🍎 Vitamin C — HPLC

Lebensmittelchemie PN-EN 14130

Kurz gefasst

Bestimmung von Ascorbinsäure (Vitamin C) in Lebensmitteln mittels Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) mit UV-Detektion. Die Prüfung erfolgt nach PN-EN 14130:2004; Messbereich: 1–1000 mg/100 g. Das Verfahren umfasst 6 Schritte (insgesamt rund 1 Std. 25 Min.); eingesetzt wird sie unter anderem für: Lebensmittelkennzeichnungskontrolle — Vitamin-C-Deklaration (EU-VO 1169/2011), Analyse von Obst- und Gemüsesäften, Analyse von angereicherten Lebensmitteln und Nahrungsergänzungsmitteln.

Auf einen Blick

Norm: PN-EN 14130:2004
Kategorie: Lebensmittelchemie
Verfahrensschritte: 6
Gesamtdauer der Schritte: 1 Std. 25 Min.
Messbereich: 1–1000 mg/100 g
Nachweisgrenze: 0,5 mg/100 g
Detektionswellenlänge: 245 nm

Übersicht

Vitamin C (L-Ascorbinsäure) ist ein essentieller Nährstoff, Antioxidans und einer der am häufigsten deklarierten Bestandteile auf Lebensmitteletiketten. Methode PN-EN 14130 ist die chromatographische Referenzmethode (HPLC-UV) zur Bestimmung der Summe von Ascorbinsäure und Dehydroascorbinsäure (nach DTT-Reduktion) in Lebensmitteln.

Die Methode umfasst die Extraktion von Vitamin C aus der Probe mit Metaphosphorsäure (Stabilisator), Reduktion der oxidierten Form (DHAA) mit Dithiothreitol (DTT), Trennung an C18-Säule mit gepufferter mobiler Phase und UV-Detektion bei 245 nm. Messbereich: 1–1000 mg/100 g.

Prinzip der Methode

Die Probe wird mit Metaphosphorsäure (HPO₃)-Lösung homogenisiert, um die Oxidation von Vitamin C zu verhindern. Nach Zentrifugation wird der Überstand mit DTT (Dithiothreitol) behandelt, um DHAA zu Ascorbinsäure zu reduzieren. Die Lösung wird filtriert (0,22 µm) und mittels HPLC an C18-Säule mit mobiler Phase: 50 mmol/L KH₂PO₄, pH 2,5 analysiert. UV-Detektion bei 245 nm. Quantitative Bestimmung über Kalibrierkurve (L-Ascorbinsäure, CRM).

Anwendungen

Lebensmittelkennzeichnungskontrolle — Vitamin-C-Deklaration (EU-VO 1169/2011)
Analyse von Obst- und Gemüsesäften
Analyse von angereicherten Lebensmitteln und Nahrungsergänzungsmitteln
Qualitätskontrolle von Säuglingsnahrung
Stabilitätsprüfung — Vitamin-C-Abbau im Laufe der Zeit
Analyse von frischem und gefrorenem Obst und Gemüse

Schlüsselparameter

Parameter	Wert
Messbereich	1–1000 mg/100 g
Nachweisgrenze	0,5 mg/100 g
Detektionswellenlänge	245 nm
Präzision (CV)	2–5%
Analysezeit	10–15 min/Probe

Norm

Normnummer: PN-EN 14130:2004
Titel (PL): Artykuły żywnościowe — Oznaczanie witaminy C metodą HPLC
Title (EN): Foodstuffs — Determination of vitamin C by HPLC

Schritt-für-Schritt-Verfahren

Extraktion

Probe 5–10 g einwiegen. 50 mL 3% HPO₃ zugeben. 2 min homogenisieren. Bei 10 000 g / 10 min zentrifugieren.

⏱ Zeit: 15 min
DHAA-Reduktion

Zu 5 mL Überstand 1 mL DTT (40 mg/mL) geben. 30 min im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubieren.

⏱ Zeit: 30 min
Filtration

Durch 0,22 µm PVDF-Filter in HPLC-Vial filtrieren.

⏱ Zeit: 5 min
Kalibrierung

Ascorbinsäure-Standards vorbereiten: 5, 10, 25, 50, 100 mg/L in 3% HPO₃.

⏱ Zeit: 20 min
HPLC-Analyse

C18-Säule, mobile Phase: 50 mM KH₂PO₄ pH 2,5 + 2% MeOH, Fluss 1 mL/min, Detektion 245 nm.

⏱ Zeit: 10 min
Berechnungen

Konzentration aus Kalibrierkurve ablesen. In mg/100 g Probe umrechnen. Verdünnung berücksichtigen.

⏱ Zeit: 5 min

Erforderliche Geräte und Apparatur

Gerät	Beispiel	Richtpreis
HPLC-System mit UV/DAD-Detektor	Agilent 1260 Infinity II, Shimadzu Nexera, Waters Alliance	200 000–400 000 PLN
C18-Säule	Waters Atlantis T3 150×4,6 mm, 5 µm	2 000–4 000 PLN
Autosampler	In HPLC-System integriert	integriert
Laborzentrifuge	Eppendorf 5804R, Hettich Rotina 380R	10 000–30 000 PLN
Homogenisator	IKA Ultra-Turrax T25, Kinematica PT 3100	5 000–15 000 PLN

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Reagenz	CAS	Details
L-Ascorbinsäure (Standard)	50-81-7	Reinheit ≥99%, zertifiziertes CRM zur Kalibrierung
Metaphosphorsäure HPO₃	37267-86-0	3–5% Lösung, Vitamin-C-Stabilisator, verhindert Oxidation
Dithiothreitol (DTT)	3483-12-3	Reduktionsmittel DHAA → Ascorbinsäure, 40 mg/mL Lösung
Kaliumdihydrogenphosphat KH₂PO₄	7778-77-0	Mobile Phase: 50 mmol/L, pH 2,5 (mit H₃PO₄ angesäuert)
Methanol HPLC grade	67-56-1	Mobiler-Phase-Zusatz (2–5%)

Arbeitsschutz und Sicherheit

Metaphosphorsäure — reizend, Handschuhe und Schutzbrille erforderlich
Methanol — giftig, entzündlich. Arbeit im Abzug.
DTT — reizend, unangenehmer Geruch. Arbeit unter Absaugung.
HPLC-Abfall — getrennt sammeln (organischer Abfall)

Häufige Fragen

Welche Norm beschreibt diese Prüfung?

Die Prüfung erfolgt nach PN-EN 14130:2004 — „Foodstuffs — Determination of vitamin C by HPLC“.

Wie funktioniert diese Methode?

Wie groß sind Messbereich und Genauigkeit?

Messbereich: 1–1000 mg/100 g; Nachweisgrenze: 0,5 mg/100 g; Detektionswellenlänge: 245 nm; Präzision (CV): 2–5%.

Wie lange dauert die Prüfung?

Die für die einzelnen Schritte angegebenen Zeiten ergeben zusammen rund 1 Std. 25 Min. Das Verfahren umfasst 6 Schritte.

Welche Geräte werden benötigt?

HPLC-System mit UV/DAD-Detektor, C18-Säule, Autosampler, Laborzentrifuge, Homogenisator. Richtpreis für das Kerngerät (HPLC-System mit UV/DAD-Detektor): 200 000–400 000 PLN.

Wo wird diese Prüfung eingesetzt?

Lebensmittelkennzeichnungskontrolle — Vitamin-C-Deklaration (EU-VO 1169/2011); Analyse von Obst- und Gemüsesäften; Analyse von angereicherten Lebensmitteln und Nahrungsergänzungsmitteln; Qualitätskontrolle von Säuglingsnahrung; Stabilitätsprüfung — Vitamin-C-Abbau im Laufe der Zeit; Analyse von frischem und gefrorenem Obst und Gemüse.

Welche Sicherheitsmaßnahmen gelten?

Metaphosphorsäure — reizend, Handschuhe und Schutzbrille erforderlich; Methanol — giftig, entzündlich. Arbeit im Abzug.; DTT — reizend, unangenehmer Geruch. Arbeit unter Absaugung.; HPLC-Abfall — getrennt sammeln (organischer Abfall).

Welches Labor führt diese Prüfung durch?

Die Prüfung führen nach ISO/IEC 17025 akkreditierte Labore durch. Auf LabCoda finden Sie sie über die Normnummer PN-EN 14130.

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