三株芽孢杆菌(贝莱斯、短小、地衣芽孢杆菌NRRL B-67647–67649)作为肠道菌群稳定剂用于育肥家禽(4b1898):按EN 15784在TSA上计数,PFGE鉴定——对照饲料中本底芽孢杆菌高达9.8 × 10⁷ CFU/kg,而添加剂量为3 × 10⁷,部分批次低于规格
欧盟委员会实施条例(EU)2025/2500于2025年12月12日公布,批准贝莱斯芽孢杆菌NRRL B-67647、短小芽孢杆菌NRRL B-67648和地衣芽孢杆菌NRRL B-67649制剂(1:1:1,Microsaf,持证人:S.I.Lesaffre)用于育肥家禽和观赏鸟类,有效期至2036年1月1日,用量为饲料至少3 × 10⁷ CFU/kg。EFSA(2025年5月6日意见)根据基因组序列通过ANI鉴定了菌株,未发现获得性耐药基因,对Vero细胞无毒性;只要唯一载体为碳酸钙,该添加剂对皮肤和眼睛无刺激性,但具有皮肤和呼吸道致敏性——镍的存在也是原因之一。
- 附件中的方法:鉴定——DNA测序或PFGE(CEN/TS 17697);添加剂、预混料和配合饲料中的定量——在胰蛋白胨大豆琼脂上涂布平板计数(EN 15784)。附件要求至少2 × 10⁸ CFU/g,但实际有两种剂型:稀释型GT 3B(2 × 10⁸)和浓缩型GT 3B-C(5 × 10⁹ CFU/g)。五个批次:GT 3B平均1.9 × 10⁸ CFU/g(1.4–2.2 × 10⁸),GT 3B-C为1.2 × 10¹⁰(4.0 × 10⁹–3.4 × 10¹⁰);EFSA指出,GT 3B有三个批次、GT 3B-C有四个批次的总菌数低于规格,稳定性研究所用批次也是如此。
- 杂质(每种剂型三个批次):铅4.4–5.2和3.7–5.5 mg/kg,镍0.2–0.3 mg/kg,镉< 0.4,砷< 0.2,汞< 0.02 mg/kg;PCDD/F + PCB最高0.247 ng WHO-TEQ/kg;霉菌毒素低于定量限;25 g中未检出沙门氏菌,肠杆菌科、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、亚硫酸盐还原厌氧菌、酵母和霉菌以及蜡样芽孢杆菌均< 10 CFU/g。Stauber-Heubach法粉尘潜力3002–4080和4940–6070 mg/m³。95 °C制粒后及4–25 °C储存24个月后无损失(< 0.5 log);预混料在40 °C放置6个月后损失> 1 log;均匀度CV 2 %。
- 有效性:三项为期42天的肉鸡试验,剂量3 × 10⁷ CFU/kg——末重更高(2618对2346 g,2988对2950 g,2860对2755 g),其中两项料重比更好(1.91对1.95,1.99对2.07)。对照饲料中测得本底芽孢杆菌:4 × 10⁶–9 × 10⁶、< 5 × 10⁶–1.1 × 10⁷和2.5 × 10⁶–9.8 × 10⁷ CFU/kg;通过WGS分析排除了对照组中存在添加剂菌株。添加组饲料实测:1.9 × 10⁷至1.6 × 10⁸ CFU/kg。
- 与抗球虫药的相容性:体外试验中莫能菌素、甲基盐霉素、盐霉素、马杜霉素、拉沙洛西、氯苯胍以及甲基盐霉素/尼卡巴嗪的MIC低于剂量的四倍,因此需要进行体内研究(回肠和盲肠内容物计数,分别经热处理和不经热处理,判定标准为差异≤ 1 log)。拉沙洛西使回肠中贝莱斯芽孢杆菌营养细胞减少、常山酮使盲肠中短小芽孢杆菌营养细胞减少均超过1 log,但EFSA仍认定与所有药物相容。法规列出:地克珠利、甲基盐霉素、马杜霉素铵、盐霉素钠、莫能菌素钠、盐酸氯苯胍、甲基盐霉素/尼卡巴嗪、拉沙洛西和常山酮;EFSA在正文中因其无抗菌作用而认定相容的癸氧喹酯,既未出现在意见结论中,也未出现在法规中。