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LabCoda / 知识库 / 测定牛奶（包括低脂奶和脱脂奶）和奶粉中的黄曲霉毒素 M1——样品通过装有抗黄曲霉毒素 M1 抗体的柱，用水洗去基质，洗脱毒素后用带荧光检测的高效液相色谱法对照 0.05–0.80 ng/ml 标准溶液测定；检出限牛奶 0.005 µg/kg、奶粉 0.05 µg/kg，定量限 0.01 和 0.1 µg/kg，PN-EN ISO 14501

🍎 测定牛奶（包括低脂奶和脱脂奶）和奶粉中的黄曲霉毒素 M1——样品通过装有抗黄曲霉毒素 M1 抗体的柱，用水洗去基质，洗脱毒素后用带荧光检测的高效液相色谱法对照 0.05–0.80 ng/ml 标准溶液测定；检出限牛奶 0.005 µg/kg、奶粉 0.05 µg/kg，定量限 0.01 和 0.1 µg/kg，PN-EN ISO 14501

食品化学 PN-EN ISO 14501

三句话速览

黄曲霉毒素 M1——按标准所述为对人类致癌的物质——在牛奶和奶粉中的测定水平为每千克百分之几至千分之几微克。该检测依据 PN-EN ISO 14501:2021-10；认可范围覆盖（03.10.2026 读取）：4 家实验室，数据库副本 5 条记录、PCA 中 5 行；“实验室”标签（“PN-EN ISO 14501”）——生产服务器上全部 4 家。整个程序共 5 个步骤；主要用于：牛奶（全脂、低脂、脱脂）和奶粉中的黄曲霉毒素 M1；定量限 0.01 µg/kg 和 0.1 µg/kg（1）、牛奶、炼乳和奶粉（包括婴幼儿用）、乳基产品、食品和饲料——PCA 中 4 家实验室认可范围内的项目。

要点速览

  • 标准: PN-EN ISO 14501:2021-10
  • 类别: 食品化学
  • 操作步骤数: 5
  • 状态（截至 03.10.2026）: PN-EN ISO 14501:2021-10（波兰文版和英文版）——PKN 中无废止标注；取代 PN-EN ISO 14501:2009；ISO 14501:2021——“Published”，阶段 90.93（iTeh）
  • 标准给出的限值（1）: 检出限 0.005 µg/kg（牛奶）和 0.05 µg/kg（奶粉）；定量限 0.01 和 0.1 µg/kg；最低验证水平 0.08 µg/kg 奶粉 = 0.008 µg/l 还原奶
  • 色谱柱——有效性要求（5.1）: 容量 ≥ 100 ng 黄曲霉毒素 M1；加 4 ng 时回收率 ≥ 80 %；每批色谱柱至少检查一次

概述

本标准涵盖的内容。标准正文我们读的是 iTeh 的 ISO 14501:2021 | IDF 171:2021 样本（英文文本）：标题页、目录、ISO 和 IDF 前言、警示、第 1–5 章以及第 6 章至 6.10（HPLC 仪器）——样本止于第 4 页。仪器的其余部分、操作（牛奶和奶粉的制备、色谱柱、净化、HPLC 条件、校准曲线、进样方案）、计算、精密度、试验报告和附录 A 实验室间结果我们未读；其标题来自目录。

根据 ISO 14501:2021 的文本。第三版由 ISO/TC 34“食品”第 SC 5 分委员会“乳和乳制品”与国际乳品联合会（IDF）合作，并与 CEN/TC 302“乳和乳制品——取样和分析方法”合作（维也纳协议）制定；取代第二版 ISO 14501 | IDF 171:2007。根据前言的主要变化：部分条款缺乏详细说明，导致各实验室执行方法不一——根据日常使用者的实践对这些条款作了澄清。目录：8 操作（8.2 试样制备：牛奶、奶粉；8.3 免疫亲和柱准备；8.4 净化；8.5 HPLC：泵设置、色谱性能、校准曲线、净化提取物分析和进样方案），9 结果计算和表示（9.1 脱脂奶，9.2 脱脂奶粉），10 精密度，11 试验报告，附录 A（资料性）“实验室间试验结果”。警示：黄曲霉毒素对人类致癌（IARC/WHO 声明）；实验室须避免日光，标准溶液须避光（如用铝箔包裹）；未经酸洗的玻璃器皿会导致水溶液中黄曲霉毒素 M1 的损失——新玻璃器皿须在稀酸（如 2 mol/l H2SO4）中浸泡数小时，并冲洗至 pH 6–8；废物和玻璃器皿按 IARC 程序去污。范围（1）：测定牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素 M1；最低验证水平为全脂奶粉 0.08 µg/kg，即还原奶 0.008 µg/l；检出限奶粉 0.05 µg/kg，液态奶 0.005 µg/kg；定量限奶粉 0.1 µg/kg，液态奶 0.01 µg/kg；本方法也适用于低脂奶、脱脂奶以及相应奶粉。本标准无规范性引用文件（2）。定义（3.1）：黄曲霉毒素 M1 含量——按本标准程序测定的浓度（µg/l）或质量分数（µg/kg）。原理（4）：样品通过装有结合在载体上的抗体的柱；抗体以抗原–抗体复合物形式结合黄曲霉毒素 M1，其他成分用水洗去，洗脱毒素，用带荧光检测的 HPLC 测定洗脱液中的含量。试剂（5）：免疫亲和柱的最大容量不低于 100 ng 黄曲霉毒素 M1（50 ml 样品时相当于 2 µg/l），加入 4 ng 时回收率不低于 80 %（50 ml 时相当于 80 ng/l）——须定期检查，每批色谱柱至少一次：容量（2.0 ml 0.1 µg/ml 储备液稀释至 50 ml 水，过柱、洗脱、HPLC）和回收率（0.8 ml 0.005 µg/ml 工作液稀释至 50 ml；浓度不低于 0.064 µg/l；也可使用标准物质）；HPLC 级乙腈，25 % 和 10 %（V/V）溶液，脱气；氮气；校准溶液约 10 µg/ml（乙腈），由约 350 nm 最大吸收处（范围 330–370 nm）的吸光度确定浓度：ρ1 = A · M · 100 / (d · ε)，M = 328 g/mol，ε = 1 985 m²/mol，d = 1 cm——或使用有证标准物质（如 BCR-423，氯仿中 10 µg/ml）；储备液 0.1 µg/ml（25 % 乙腈），塞紧、用箔包裹，在 1–5 °C 避光保存——至少稳定两个月，之后使用前须检查浓度；工作液 0.005 µg/ml（水–乙腈 9 : 1），当日配制，由其配制如 0.05、0.10、0.20、0.40 和 0.80 ng/ml 系列（可根据定量环选择其他稀释度；用与流动相组成相同的混合液稀释可获得更好的峰形）。仪器（6，至 6.10）：10 和 50 ml 注射器；真空系统（布氏烧瓶、Vac-Elut 系统或蠕动泵）；≥ 2000 g 离心机；1、2 和 50 ml 移液管；250 ml 烧杯；100 ml 容量瓶；水浴 30 ± 2 °C、35–37 °C 和 50 ± 5 °C；Whatman 42 号滤纸；5、10 和 20 ml 带刻度锥形玻璃管；HPLC，配无脉冲泵，流速约 1 ml/min，进样 20–500 µl。

状态（截至 03.10.2026）。在 PKN 搜索中（检索词“14501”，03.10.2026），PN-EN ISO 14501:2021-10 波兰文版和英文版（“Wprowadza: EN ISO 14501:2021 [IDT], ISO 14501:2021 [IDT]”）没有废止标注；PN-EN ISO 14501:2009（波兰文版）——“Wycofana i zastąpiona przez PN-EN ISO 14501:2021-10 – wersja angielska”，更早版本（2007、2002）——已废止并被后续版本取代；其他结果（关于遮阳帘和百叶窗的 PN-EN 14501、关于砂浆的 PN-B-14501）涉及其他领域。波兰文版卡片：发布日期 12.01.2023，16 页，KT 35 Mleka i Przetworów Mlecznych，ICS 67.100.10，“Zastępuje PN-EN ISO 14501:2009 – wersja polska”，没有废止标注。在 iTeh 目录中（03.10.2026 读取），ISO 14501:2021 状态为“Published”，阶段 90.93（国际标准已确认）。

多少实验室、以何种形式（认可范围数据库副本，数据截至 17.09.2026，03.10.2026 读取）。编号 14501 出现在 4 家实验室的 5 条记录中：AB 400、AB 451、AB 465（2）、AB 515。在现行 PCA 文件中（03.10.2026 读取；AB 451 第 26 版 24.11.2025，AB 465 第 31 版 23.12.2025，AB 400 第 37 版 07.08.2026，AB 515 第 30 版 12.08.2026），该编号出现在同样 4 家实验室的 5 行中；各文件页码标记数等于 PDF 页数，无重复；对 03.10.2026 从 BIP 下载的全部 PCA 文件的检索未发现数据库副本之外的实验室。形式为“PN-EN ISO 14501:2021-10”（AB 451、AB 515）、无年份的“PN-EN ISO 14501”（AB 400）以及“Procedury badawcze”之后的“PN-EN ISO 14501”（AB 465——食品；饲料另加 PN-EN 15792）。这些项目均未暂停。“实验室”标签（检索词“PN-EN ISO 14501”）显示全部 4 家实验室——已于 03.10.2026 在 labcoda.pl 生产服务器上通过标签查询核实。

实验室检测什么（PCA 中的项目）。对象：牛奶、炼乳、奶粉，包括婴幼儿用（AB 515）；乳基食品，包括婴幼儿用，牛奶（AB 451）；食品（AB 400）；食品和饲料（AB 465）。特性：黄曲霉毒素 M1 含量（AB 400、AB 451、AB 515），真菌毒素含量（AB 465）。范围：(0.004–0.32) µg/l 或 µg/kg（AB 515），(0.017–0.24) µg/kg（AB 451）；AB 400 和 AB 465 未给出范围。技术：带荧光检测的 HPLC；AB 465 的饲料——带分光光度和/或荧光检测的 HPLC。

容易得到看似正确结果的地方。下限：按标准，液态奶检出限为 0.005 µg/kg，定量限为 0.01 µg/kg（1）——AB 515 的范围从 0.004 µg/l 或 µg/kg 起，低于这两个值；标准的最低验证水平为还原奶 0.008 µg/l。基质：标准范围为牛奶和奶粉（1）；AB 451 将其用于乳基产品，AB 465 用于食品和饲料，特性笼统为“真菌毒素含量”——饲料还同时引用 PN-EN 15792:2012，即关于饲料中玉米赤霉烯酮的标准（PKN 卡片：发布 26.03.2012，KT 40 Pasz，没有废止标注，03.10.2026 读取），因此两项标准在那里分担不同毒素，并非可替代关系。玻璃器皿：未经酸洗的玻璃器皿会吸附水溶液中的黄曲霉毒素 M1（警示 3）。色谱柱：每批色谱柱须显示容量 ≥ 100 ng、回收率 ≥ 80 %（5.1）——因此标准要求在分析样品之前对每批色谱柱单独检查。标准溶液：校准溶液浓度用分光光度法确定，存放超过两个月的储备液使用前须检查（5.4.1、5.4.2）。单位：以 µg/l（液态奶）和 µg/kg（奶粉）表示的结果是不同的量（3.1）——AB 515 用一组数字给出“µg/l 或 µg/kg”范围。

我们未提供的内容。牛奶和奶粉样品的制备、HPLC 条件、计算公式、精密度数据和实验室间结果未予引用——它们在样本之外。我们不提供法规中黄曲霉毒素 M1 的最高限量。

方法原理

牛奶（或还原奶粉）样品通过装有抗黄曲霉毒素 M1 抗体的柱；毒素以抗原–抗体复合物形式结合，其他成分用水洗去。洗脱黄曲霉毒素 M1，用带荧光检测的高效液相色谱法对照标准溶液（如 0.05–0.80 ng/ml）测定，标准溶液浓度在约 350 nm 用分光光度法确定。

应用领域

关键参数

参数数值
状态（截至 03.10.2026）PN-EN ISO 14501:2021-10（波兰文版和英文版）——PKN 中无废止标注；取代 PN-EN ISO 14501:2009；ISO 14501:2021——“Published”，阶段 90.93（iTeh）
标准给出的限值（1）检出限 0.005 µg/kg（牛奶）和 0.05 µg/kg（奶粉）；定量限 0.01 和 0.1 µg/kg；最低验证水平 0.08 µg/kg 奶粉 = 0.008 µg/l 还原奶
色谱柱——有效性要求（5.1）容量 ≥ 100 ng 黄曲霉毒素 M1；加 4 ng 时回收率 ≥ 80 %；每批色谱柱至少检查一次
标准溶液（5.4）校准溶液约 10 µg/ml（约 350 nm 处 ε = 1 985 m²/mol），储备液 0.1 µg/ml（不检查最多 2 个月），工作液 0.05–0.80 ng/ml 当日配制
检测（4）带荧光检测的 HPLC；无脉冲泵约 1 ml/min，进样 20–500 µl（6.10）
认可范围覆盖（03.10.2026 读取）4 家实验室，数据库副本 5 条记录、PCA 中 5 行；“实验室”标签（“PN-EN ISO 14501”）——生产服务器上全部 4 家

标准

标准编号
PN-EN ISO 14501:2021-10
标准名称（波兰语）
Mleko i mleko w proszku — Oznaczanie zawartości aflatoksyny M1 — Oczyszczanie za pomocą chromatografii powinowactwa immunologicznego i oznaczanie za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej
标准名称（英语）
Milk and milk powder — Determination of aflatoxin M1 content — Clean-up by immunoaffinity chromatography and determination by high-performance liquid chromatography

分步操作程序

  1. 准备实验室和玻璃器皿

    避免日光，玻璃器皿经酸洗（警示 2、3）。PN-EN ISO 14501:2021-10 在 PKN 中无废止标注（03.10.2026）。

  2. 色谱柱检查

    每批检查容量（2.0 ml 0.1 µg/ml 溶液稀释至 50 ml）和回收率（0.8 ml 0.005 µg/ml 溶液稀释至 50 ml，≥ 0.064 µg/l）（5.1）。

  3. 标准溶液

    由约 350 nm 吸光度确定校准溶液浓度；工作液 0.05–0.80 ng/ml 当日配制（5.4）。

  4. 净化

    样品过柱，用水洗涤，洗脱黄曲霉毒素 M1（4；细节见第 8 章，在样本之外）。

  5. HPLC 和结果

    荧光检测，校准曲线；结果以 µg/l 或 µg/kg 计（3.1、4；计算见第 9 章，在样本之外）。

所需设备与仪器

设备示例参考价格
免疫亲和柱装有抗黄曲霉毒素 M1 抗体，容量 ≥ 100 ng，回收率 ≥ 80 %（5.1）—
真空系统布氏烧瓶、Vac-Elut 系统或蠕动泵（6.2）—
离心机至少 2000 g（6.3）—
水浴30 ± 2 °C、35–37 °C 和 50 ± 5 °C（6.7）—
带荧光检测器的 HPLC无脉冲泵约 1 ml/min，定量环 20–500 µl（6.10）—
分光光度计在约 350 nm 确定校准溶液浓度（5.4.1）—

试剂、培养基与耗材

试剂CAS详情
HPLC 级乙腈—25 % 和 10 %（V/V）溶液，脱气（5.2）
黄曲霉毒素 M1 标准溶液—校准溶液约 10 µg/ml，储备液 0.1 µg/ml，工作液 0.005 µg/ml 及 0.05–0.80 ng/ml 系列；避光（5.4）
有证标准物质—如 BCR-423，氯仿中 10 µg/ml——可替代自配校准溶液（5.4.1）
玻璃器皿用稀酸—如 2 mol/l H2SO4——浸泡新玻璃器皿，冲洗至 pH 6–8（警示 3）

职业健康与安全

常见问题

该检测依据哪项标准？

该检测依据的标准为 PN-EN ISO 14501:2021-10 — 《Milk and milk powder — Determination of aflatoxin M1 content — Clean-up by immunoaffinity chromatography and determination by high-performance liquid chromatography》。

该方法的原理是什么？

牛奶（或还原奶粉）样品通过装有抗黄曲霉毒素 M1 抗体的柱；毒素以抗原–抗体复合物形式结合，其他成分用水洗去。洗脱黄曲霉毒素 M1，用带荧光检测的高效液相色谱法对照标准溶液（如 0.

测量范围和准确度是多少？

状态（截至 03.10.2026）：PN-EN ISO 14501:2021-10（波兰文版和英文版）——PKN 中无废止标注；取代 PN-EN ISO 14501:2009；ISO 14501:2021——“Published”，阶段 90.93（iTeh）；标准给出的限值（1）：检出限 0.005 µg/kg（牛奶）和 0.05 µg/kg（奶粉）；定量限 0.01 和 0.1 µg/kg；最低验证水平 0.08 µg/kg 奶粉 = 0.008 µg/l 还原奶；色谱柱——有效性要求（5.1）：容量 ≥ 100 ng 黄曲霉毒素 M1；加 4 ng 时回收率 ≥ 80 %；每批色谱柱至少检查一次；标准溶液（5.4）：校准溶液约 10 µg/ml（约 350 nm 处 ε = 1 985 m²/mol），储备液 0.1 µg/ml（不检查最多 2 个月），工作液 0.05–0.80 ng/ml 当日配制。

完成检测需要多长时间？

整个程序共 5 个步骤。标准未对每个步骤给出时长——实际用时取决于实验室自身的操作程序。

需要哪些设备？

免疫亲和柱、真空系统、离心机、水浴、带荧光检测器的 HPLC、分光光度计。

该检测用于哪些场景？

牛奶（全脂、低脂、脱脂）和奶粉中的黄曲霉毒素 M1；定量限 0.01 µg/kg 和 0.1 µg/kg（1）；牛奶、炼乳和奶粉（包括婴幼儿用）、乳基产品、食品和饲料——PCA 中 4 家实验室认可范围内的项目。

需要采取哪些安全防护措施？

黄曲霉毒素对人类致癌——在指定区域处理标准溶液，按 IARC 程序对废物和玻璃器皿去污（警示 1、4）；乙腈——易燃有毒；在通风橱内操作。

哪家实验室可以开展此项检测？

该检测由通过 ISO/IEC 17025 认可的实验室开展。在 LabCoda 上可按标准编号检索 PN-EN ISO 14501。

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