法）在证明等效后可以使用。该标准建议进行微生物风险分析；低风险产品（ISO 29621）包括水分活度低的、含水醇的和pH极端的产品。
在波兰它以PN-EN ISO 18416:2016-01连同A1:2023-03修改单施行（取代了PN-EN ISO 18416:2009）。它属于实验室用于化妆品微生物洁净度检验的PN-EN ISO标准系列（与21149、16212、21150、22717、22718并列）；Candida albicans ATCC 10231菌株也是防腐效能试验中的试验菌之一。
方法原理
第一步是在非选择性肉汤中增菌，它使微生物数量增加而不会被选择性－鉴别性培养基中的选择性成分抑制；第二步（分离）在选择性培养基上进行，随后做鉴定试验。样品对微生物生长可能存在的抑制必须被中和，而产品抗微生物性能的中和须经检查并证明（标准第11章）。样品为用于初始悬液的至少1 g或1 ml产品。按标准规定的培养基：作为酵母菌悬液稀释液的胰蛋白胨氯化钠溶液、用于适用性试验的沙氏葡萄糖琼脂（SDA）（也允许使用其他琼脂）、用于增菌的Eugon LT 100肉汤（也允许使用其他肉汤）、用于分离C. albicans的沙氏葡萄糖氯霉素琼脂（在121 °C下灭菌15 min后pH为5.6 ± 0.2；也允许使用其他选择性琼脂），以及用于鉴定的含1 %聚山梨酯80的玉米粉琼脂。
应用领域
- 化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的C. albicans
- 微生物风险高的水基产品（乳霜、润肤乳、凝胶）——批次放行
- 防腐配方研制过程中原料和产品的检验
- 化妆品行业的合同实验室和企业实验室（PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416系列）
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 样品 | 至少1 g或1 ml产品 |
| 步骤 | 非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定 |
| 增菌肉汤 | Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤） |
| 分离琼脂 | 沙氏葡萄糖氯霉素琼脂，灭菌后pH 5.6 ± 0.2 |
| 鉴定 | 含1 %聚山梨酯80的玉米粉琼脂；鉴定试验 |
| 有效性条件 | 已证明抗微生物性能被中和（第11章） |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 18416:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 18416:2015 + Amd 1:2022)
- 标准名称（波兰语）
- Kosmetyki — Mikrobiologia — Wykrywanie obecności Candida albicans
- 标准名称（英语）
- Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
分步操作程序
-
风险分析与样品
确定产品是否需要检验（ISO 29621）。取至少1 g或1 ml产品，在增菌肉汤中配制初始悬液。
-
适用性试验
用参比菌株在胰蛋白胨氯化钠溶液中的悬液和SDA琼脂，证明产品抗微生物性能已被中和（第11章）。
-
增菌
把初始悬液在非选择性Eugon LT 100肉汤中按标准给出的条件培养。
-
分离
从培养物接种沙氏葡萄糖氯霉素琼脂并培养；判定类酵母菌落的生长情况。
-
鉴定
用鉴定试验鉴定可疑菌落，其中包括接种于含1 %聚山梨酯80的玉米粉琼脂并做显微镜检查。
-
结果
报出受检产品样品（1 g或1 ml）中C. albicans的存在或不存在，并说明已证明的中和情况。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 高压灭菌器121 °C | 培养基灭菌15 min | — |
| 用于培养的培养箱 | 条件按标准操作步骤各章的规定 | — |
| 培养皿、试管、无菌移液管、接种环 | 分离和鉴定用接种 | — |
| 显微镜 | 在玉米粉琼脂上判定酵母菌的形态 | — |
| 鉴定试剂盒 | 分离株的鉴定（按标准） | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| 胰蛋白胨氯化钠溶液 | — | 酵母菌悬液（参比菌株）的稀释液 |
| 沙氏葡萄糖琼脂（SDA） | — | 方法适用性试验 |
| Eugon LT 100肉汤 | — | 带防腐剂中和的非选择性增菌 |
| 沙氏葡萄糖氯霉素琼脂 | — | C. albicans的选择性分离 |
| 含1 %聚山梨酯80的玉米粉琼脂 | — | C. albicans的鉴定 |
职业健康与安全
- Candida albicans是机会致病菌——在微生物实验室条件下操作，对培养物高压灭菌
- 培养基中的氯霉素——称量时避免吸入粉尘和接触皮肤
- 高压灭菌后的高温培养基——有烫伤风险
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 18416:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 18416:2015 + Amd 1:2022) — 《Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans》。
该方法的原理是什么？
第一步是在非选择性肉汤中增菌，它使微生物数量增加而不会被选择性－鉴别性培养基中的选择性成分抑制；第二步（分离）在选择性培养基上进行，随后做鉴定试验。样品对微生物生长可能存在的抑制必须被中和，而产品抗微生物性能的中和须经检查并证明（标准第11章）。
测量范围和准确度是多少？
样品：至少1 g或1 ml产品；步骤：非选择性增菌 → 选择性分离 → 鉴定；增菌肉汤：Eugon LT 100（或标准规定的其他肉汤）；分离琼脂：沙氏葡萄糖氯霉素琼脂，灭菌后pH 5.6 ± 0.2。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 6 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
高压灭菌器121 °C、用于培养的培养箱、培养皿、试管、无菌移液管、接种环、显微镜、鉴定试剂盒。
该检测用于哪些场景？
化妆品微生物洁净度的控制——检出作为规定微生物的C. albicans；微生物风险高的水基产品（乳霜、润肤乳、凝胶）——批次放行；防腐配方研制过程中原料和产品的检验；化妆品行业的合同实验室和企业实验室（PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416系列）。
需要采取哪些安全防护措施？
Candida albicans是机会致病菌——在微生物实验室条件下操作，对培养物高压灭菌；培养基中的氯霉素——称量时避免吸入粉尘和接触皮肤；高压灭菌后的高温培养基——有烫伤风险。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 18416。