巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)CECT 13171生产的3-植酸酶(4a50):添加剂、预混料和饲料中按EN ISO 30024测定活性,家禽和育肥猪500 FTU/kg,产蛋鸡1000 FTU/kg——在EFSA第二份意见以全基因组测序确认菌株身份后才获批准
欧盟委员会实施条例(EU)2025/1392于2025年7月16日公布,批准由转基因菌株Komagataella phaffii CECT 13171生产的3-植酸酶(EC 3.1.3.8)制剂(持证人:Fertinagro Biotech S.L.)作为消化率改善剂用于育肥家禽、为产蛋或繁殖而饲养的家禽、次要种用家禽、产蛋鸡以及所有猪科育肥猪,有效期至2035年8月5日。在2022年9月27日的意见中,EFSA无法确认菌株的种属,也无法排除产品中存在活细胞;直到2024年9月17日的意见依据全基因组序列和新的检测,才将该菌株纳入QPS方法并认定该添加剂安全。
- 附件中适用于添加剂、预混料和配合饲料的方法:按EN ISO 30024以比色法测定植酸酶从植酸盐中释放的磷酸盐;1 FTU是指在37 °C、pH 5.5条件下每分钟从植酸钠中释放1 µmol无机磷所需的酶量。EURL认为此前对同一添加剂的评估结论仍然有效。最低活性:固体剂型10 000 FTU/g,液体剂型1000 FTU/ml。EFSA在2022年意见中给3-植酸酶标注的编号为EC 3.2.1.8(这是木聚糖酶的编号);法规中为EC 3.1.3.8。
- 组成(2022年意见):固体剂型FSF10000——酶蛋白1.2 %,柠檬酸钠3–7 %,小麦麸88–92 %;液体剂型FLF1000——蛋白1.2 g/l,山梨醇28–32 %,乙酸钠和山梨酸钾。五个批次:10 672 FTU/g(10 411–11 125)和1070 FTU/ml(1008–1101)。金属、赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素、DON、玉米赤霉烯酮、T-2、HT-2和伏马毒素均低于定量限;肠杆菌科< 40 CFU/g,丝状真菌最高5.2 × 10² CFU/g或ml,25 g中未检出沙门氏菌。PCR未检出重组DNA(四个基因,检出限0.1–10 ng/g或ml)。
- 需要第二份意见的原因:2022年的鉴定依据的是测序读段比对和仅基于ITS的分析,而活细胞检测中不清楚阳性对照是否为加入该菌株的样品。2024年申请人提交了基于四条染色体的系统基因组分析(该菌株与两株知名菌株聚类——意见中菌株名称已涂黑)以及新的检测:10 ml中间产品加入90 ml YPD培养基,30 °C培养4 h,按相当于1 ml的量涂布,25 °C培养最长10天,三个批次各做三次重复——均无生长。
- 最低添加量:500 FTU/kg饲料——育肥家禽、为产蛋或繁殖而饲养的家禽、次要种用家禽、所有猪科育肥猪;1000 FTU/kg——产蛋鸡。申请人曾建议产蛋鸡使用375 FTU/kg;在一项新研究中,回肠磷表观消化率从25.2 %提高到36.5 %,但胫骨中灰分和磷的比例没有变化,因此EFSA无法接受该剂量。固体剂型有皮肤致敏性,两种剂型均可能为呼吸道致敏物:须防护呼吸道和皮肤。