🦠 食品、饲料和食品生产环境样品中在厌氧条件下生长的亚硫酸盐还原菌计数——取液体样品或初始悬液及其后续十倍稀释液各 1 ml（每级两个平皿），倾注冷却至 44–47 °C 的亚硫酸铁琼脂，凝固后覆盖 5–10 ml，于厌氧罐中 37 ± 1 °C 培养 24–48 h（怀疑有嗜热菌时另一组在 50 ± 1 °C）；在典型菌落少于 150、总菌落少于 300 的平皿上计黑色菌落（硫化亚铁）；可选的悬液热处理可得到芽孢数，PN-ISO 15213

微生物学 PN-ISO 15213

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 15213:2003 样本（英文文本，第一版，01.05.2003）：标题页、前言、引言、第 1–11 章以及附录 A（规范性，“程序示意图”）的标题——样本止于第 5 页，在示意图本身之前。原始文本中的数值（温度、时间、体积、培养基组成）脱离了句子——我们按页面版式（pdftotext -layout）对应。样本中 9.5 的部分句子被水印遮挡。替代标准我们读的是 iTeh 的 SIST EN ISO 15213-1:2023 样本（目录、含变更清单的前言、引言）。

根据 ISO 15213:2003 的文本。本标准由 ISO/TC 34“食品”第 SC 9 分委员会“微生物学”制定。引言：横向方法未必在每个细节上都适合某些产品——此时可因正当技术理由使用专用方法。范围（1）：对供人类食用和动物饲养的产品以及食品生产和处理区域环境样品中在厌氧条件下生长的亚硫酸盐还原菌进行计数。引用文件（2）：ISO 6887-1:1999、ISO 8261（乳）、ISO 7218:1996 及其 Amd 1:2001、ISO/TS 11133-1。定义（3.1）：在本标准条件下形成可计数典型菌落的细菌。原理（4）：两个平皿（或试管）亚硫酸铁琼脂加规定量的液体样品或初始悬液，另两个加十倍稀释液；37 ± 1 °C 厌氧培养 24–48 h（48 h 后最终读数），怀疑有嗜热菌时可在 50 °C 培养；计典型黑色菌落——菌落及周围区域变黑是硫离子与培养基中铁(III) 反应生成的硫化亚铁；结果以每毫升或每克表示。培养基（5.1）：酪蛋白酶解物 15 g，大豆胰酶解物 5 g，酵母提取物 5 g，焦亚硫酸钠（Na2S2O5）1 g，柠檬酸铁(III) 铵 1 g，琼脂 9–18 g（视凝胶强度而定），水 1000 ml；灭菌后 pH 7,6 ± 0,2（25 °C）；250 ml 分装于 500 ml 烧瓶，试管用 20 或 25 ml；121 °C 灭菌 15 min；使用前即刻除气；稀释液——按 ISO 6887-1:1999，5.2.1 的蛋白胨生理盐水。仪器（6）：均质器、44–47 °C 水浴、带厌氧条件检查系统的厌氧罐、37 ± 1 °C 培养箱及必要时 50 ± 1 °C 培养箱、16 mm × 160 mm 试管、500 ml 烧瓶。采样（7）：不属于本方法。制备（8、9.2）：按 ISO 6887-1、ISO 8261 或专用标准；有时需对初始悬液热处理以去除营养体——从适度热活化的巴氏杀菌作用（例如 75 °C 20 min）到煮沸数分钟；此时结果可报告为芽孢数。接种（9.3）：液体样品或初始悬液各 1 ml 接种于两个平皿，第一个十倍稀释液（液体样品为 10−1，初始悬液为 10−2——原文如此）1 ml 接种于另两个平皿，以及后续稀释液；向每个平皿倾注在水浴中冷却至 44–47 °C 的琼脂——样本原文为“approximately 15 min of iron sulfite agar”（体积单位写成了“min”）；从接种到倾注的时间不应超过 15 min；凝固后覆盖 5–10 ml 同种培养基；试管法——各 1 ml 加入两支含 44–47 °C 培养基的试管，冷水浴中凝固，覆盖 2–3 ml。培养（9.4）：平皿置于厌氧罐中 37 ± 1 °C 培养 24–48 h，怀疑有嗜热菌时另一组在 50 ± 1 °C；试管无需放入厌氧罐。计数（9.5）：24 h 和 48 h 读数；黑色菌落（可能带黑色区域）计为亚硫酸盐还原菌；注 1——培养基出现弥散的非特异性变黑，尤其在试管中，只产氢（不产 H2S）的厌氧菌也可能还原亚硫酸盐并使培养基变黑；计数典型菌落少于 150、总菌落少于 300 的平皿；试管只计菌落明显分开的；注 2——本标准可用于只计数梭菌属，但须对每个平皿的五个菌落确证属别（例如呼吸试验、芽孢形成）。结果表示（10）：按 ISO 7218:1996 的 Amd 1。试验报告（11）：包括含培养温度的方法、是否使用试管和热处理。

替代本标准的文件及其对结果的影响（依据 ISO 15213-1:2023 前言）。ISO 15213-1 第一版取消并替代 ISO 15213:2003，属技术性修订；与 CEN/TC 463 合作制定。主要变化：范围扩展至初级生产样品；对象改为“亚硫酸盐还原梭菌属”，而非“亚硫酸盐还原菌”——典型菌落须确证；琼脂中亚硫酸盐浓度由 1,0 g/l 降至 0,5 g/l；80 °C 10 min 热处理为可选（背景菌群多时或只计芽孢时）；取消试管接种和嗜热菌 50 °C 培养；增加确证说明，修改附录 A 示意图，增加方法性能特性（附录 C）和饲料方案（附录 D）。据引言，这些变化属于 ISO 17468 意义上的“重大”变化，对方法性能影响很大。该系列还包括 ISO 15213-2（产气荚膜梭菌计数）和 ISO/TS 15213-3（产气荚膜梭菌检测）。

现行状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 检索（关键词“15213”，03.10.2026）中 PN-ISO 15213:2005（波兰文版，“采用：ISO 15213:2003 [IDT]”）——“已撤销，由 PN-EN ISO 15213-1:2023-08（英文版）替代”。目录卡：发布日期 29.06.2005，撤销日期 23.02.2024，12 页，KT 3 食品链微生物学，ICS 07.100.30，“替代 PN-A-86034-12:1993”。PN-EN ISO 15213-1:2023-08（英文版）目录卡：发布 08.08.2023，34 页，KT 3，采用 EN ISO 15213-1:2023 和 ISO 15213-1:2023，“替代 PN-ISO 15213:2005”，补充件 PN-EN ISO 15213-1:2023-08/Ap1:2024-02E，无撤销标注。在 iTeh 目录中（读取于 03.10.2026）ISO 15213:2003 状态为“Withdrawn”，阶段 95.99，由 ISO 15213-1:2023、ISO 15213-2:2023 和 ISO/TS 15213-3:2024 修订替代。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据载入至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。不带部分号的编号“15213”出现在 3 家实验室的 4 条记录中：AB 285（2）、AB 418、AB 1866。在现行 PCA 文件中（读取于 03.10.2026；AB 285 第 28 版，13.01.2026；AB 418 第 37 版，26.01.2026；AB 1866 第 4 版，09.06.2026），该编号出现在同样 3 家实验室的 4 行中；每份文件的页码标记数等于 PDF 页数，无重复；检索 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件，未发现数据库副本以外的实验室。写法均为“PN-ISO 15213:2005”。这些项目均未暂停。AB 285 在同一文件中还有一项采用 PN-EN ISO 15213-1:2023-08。“实验室”标签页（关键词“PN-ISO 15213”）显示 5 家实验室——AB 285、AB 418、AB 1866 以及 AB 400 和 AB 1179——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上用标签页查询核实；AB 400 和 AB 1179 是通过带“PN-ISO”前缀的新系列分部写法出现的（AB 400 为“PN-ISO 15213-1”“PN-ISO 15213-2”；AB 1179 为“PN-ISO 15213-1:2023-08”），而不是因为已撤销的标准。

替代标准在认可范围中的情况（读取于 03.10.2026）。新系列第 1 部分（任何写法的“15213-1”）在现行 PCA 文件中出现于 11 家实验室：AB 285、AB 313、AB 370、AB 400、AB 452、AB 462、AB 819、AB 924、AB 1179、AB 1415、AB 1651；在数据库副本中为 10 家（无 AB 1651）。第 2 部分（产气荚膜梭菌）——在数据库副本中为 11 家实验室。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。AB 285：果蔬制品、肉制品和鱼制品中厌氧亚硫酸盐还原菌数量，以及其芽孢数（也包括乳和乳制品及苹果汁）；AB 418：废物中厌氧菌（包括亚硫酸盐还原菌）的芽孢（按 DAB-11 的 I、IV、V、VI、IX、XI 等组），脚注引用 24.12.2019 气候部长关于认定废物具有感染性条件的条例；AB 1866：植物生长辅助物（土壤改良剂、栽培基质、微生物肥料产品）中厌氧（亚硫酸盐还原）微生物数量。技术：平板法（倾注平板）。

容易得到表面正确结果的环节。关于状态：三家实验室都引用 PN-ISO 15213:2005，该标准已于 23.02.2024 在 PKN 撤销；替代标准计数的是另一个量——只计经确证的梭菌属——且培养基中亚硫酸盐减半，因此两个标准的结果不能互换（ISO 15213-1 前言和引言）。关于对象：本标准范围是食品、饲料和食品生产环境样品（1）——其中未提及废物（AB 418）和植物生长辅助物（AB 1866）。关于读数：培养基变黑可能是非特异性的，尤其在试管中，只产氢的厌氧菌也会还原亚硫酸盐（9.5，注 1）。关于芽孢：热处理（例如 75 °C，20 min）使被测量变为芽孢数，必须在报告中注明（9.2、11 c）。关于计数：只计典型菌落少于 150、总菌落少于 300 的平皿（9.5）。关于温度：只有怀疑有嗜热菌时才做第二组 50 °C（9.4）——替代标准已无此选项。关于文本：9.3 中琼脂体积在样本中写作“15 min”——我们不改动标准，只记录原文写法。

我们不提供的内容。附录 A 的示意图以及 ISO 7218 的 Amd 1 中的结果表示方式我们不引用。ISO 15213-1:2023 除前言和引言外（培养基、确证、精密度数据、饲料方案）我们未读。

方法原理

取液体样品或初始悬液及其十倍稀释液各 1 ml 接种于两个平皿，倾注 44–47 °C 的亚硫酸铁琼脂（焦亚硫酸钠和柠檬酸铁(III) 铵各 1 g/l），凝固后覆盖，在 37 °C 厌氧培养 24–48 h。亚硫酸盐还原菌产生硫化物，与培养基中的铁(III) 生成黑色硫化亚铁；在典型菌落少于 150 的平皿上计黑色菌落，并换算为每克或每毫升。对悬液进行热处理可将结果限定为芽孢。

应用领域

• 食品、饲料和食品生产环境样品中厌氧条件下的亚硫酸盐还原菌（1）
• 悬液热处理后的芽孢数；经确证后——梭菌属（9.2、9.5）
• 果蔬、肉、鱼和乳制品、废物、植物生长辅助物——PCA 中 3 家实验室认可范围内的项目

关键参数

标准

标准编号

PN-ISO 15213:2005

标准名称（波兰语）

Mikrobiologia żywności i pasz — Horyzontalna metoda oznaczania liczby bakterii redukujących siarczany(IV) rosnących w warunkach beztlenowych

标准名称（英语）

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions

分步操作程序

1. 悬液和稀释

   按 ISO 6887-1、ISO 8261 或专用标准；需要时热处理以计芽孢（9.2）。PN-ISO 15213:2005 已于 23.02.2024 在 PKN 撤销（03.10.2026）。

2. 接种

   每级各 1 ml 接种于两个平皿；接种后 15 min 内倾注 44–47 °C 琼脂；覆盖 5–10 ml（9.3）。

3. 培养

   厌氧，37 ± 1 °C，24–48 h；嗜热菌另一组 50 ± 1 °C（9.4）。

4. 计数

   24 h 和 48 h 计黑色菌落；典型菌落 < 150、总菌落 < 300 的平皿（9.5）。

5. 结果

   按 ISO 7218:1996 的 Amd 1 以每克或每毫升表示；报告中注明温度、试管和热处理（10、11）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 操作厌氧菌，包括可能致病的梭菌属——按 ISO 7218 的微生物学规范
• 121 °C 高压灭菌；热培养基和水浴

常见问题