美国食品药品监督管理局更新BAM克罗诺杆菌检测方法（2026年9月版）：婴儿配方奶粉增加CSB肉汤二次增菌、新增环境样品检测程序及新qPCR探针
美国食品药品监督管理局（FDA）发布《细菌学分析手册》（BAM）第29章2026年9月版——即婴儿配方奶粉（PIF）和环境样品中克罗诺杆菌属（Cronobacter spp.）的检测与分离方法。方法页面更新至2026年9月16日；该章上一版为2023年11月版。
- 增菌：离心处理的增菌培养物份数由三份减为一份。针对婴儿配方奶粉新增与之等效的二次增菌及相应的DNA提取程序——将0.1毫升缓冲蛋白胨水（BPW）培养物转入10毫升CSB肉汤，于41.5 ± 1 °C培养24 ± 2小时。FDA指出，CSB二次增菌有利于从背景菌群较多的样品中分离克罗诺杆菌，但BPW–CSB两步增菌后进行qPCR，得出结果比BPW增菌并离心后直接进行qPCR晚一天。
- 新增环境样品的增菌、qPCR筛查和培养确认程序（拭子加入9毫升BPW，海绵加入90毫升BPW）。qPCR的靶标为跨越rpsU基因3′端和dnaG基因5′端的大分子合成操纵子片段；新版采用首选的双淬灭克罗诺杆菌探针，增加了制备内扩增对照的等效方法，并提高了退火温度。
- 更新了必需和可选的显色培养基——2026年版分析流程图中为DFI琼脂（36 ± 1 °C）、CCI琼脂和R&F琼脂（41.5 ± 1 °C），可选ESIA琼脂（44 ± 1 °C）和36 ± 1 °C下的R&F琼脂，各培养24 ± 2小时——并更新了包容性和排他性表：该方法用代表七个种的50株克罗诺杆菌以及34个非克罗诺杆菌种的40株菌株进行了测试。
- 该方法将实时荧光PCR筛查与培养部分相结合，培养部分也可在无qPCR条件下单独使用；qPCR阳性结果一律用培养法确认。纯培养物用qPCR加VITEK 2或仅用qPCR确认。2023年11月版曾删除使用SmartCycler进行qPCR以及用RAPID ID 32E进行培养确认的选项，并增加可选的CCI和ESIA琼脂。