🦠 水中噬菌体浓缩方法的验证（预计每毫升少于3个噬斑形成颗粒时）——用处理过或未处理的污水制备加标材料（1000 g离心20 min或经8–12 µm过滤，60–200 pfp/ml，5 %甘油，10 ml分装于−20或−70 °C冷冻），用离散度检验T1（0.01 < T1 < 5.99）和T2（< 3.84）核查；每种水体在不同日期和季节至少取五个样品，按0.125、0.25、0.5和1 × Vmax体积各加1 ml加标材料，在全部最终浓缩液中测定回收，用Dixon检验剔除离群值；噬菌体计数按ISO 10705-1、-2或-4；PN-EN ISO 10705-3:2025-06

微生物学 PN-EN ISO 10705-3

概述

本标准涵盖的内容。我们阅读的是ISO 10705-3:2003（2003年10月1日第一版，法文版）的iTeh样本——PN-EN ISO 10705-3:2025-06等同采用EN ISO 10705-3:2024和ISO 10705-3:2003（PKN检索），因此所读ISO文本即现行文本：前言、第1–8章及第9章至9.2结束——样本止于第5页。计算（10）、分析质量控制（11）、试验报告（12）、附录A（按体积、浊度和颗粒含量推荐的浓缩方法）和附录B（验证示例）我们未阅读；其标题来自目录。EN ISO 10705-3:2024的封面我们未阅读。

依据ISO 10705-3:2003文本。本标准由ISO/TC 147“水质”第SC 4分委员会“微生物方法”编制。ISO 10705系列：第1部分——F特异性RNA噬菌体，第2部分——体细胞大肠杆菌噬菌体，第3部分——浓缩方法验证，第4部分——感染脆弱拟杆菌的噬菌体。警告：由使用者制定安全卫生措施；重要：参与验证浓缩方法的人员必须具备噬菌体计数方法的经验（ISO/TR 13843）。范围（1）：评价从水中浓缩噬菌体方法性能的一般原则；对预计每毫升少于3个噬斑形成颗粒（pfp）的样品建议浓缩；只要悬浮物和/或溶解物的数量和性质不干扰浓缩程序，方法可用于各类水；本标准不给出浓缩方法的具体细节，只概述评价某方法对给定水体类型和体积适用性的基本原则；附录A给出已证明满意的方法示例及其适用范围。引用文件（2）：ISO 3696、ISO 6887-1、ISO 8199、ISO 10705-1、-2、-4、ISO/IEC指南2。定义（3.1）：噬菌体——能感染选定宿主菌株的细菌病毒；注：在宿主菌株的融合菌苔上产生可见噬斑（裂解区）。原理（4）：用选定方法处理样品，将噬菌体从较大体积（100 ml至数升）浓缩到较小体积（几毫升至20 ml）；浓缩液按标准方法或其他适当程序检测；浓缩方法应在规程中准确描述（尽可能按ISO标准格式），包括目标噬菌体类群及其检测方法、水体类型、分析体积范围和适用范围的例外（如浊度）；验证就是用天然污染水（未处理或处理过的污水）加标的一系列样品测定噬菌体的回收率，在一定体积范围内进行，特别关注回收率的重现性。试剂（5）：质量稳定的成分和分析纯化学品；玻璃蒸馏水或去离子水，不含抑制细菌生长的物质，至少为3级（ISO 3696）；稀释液——蛋白胨盐水或符合ISO 6887-1或ISO 8199的其他稀释液；培养基和参比菌株按相应噬菌体计数方法（ISO 10705-1、-2、-4）；甘油（870 g/l），(121 ± 3) °C高压灭菌15 min，室温避光保存不超过一年。仪器（6）：安全措施——现场设备使用前消毒；某些步骤需要静水压或气压；按计数方法和浓缩规程使用常规微生物设备。采样（7）：10 l以内的样品易于运回实验室——按ISO 8199（另见ISO 19458）采集和运送；更大体积时，第一步浓缩最好在现场进行（可能持续数小时）；如同时检测细菌指示物，应按比例取样，最好从浓缩装置的侧流灌装样品瓶；第一步得到的滤膜、沉淀等可在现场继续处理或运回实验室；中间步骤的运输和保存条件应纳入验证。加标材料（8）：取一级或二级（生物处理）污水样品，1000 g离心20 min或用8–12 µm滤膜过滤；上清液或滤液置于融冰中；以1 ml体积计数目标噬菌体，必要时稀释至60–200 pfp/ml；加甘油至体积分数5 %，混匀，按10 ml分装于玻璃或塑料瓶（或管、小瓶），于(−20 ± 5) °C或(−70 ± 10) °C冷冻；室温解冻两瓶，每瓶检测两份0.5 ml——平均数应在规定范围内（30–100 pfp）；用Cochran离散度统计量检验瓶内和瓶间均匀性：T1（瓶内变异，自由度I(J−1)）和T2（瓶间变异，自由度I−1），I = 2瓶，J = 2重复；噬菌体随机分布时，T1和T2近似服从自由度分别为2和1的χ²分布；0.01 < T1 < 5.99且T2 < 3.84时材料可接受；注：部分净化的污水中天然存在的体细胞大肠杆菌噬菌体、F特异性RNA噬菌体和感染脆弱拟杆菌的噬菌体，加5 %甘油冷冻后无明显失活，可在低于(−20 ± 5) °C、最好在(−70 ± 10) °C下保存至少一年而数量无明显下降。批量方法（9.1.1）：采集浓缩程序适用范围内所有水体类型的样品，在不同日期采集，最好代表不同季节和气候条件；每种水体至少研究五个样品；Vmax——方法拟处理的最大样品体积；验证至少需要3 × Vmax样品；准备0.125、0.250、0.500和1 × Vmax体积的容器，每个加入1 ml预热至室温的加标材料，其余加标材料置于冰中。连续方法（9.1.2）：对每种水体在不同日期进行现场研究，至少五个样品，体积相同；将1 ml材料加到约10 ml稀释液中，分四次相近的份量注入浓缩装置进水流（如用注射器针头穿过软管），每次在约五分之一水量通过后注入。回收率评价（9.2）：按所研究浓缩方法的规程处理加标样品，包括尽可能模拟实际样品的运输和保存；以每份1 ml或更少检测全部最终浓缩液；可能时还检测截留在浓缩表面（如滤膜）上的噬菌体；同时检测两份0.5 ml加标材料——用于计算浓缩效率和T1、T2；若超过20 %（5份中1份）加标材料样品不满足T1或T2，弃用该材料；若不超过20 %，不计该次分析结果并重新分析；用Dixon检验剔除极端值；分析数据前至少应有五次未被剔除的试验；若天然水可能含有能被同一宿主检出的噬菌体，应计数——若超过加标数的20 %，将水加热至80 °C保持30 min，冷却后使用；若少于20 %，计数并在数据分析中考虑（10）。

状态（截至2026年10月3日）。PKN检索（检索词“10705-3”，2026年10月3日）得到三条结果：PN-EN ISO 10705-3:2025-06——波兰文版和英文版，“采用：EN ISO 10705-3:2024 [IDT]，ISO 10705-3:2003 [IDT]”，无撤销标注；以及PN-ISO 10705-3:2021-01（波兰文版）——“已撤销，由PN-EN ISO 10705-3:2025-06英文版替代”。PN-ISO 10705-3:2021-01记录（2026年10月3日读取）：发布日期2021-01-27，撤销日期2025-06-13，采用ISO 10705-3:2003 [IDT]，KT 120“水质——微生物和生物检测”，由PN-EN ISO 10705-3:2025-06（英文版）替代。撤销对结果意味着什么：两项标准采用的是同一ISO 10705-3:2003文本（新标准通过EN ISO 10705-3:2024采用），验证原则不变；变化的是应在认可范围和报告中出现的文件编号。

实验室数量及引用形式（认可范围数据库副本，数据截至2026年9月17日，2026年10月3日读取）。编号10705-3出现在2家实验室的2条记录中：AB 700和AB 1095。在PCA现行文件中（2026年10月3日读取；AB 1095第25版，2026年7月3日；AB 700第33版，2026年8月21日）该编号出现在同样的2家实验室；每份文件的页码标记数等于PDF页数，无重复；检索2026年10月3日从BIP下载的全部PCA文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法：“PN-EN ISO 10705-3:2025-06”（AB 700）和“PN-ISO 10705-3:2021-01”（AB 1095——2025年6月13日已撤销的版本），两家均与PN-EN ISO 10705-2:2005一起。上述项目均未暂停。“实验室”选项卡在检索词“PN-EN ISO 10705-3”下显示AB 700，在“PN-ISO 10705-3”下显示AB 1095——2026年10月3日在labcoda.pl生产服务器上通过选项卡查询核实。

实验室检测内容（PCA项目）。AB 700：水、人类饮用水、污水——体细胞大肠杆菌噬菌体数量，平板法（倾注平板），PN-EN ISO 10705-2:2005和PN-EN ISO 10705-3:2025-06。AB 1095：水、人类饮用水——体细胞大肠杆菌噬菌体数量，平板法（倾注平板），PN-EN ISO 10705-2:2005和PN-ISO 10705-3:2021-01。按PN-EN ISO 10705-2计数体细胞大肠杆菌噬菌体在知识库中有单独条目。

容易得到貌似正确结果的环节。标准性质：本标准不是浓缩方法，而是其验证原则——具体方法由实验室规程描述，示例见附录A（1、4）。使用范围：预计少于3 pfp/ml时建议浓缩（1）；验证涵盖规程中的水体类型和体积范围，例外（如浊度）须在规程中说明（4）。加标材料：污水中天然存在的噬菌体；用T1和T2核查均匀性，超过20 %不合格时整批材料弃用（8、9.2）。样品：每种水体至少五个，不同日期、最好不同季节，四个体积直至Vmax（9.1）。回收：检测全部浓缩液，可能时也检测滤膜上截留的噬菌体（9.2）。天然噬菌体：超过加标数的20 %时，将水在80 °C加热30 min（9.2）。运输：中间步骤的运输和保存条件属于验证内容（7）。版本：AB 1095引用2025年6月13日已撤销的PN-ISO 10705-3:2021-01——技术文本相同（ISO 10705-3:2003）。

我们未提供的内容。回收率计算公式（10）、质量控制要求（11）、报告内容（12）以及附录A的方法和附录B的示例我们未予转述——它们在样本范围之外。本条目不概述ISO 10705-1、-2和-4。

方法原理

拟将噬菌体从大体积水（100 ml至数升）转移到几毫升中的浓缩方法，通过其回收率来核查。用污水中天然存在的噬菌体制备加标材料，加甘油冷冻，并核查均匀性（T1和T2检验）。向一系列体积的待测水（直至方法的最大体积）各加入1 ml同一材料，按规程浓缩样品，用标准计数方法在全部浓缩液中计数噬菌体；在每种水体至少五个样品中重复得到的回收率，表明方法是否适用。

应用领域

• 需要浓缩的低噬菌体数量水体（< 3 pfp/ml）（1）
• 批量浓缩方法（容器中的样品）和连续浓缩方法（现场流经装置）的验证（9.1）
• 体细胞大肠杆菌噬菌体、F特异性RNA噬菌体和脆弱拟杆菌噬菌体——按ISO 10705-1、-2、-4计数（2、5.3）
• 水、人类饮用水和污水——体细胞大肠杆菌噬菌体数量（与PN-EN ISO 10705-2一起）——PCA中2家实验室的2条认可范围记录

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 10705-3:2025-06

标准名称（波兰语）

Jakość wody — Wykrywanie i oznaczanie liczby bakteriofagów — Część 3: Walidacja metod zatężania bakteriofagów z wody

标准名称（英语）

Water quality — Detection and enumeration of bacteriophages — Part 3: Validation of methods for concentration of bacteriophages from water

分步操作程序

1. 浓缩方法规程

   噬菌体类群、检测方法、水体类型、体积和例外（4）。PN-EN ISO 10705-3:2025-06——无撤销标注（PKN，2026年10月3日）。

2. 加标材料

   去除颗粒的污水，60–200 pfp/ml，5 %甘油，10 ml分装冷冻；T1、T2核查（8）。

3. 加标样品

   每种水体 ≥ 5个样品，四个体积直至Vmax，各加1 ml材料（9.1）。

4. 浓缩和计数

   按规程，包括运输和保存；全部浓缩液，也包括滤膜上的噬菌体（9.2）。

5. 评价

   材料核查（T1、T2）、Dixon检验、天然噬菌体；计算——在样本范围之外（9.2、10）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 现场设备使用前消毒，并采取适合所用消毒剂的安全措施（6）
• 在静水压或气压下进行的步骤需要采取适当的安全措施（6）

常见问题