🦠 化妆品中的嗜温需氧菌——在SCDA/TSA琼脂上计数（32.5 °C，72 h）或增菌后检出
三句话速览
把化妆品在中和性稀释液（如SCDLP 20）中的初始悬液以倾注法或涂布法接种于大豆酪蛋白琼脂，或经膜过滤，在(32。该检测依据 PN-EN ISO 21149:2017-07 + A1:2023-01 (ISO 21149:2017 + Amd 1:2022)；培养（计数、过滤）：(32.5 ± 2.5) °C，72 h ± 6 h，需氧。整个程序共 7 个步骤；主要用于：化妆品微生物洁净度的常规控制——嗜温需氧菌数（CFU/g、CFU/ml）、微生物风险高的水基产品（凝胶、乳霜、润肤乳）——批次放行、只要求“存在／不存在”结果的产品——增菌变体。
要点速览
- 标准: PN-EN ISO 21149:2017-07 + A1:2023-01 (ISO 21149:2017 + Amd 1:2022)
- 类别: 微生物
- 操作步骤数: 7
- 培养（计数、过滤）: (32.5 ± 2.5) °C，72 h ± 6 h，需氧
- 增菌后检出: 在非选择性肉汤中 ≥ 20 h，随后琼脂48–72 h，(32.5 ± 2.5) °C
- 样品: 用于初始悬液的至少1 g或1 ml产品
概述
ISO 21149:2017给出了对化妆品中存在的嗜温需氧菌进行计数和检出的一般指南：通过需氧培养后在琼脂培养基上计数菌落，或通过检查增菌后无细菌生长。由于产品种类繁多，该方法未必在每一细节上都适宜（如对与水不混溶的产品）；其他方法（如自动化方法）在证明等效后可以使用。必要时，用参考文献中所列标准的试验对计数到或检出的微生物进行鉴定。该标准建议进行微生物风险分析，以确定该方法适用于哪些产品；低风险产品（ISO 29621）是那些水分活度低的、含水醇的、pH极端的产品等。
该方法包含三个变体：平板计数、膜过滤和增菌后检出。在每一变体中，产品对生长可能存在的抑制都必须被中和，且中和的有效性须经检查并证明。在波兰它以PN-EN ISO 21149:2017-07连同A1:2023-01修改单施行。检验化妆品的实验室用它在TSA琼脂上测定“需氧嗜温微生物”（细菌），并与在SDA琼脂上按PN-EN ISO 16212测定真菌并行进行。
方法原理
平板计数：在指定培养基上制备倾注平板或涂布平板，并接种规定量的初始悬液或其稀释液；在(32.5 ± 2.5) °C下需氧培养72 h ± 6 h；计数菌落形成单位（CFU）并计算每毫升或每克产品的嗜温需氧菌数。膜过滤：把适当量的已制备样品移入用无菌稀释液润湿的过滤装置，立即过滤并冲洗，再把滤膜移到琼脂培养基表面（按ISO 21148）；培养同上。增菌后检出：把规定量的初始悬液在含中和剂和／或分散剂的非选择性液体培养基中于(32.5 ± 2.5) °C下培养至少20 h，把规定量转接到非选择性琼脂上，在同一温度下需氧培养48–72 h，结果表示为样品S的产品中嗜温需氧菌的存在／不存在。培养基：中和性稀释液SCDLP 20（胰酶消化酪蛋白20.0 g、大豆卵磷脂5.0 g、聚山梨酯20 40.0 ml、水960 ml；聚山梨酯在(49 ± 2) °C水浴中溶解，加入各成分后加热约30 min；121 °C灭菌15 min）、用于计数的大豆酪蛋白琼脂（SCDA）或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）、用于检出的Eugon LT 100肉汤和琼脂。
应用领域
- 化妆品微生物洁净度的常规控制——嗜温需氧菌数（CFU/g、CFU/ml）
- 微生物风险高的水基产品（凝胶、乳霜、润肤乳）——批次放行
- 只要求“存在／不存在”结果的产品——增菌变体
- 细菌数量低或难以做平板接种的产品——膜过滤
- 防腐效能的检验（挑战试验）——存活细菌的计数
关键参数
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 培养（计数、过滤） | (32.5 ± 2.5) °C，72 h ± 6 h，需氧 |
| 增菌后检出 | 在非选择性肉汤中 ≥ 20 h，随后琼脂48–72 h，(32.5 ± 2.5) °C |
| 样品 | 用于初始悬液的至少1 g或1 ml产品 |
| 计数用培养基 | 大豆酪蛋白琼脂（SCDA）／胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） |
| 中和性稀释液 | SCDLP 20：酪蛋白20 g、大豆卵磷脂5 g、聚山梨酯20 40 ml、水960 ml |
| 结果 | 每ml或每g产品的CFU；或样品S中的存在／不存在 |
标准
- 标准编号
- PN-EN ISO 21149:2017-07 + A1:2023-01 (ISO 21149:2017 + Amd 1:2022)
- 标准名称（波兰语）
- Kosmetyki — Mikrobiologia — Zliczanie i wykrywanie mezofilnych bakterii tlenowych
- 标准名称（英语）
- Cosmetics — Microbiology — Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria
分步操作程序
-
初始悬液
取至少1 g或1 ml产品，在中和性稀释液（如SCDLP 20）中并酌情加入分散剂配制初始悬液；制备稀释液。
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中和的检查
检查并证明产品抗菌性能中和的有效性（该方法的每一变体均要求）。
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变体A——平板计数
把规定量的初始悬液或稀释液以倾注法或涂布法接种于大豆酪蛋白琼脂（SCDA/TSA）。
-
变体B——膜过滤
把适当量的样品移入用无菌稀释液润湿的过滤装置，立即过滤，按规程冲洗，并把滤膜移到琼脂表面（ISO 21148）。
-
培养与计数
在(32.5 ± 2.5) °C下需氧培养72 h ± 6 h；计数CFU并计算每ml或每g产品的嗜温需氧菌数。
-
变体C——增菌后检出
把规定量的初始悬液在含中和剂的非选择性肉汤（Eugon LT 100）中于(32.5 ± 2.5) °C下培养至少20 h，把规定量转接到非选择性琼脂上并需氧培养48–72 h；判定生长情况。
-
结果
报出每ml或每g产品的CFU，或样品S中嗜温需氧菌的存在／不存在；必要时鉴定分离株。
所需设备与仪器
| 设备 | 示例 | 参考价格 |
|---|---|---|
| 培养箱(32.5 ± 2.5) °C | 平板、滤膜和肉汤的需氧培养 | — |
| 高压灭菌器121 °C | 培养基灭菌15 min | — |
| 水浴(49 ± 2) °C | 在SCDLP 20中溶解聚山梨酯20 | — |
| 膜过滤装置 | 过滤变体（按ISO 21148） | — |
| 培养皿、移液管、均质器 | 初始悬液的制备和接种 | — |
试剂、培养基与耗材
| 试剂 | CAS | 详情 |
|---|---|---|
| SCDLP 20肉汤（胰酶消化酪蛋白、大豆卵磷脂、聚山梨酯20） | — | 中和防腐剂的稀释液 |
| 大豆酪蛋白琼脂（SCDA）／TSA | — | 嗜温需氧菌的菌落计数 |
| Eugon LT 100肉汤和Eugon LT 100琼脂 | — | 增菌后细菌的检出 |
| 胰蛋白胨氯化钠溶液 | — | 参比菌株悬液的稀释液 |
职业健康与安全
- 归属不明的细菌培养物——在微生物实验室条件下操作，对废弃物高压灭菌
- 高温培养基（49 °C水浴、121 °C高压灭菌器）——有烫伤风险
- 真空下的膜过滤——玻璃器具须完好
常见问题
该检测依据哪项标准？
该检测依据的标准为 PN-EN ISO 21149:2017-07 + A1:2023-01 (ISO 21149:2017 + Amd 1:2022) — 《Cosmetics — Microbiology — Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》。
该方法的原理是什么？
平板计数：在指定培养基上制备倾注平板或涂布平板，并接种规定量的初始悬液或其稀释液；在(32.5 ± 2.
测量范围和准确度是多少？
培养（计数、过滤）：(32.5 ± 2.5) °C，72 h ± 6 h，需氧；增菌后检出：在非选择性肉汤中 ≥ 20 h，随后琼脂48–72 h，(32.5 ± 2.5) °C；样品：用于初始悬液的至少1 g或1 ml产品；计数用培养基：大豆酪蛋白琼脂（SCDA）／胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）。
完成检测需要多长时间？
整个程序共 7 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。
需要哪些设备？
培养箱(32.5 ± 2.5) °C、高压灭菌器121 °C、水浴(49 ± 2) °C、膜过滤装置、培养皿、移液管、均质器。
该检测用于哪些场景？
化妆品微生物洁净度的常规控制——嗜温需氧菌数（CFU/g、CFU/ml）；微生物风险高的水基产品（凝胶、乳霜、润肤乳）——批次放行；只要求“存在／不存在”结果的产品——增菌变体；细菌数量低或难以做平板接种的产品——膜过滤；防腐效能的检验（挑战试验）——存活细菌的计数。
需要采取哪些安全防护措施？
归属不明的细菌培养物——在微生物实验室条件下操作，对废弃物高压灭菌；高温培养基（49 °C水浴、121 °C高压灭菌器）——有烫伤风险；真空下的膜过滤——玻璃器具须完好。
哪家实验室可以开展此项检测？
该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 21149。