酿酒酵母生产的25-羟基胆钙化醇用于鱼类及其他物种：鲑科0.8 mg/kg，三种方法从UPLC-UV到HPLC-MS/MS，条例称制剂“最高含量1.25 %”，而EFSA描述为最低1.25 %
欧盟委员会实施条例（EU）2025/2491于2025年12月11日发布，批准使用酿酒酵母CBS 146008生产的25-羟基胆钙化醇（维生素D）制剂用于除家禽、猪和反刍动物外的所有动物物种（该添加剂已获准用于上述三类），有效期至2035年12月31日。前体5,7,24-胆甾三烯醇由酵母生成，提取后经化学转化为25-羟基维生素D3原，再经光化学转化为25-羟基胆钙化醇。
- 附件中的方法：添加剂中采用超高效液相色谱-分光光度检测（UPLC-UV），预混料中采用HPLC-UV，配合饲料和低浓度预混料中采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）。纯度标准：25-羟基胆钙化醇> 94 %，其他甾醇衍生物各≤ 1 %，赤藓红< 5 mg/kg。
- 25-OH-D3最高含量：鲑科0.800 mg/kg，其他鱼类和观赏鱼0.075 mg/kg，其他物种0.050 mg/kg全价饲料。与维生素D3合计：鲑科不超过1.500 mg（相当于60 000 IU），其他鱼类0.075 mg（3000 IU），其他动物0.050 mg（2000 IU）；条例中的换算：40 IU = 0.001 mg胆钙化醇。
- 制剂描述：条例的三种语言版本（波兰语、英语、德语）均称制剂中25-羟基胆钙化醇“最高含量1.25 %”，而EFSA意见e9479称现行授权规定的是最低含量1.25 %；EFSA记录的5个批次为1.32–1.37 %。CELLAR中没有该条例的更正。5个批次的活性物质为99.7–100 %，未检出赤藓红（定量限0.08 mg/kg）；3个批次中未检出生产菌株的活细胞和重组DNA。
- 虹鳟耐受性试验：640尾初始体重57.6 g的鱼，分养于循环水系统的16个水槽，91天，饲料添加0、0.08、0.80和8.00 mg/kg；分析测得目标剂量组为0.680–0.693 mg/kg，十倍剂量组为6.54–7.19 mg/kg。EFSA认为0.8 mg/kg安全，安全系数为10。该添加剂对皮肤和眼睛无刺激性；EFSA未能就致敏性和对呼吸道的影响得出结论——须采取呼吸道和皮肤防护措施。