🌱 凯氏定氮法测定谷物、豆类及其制品中的氮含量并计算粗蛋白——样品粉碎过 0,8 mm 筛，用硫酸和催化剂（硫酸钾、硫酸铜、二氧化钛）在 (420 ± 10) °C 至少消解 2 h，碱化，将氨蒸馏到硼酸中，用 0,05 mol/l 硫酸滴定；乙酰苯胺回收率至少 99,5 %，色氨酸 99,0 %；结果以干物质计，PN-EN ISO 20483

理化 PN-EN ISO 20483

概述

本标准涵盖的内容。PKN 目录卡 PN-EN ISO 20483:2014-02（波兰文版）的“范围”字段全文（我们的翻译）：“本国际标准规定了按凯氏法测定谷物、豆类及其制品中氮含量的方法以及换算为蛋白质含量的方式。该方法不区分蛋白氮和非蛋白氮。如需测定非蛋白氮含量，应采用适当的方法。注：在某些情况下，用本方法不能完全回收硝酸盐(V) 和硝酸盐(III) 中的氮”。标准正文我们读的是两份 iTeh 样本：ISO 20483:2013（英文）——从目录经前言和第 1–10 章直至 11.1（含）；SIST EN ISO 20483:2014（EN ISO 20483:2013 文本）——标题页、欧洲前言和认可通知。样本之外的是 11.2（粗蛋白的计算）、第 12 章（精密度——实验室间试验、重复性、再现性、临界差）和第 13 章（试验报告）以及附录 A（实验室间试验结果）、B（临界差和不同蛋白质含量的限值）和 C（氮换算为蛋白质的系数）。

依据 ISO 20483:2013 文本（第 1–10 章、11.1）。本标准由 ISO/TC 34“食品”SC 4“谷物和豆类”分委员会制定；这是第二版，经技术修订后取代了 ISO 20483:2006；CEN 于 2013 年 9 月 7 日无修改批准 EN ISO 20483:2013，它取代了 EN ISO 20483:2006。范围（1）：按凯氏法测定谷物、豆类及其制品中的氮并计算粗蛋白；该方法不区分蛋白氮和非蛋白氮；某些情况下硝酸盐和亚硝酸盐中的氮不能完全回收。定义（3）：氮含量和粗蛋白含量——均以干产品的质量分数百分数表示；粗蛋白为氮乘以取决于谷物或豆类种类的系数。原理（4）：用硫酸和催化剂消解，碱化，蒸馏，氨被硼酸吸收后用硫酸滴定。试剂（5）：无氮；凯氏片——CuSO4·5H2O 2,8 %、TiO2 2,8 %、K2SO4 94,3 %（或按此比例的混合物）；硫酸 18 mol/l（ρ = 1,84 g/ml）；消泡剂（石蜡油、硅油、消泡片）；纯度至少 99 % 的乙酰苯胺或色氨酸作为参考物质；硼酸 40 g/l（或仪器推荐的浓度）；混合指示剂——溶液 A：溴甲酚绿 200 mg 溶于 95 % 乙醇至 100 ml，溶液 B：甲基红 200 mg 溶于乙醇至 100 ml，例如 5 体积 A 和 1 体积 B（允许使用含指示剂的成品硼酸溶液，或用每天检查的 pH 电极进行电位滴定）；氢氧化钠 30–40 %，含氮不超过 0,001 %；硫酸标准溶液 0,05 mol/l——推荐代替 HCl，因为它不会在连接管中产生气泡；硫酸铵标准溶液 0,05 mol/l（或例如莫尔盐）；浮石或玻璃棒防暴沸；无氮蔗糖（可选）；五氧化二磷。警告涉及硫酸、氢氧化钠、标准酸和五氧化二磷。仪器（6）：粉碎机、0,8 mm 筛、精确至 0,001 g 的天平、消解、蒸馏和滴定装置；消解块的温度均匀性用参考物质的完整测定检查，蒸馏装置——蒸馏已知量的铵盐（例如 10 ml 硫酸铵溶液），回收率至少 99,8 %。采样（7）不属于本标准（ISO 24333）；实验室应收到具代表性、在运输和储存中未受损或改变的样品。制备（8）：必要时粉碎使样品全部通过 0,8 mm 筛；籽粒——至少粉碎 200 g。水分（9）：按 ISO 712（谷物）、ISO 6540（玉米）、ISO 24557（豆类）。步骤（10）：需检查重复性时做两次测定；试料称准至 0,001 g，含氮 0,005–0,2 g，最好超过 0,02 g；向消解瓶加入含 10 g 硫酸钾、0,30 g 硫酸铜和 0,30 g 二氧化钛的催化剂片以及 20 ml 硫酸（只有在确认乙酰苯胺回收率 99,5 %、色氨酸 99,0 % 后才可改变酸量）；消解块预热至 (420 ± 10) °C，从温度重新达到时起至少消解 2 h——最短时间在最难达到回收率的参考物质上检查；抽气过强会导致氮损失；冷却后加 50 ml 水，接收瓶中加 50 ml 硼酸和至少 10 滴指示剂，加入比中和酸所需量过量 5 ml 的氢氧化钠；在蒸馏过程中或蒸馏后滴定，终点用目视、光学探头或电位法判断。空白（10.4）——不加样品，可加 1 g 蔗糖。核查（10.5）——参考物质在 60–80 °C 真空下以五氧化二磷干燥，试料至少 0,15 g；回收率至少 99,5 %（乙酰苯胺）和 99,0 %（色氨酸）。结果（11.1）：以干物质百分数表示，保留两位小数，由包含样品和空白的酸体积、酸的当量浓度 T、常数 0,014、试料质量和水分的公式计算。

状态（目录卡截至 03.10.2026）。PN-EN ISO 20483:2014-02 目录卡（波兰文版，发布于 14-09-2015，20 页，价格组 K）没有“已废止”标头：食品、农业和林业部门，KT 36 谷物和谷物制品，ICS 67.060，“引入：EN ISO 20483:2013 [IDT]，ISO 20483:2013 [IDT]”，“取代：PN-EN ISO 20483:2007——波兰文版”。英文版目录卡（发布于 03-02-2014）列出附加文件 PN-EN ISO 20483:2014-02/Ap1:2015-08 以及“标题经修改单更改”的注明；修改单内容我们未读。在 iTeh 目录中（读取于 03.10.2026），ISO 20483:2013 的状态为“Published”，阶段 90.93“International Standard confirmed”（完成于 29.08.2026）。饲料的同一凯氏方案由单独条目“凯氏定氮法测定饲料中的氮含量并计算粗蛋白”（PN-EN ISO 5983-2）介绍。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，读取于 03.10.2026）。编号 20483 出现在 4 家实验室的 14 条记录中：AB 452、AB 1179、AB 1275、AB 1616。在 PCA 现行文件中（读取于 03.10.2026，版本日期从 14.10.2025 到 25.09.2026），该编号出现在同样 4 家实验室的 13 个条目中（AB 1179——10 个，其余各 1 个；AB 452 的条目在副本中拆成两条记录——氮和蛋白质）。写法均为“PN-EN ISO 20483:2014-02”。“实验室”选项卡（“PN-EN ISO 20483”）显示同样的 4 家实验室——已于 03.10.2026 在生产服务器 labcoda.pl 上用选项卡查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的条目）。符合标准对象的：AB 452——谷物籽粒（氮 (1,120–2,982) % 干物质）、谷物制品（(1,053–3,200) % 干物质）和豆类种子（(4,000–6,400) %），并计算蛋白质；AB 1275——小麦籽粒，氮 (1,2–2,6) % 干物质及计算的蛋白质；AB 1616——谷物籽粒，氮 (1,00–14,10) % 干物质及计算的干物质蛋白质。范围更广的：AB 1179 在 10 个条目中引用本标准——茶、咖啡、食品浓缩物、蔬菜制品、水果制品、谷物和谷物制品、面包和豆类种子、糖果、糕点和咸味零食、特殊膳食用食品——大多为氮 (0,03–14,27) % 和计算的蛋白质 (0,19–90) %；本标准只涵盖谷物、豆类及其制品，换算系数（附录 C）也只针对谷物和豆类种类。AB 1179 文件中关于 24.04.2026 至 21.10.2026 暂停部分范围的脚注涉及其他条目。

容易得到看似正确结果的地方。解释时：结果包含非蛋白氮，因此计算的“蛋白质”会因每一种非蛋白形态的氮而偏高，且硝酸盐和亚硝酸盐可能未被回收（1）。消解时：时间过短或消解块温度不均不会留下明显痕迹——因此标准要求在较难的参考物质上确定最短时间，并检查乙酰苯胺（99,5 %）或色氨酸（99,0 %）的回收率（10.3.1、10.5）；抽气过强会带走氮（10.3.1）。蒸馏时：铵盐回收率低于 99,8 % 表明蒸馏装置泄漏或有缺陷（6.4）。计算时：公式 11.1 使用酸的当量浓度 T，而试剂 5.9 的浓度以 mol/l 给出（0,05 mol/l 硫酸）；正文对常数 0,014 的说明指 1 ml 0,5 mol/l 的酸——若把摩尔浓度代替当量浓度代入公式，结果会低一半（对硫酸而言当量浓度是摩尔浓度的两倍——这是我们的换算，并非标准原文）。干物质方面：以干物质计的结果需要用适合该产品的方法测定水分（ISO 712、ISO 6540 或 ISO 24557）——用其他水分方法会使结果偏移。

我们未给出的内容。11.2、第 12–13 章和附录我们未读，因此不给出各谷物和豆类的氮-蛋白换算系数、重复性和再现性限或临界差。我们也不给出修改单 Ap1:2015-08 的内容或谷物质量法规的要求。

方法原理

将粉碎样品的试料（含氮 0,005–0,2 g）与硫酸、硫酸钾和铜-钛催化剂在 (420 ± 10) °C 至少消解 2 h；有机氮转化为硫酸铵。用水稀释并加入过量氢氧化钠后，将氨蒸馏到含指示剂的硼酸中，用硫酸标准溶液滴定（目视、光学探头或电位法）。由样品和空白消耗的酸体积计算以干物质百分数表示的氮，粗蛋白则为氮乘以对应谷物或豆类的系数。

应用领域

• 谷物籽粒、豆类种子及其制品——氮和粗蛋白（1）
• 不区分蛋白氮和非蛋白氮；硝酸盐和亚硝酸盐中的氮不一定完全回收（1）
• 谷物籽粒、谷物制品、豆类种子，一家实验室还包括茶、咖啡、果蔬制品、糖果——PCA 中 4 家实验室的认可范围

关键参数

标准

标准编号

PN-EN ISO 20483:2014-02

标准名称（波兰语）

Ziarno zbóż i nasiona roślin strączkowych — Oznaczanie zawartości azotu i przeliczanie na zawartość białka — Metoda Kjeldahla

标准名称（英语）

Cereals and pulses — Determination of the nitrogen content and calculation of the crude protein content — Kjeldahl method

分步操作程序

1. 样品制备

   粉碎过 0,8 mm 筛（籽粒——至少 200 g），混匀；按适合产品的方法测定水分。PN-EN ISO 20483:2014-02 现行有效（PKN 目录卡截至 03.10.2026）。

2. 消解

   含氮 0,005–0,2 g 的试料，催化剂片，20 ml H2SO4；在 (420 ± 10) °C 至少 2 h；注意抽气。

3. 蒸馏

   加 50 ml 水；接收瓶中 50 ml 硼酸和至少 10 滴指示剂；NaOH 过量 5 ml；蒸馏。

4. 滴定和核查

   0,05 mol/l H2SO4；空白（可加 1 g 蔗糖）；用乙酰苯胺（99,5 %）或色氨酸（99,0 %）核查。

5. 结果

   氮以干物质百分数表示，保留两位小数；粗蛋白——氮乘以附录 C 的系数（我们不予给出）。

所需设备与仪器

试剂、培养基与耗材

职业健康与安全

• 浓硫酸、氢氧化钠溶液和五氧化二磷须小心处理（第 5 章中的警告）
• 在 420 °C 消解会释放硫酸雾——在有效通风橱下或配排烟装置操作（10.3.1）
• 消解后向瓶中加水和碱——冷却后小心操作（10.3.2）

常见问题