🍎 Bestimmung von Sucralose in Lebensmitteln mittels HPLC — lösliche Proben werden in Wasser gelöst, nicht vollständig lösliche (Backwaren, Kaugummi, Joghurt, Ketchup, Mayonnaise) bei 40–60 °C mit Wasser gemischt und bei Bedarf mit modifizierten Carrez-Lösungen geklärt; Reinigung an C18-SPE-Kartuschen 500 mg, Elution mit Methanol/Wasser 1 + 3, Trennung an einer RP-18-Säule 250 × 4 mm bei 35 °C, Brechungsindexdetektor (RI) bei 30 °C oder ELSD; mindestens 5 Standardlösungen (z. B. 20–100 mg/l), Ergebnis in mg/kg oder mg/l; Validierung 83–737 mg/kg; PN-EN 16155:2012

Lebensmittelchemie PN-EN 16155

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe der SIST EN 16155:2012 (slowenische Übernahme der EN 16155:2012 vom April 2012, englischer Text) — PN-EN 16155:2012 übernimmt EN 16155:2012 identisch (PKN-Suche): Inhaltsverzeichnis, Vorwort, Abschnitte 1–7 und Abschnitt 8 bis 8.2 — die Leseprobe endet auf Seite 7 der Norm. Den Rest der Präzision (8.2–8.3: Werte der Wiederhol- und Vergleichbarkeit), den Prüfbericht (9) und Anhang A (statistische Daten des Ringversuchs) lesen wir nicht; die Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis.

NACH DEM TEXT DER EN 16155:2012. Die Norm wurde von CEN/TC 275 „Lebensmittelanalytik — Horizontale Verfahren“ (Sekretariat DIN) erarbeitet; CEN hat sie am 25.02.2012 angenommen, die nationale Übernahme sollte spätestens bis Oktober 2012 erfolgen. Anwendungsbereich (1): Bestimmung von Sucralose in Lebensmitteln mittels HPLC mit Elution von einer Umkehrphasensäule mit wässrigem Methanol und RI-Detektion; das Verfahren wurde im Ringversuch für Sucralose von 83 bis 737 mg/kg in dotierten Proben validiert: Ketchup, Mayonnaise, Kekse, Joghurt, Instant-Getränkepulver, Süßwaren. Verweisung (2): EN ISO 3696:1995 (Wasser). Prinzip (3): die Proben werden je nach Konsistenz in Wasser gelöst oder verdünnt und gegebenenfalls filtriert oder mit modifizierten Carrez-Lösungen geklärt; danach an einer SPE-Säule extrahiert und mit Methanol/Wasser eluiert; Sucralose wird mittels HPLC an einer RP-Säule mit wässrigem Methanol und RI-Detektor, alternativ ELSD, bestimmt; Quantifizierung mit externem Standard; der Sucralosegehalt ist der nach diesem Verfahren bestimmte Gehalt an 1,6-Dichlor-1,6-didesoxy-β-D-fructofuranosyl-4-chlor-4-desoxy-α-D-galactopyranosid. Reagenzien (4): Sucralose C12H19Cl3O8, Molekülmasse 397,63; Kaliumhexacyanoferrat(II)-Trihydrat; Zinknitrat-Hexahydrat; Methanol für HPLC; Stammlösung ca. 1000 mg/l (ca. 100 mg in 100 ml Wasser, täglich frisch, unter Berücksichtigung von Wassergehalt und Reinheit des Standards); mindestens fünf Standardlösungen, z. B. 20, 40, 60, 80 und 100 mg/l, täglich frisch, ohne den linearen Bereich des Detektors zu überschreiten; Carrez-Lösung A — 53,45 g Hexacyanoferrat auf 500 ml; Lösung B — 148,75 g Zinknitrat auf 500 ml; Eluent — Methanol und Wasser 1 + 3 (Volumenteile). Geräte (5): Membranfilter bis 0,45 µm; C18-SPE-Kartuschen 500 mg; HPLC mit Pumpe, Probengeber, temperiertem RI-Detektor oder ELSD, Säulenofen; C-18-RP-Säule 250 mm × 4 mm (z. B. 5 µm) mit Vorsäule. Durchführung (6): Homogenisierung (Flüssigkeiten — Rühren, Hartkaramellen — Zerkleinern, Kaugummi — Tiefgefrieren und Zerkleinern, Joghurt und Ketchup — Rühren und bei Bedarf Klären); lösliche Proben (z. B. Hartkaramellen) — ca. 5 g auf 1 mg genau in einen 50-ml-Kolben mit Wasser, Filtration bei Trübung; nicht vollständig lösliche Proben (Backwaren, Kaugummi, Joghurt, Ketchup, Mayonnaise) — ca. 5 g mit ca. 25 ml Wasser, 30 min Rühren bei etwa 40–60 °C oder Ultraschallbad, proteinhaltige Proben — je 1 ml Carrez-Lösung A und B, nach Abkühlen aufgefüllt, durch Faltenfilter und Membranfilter filtriert; SPE — Konditionierung mit Methanol und Wasser, 5 ml Probenlösung, dreimaliges Waschen mit 5 ml Wasser ohne Trockenlaufen der Kartusche, Elution mit 5 ml Eluent in einen 10-ml-Kolben, Auffüllen, Filtration in Vials; HPLC (für die Säule nach 5.5): Injektion bis 100 µl, Eluent 4.8, Ofen 35 °C, RI-Detektor 30 °C, Durchfluss ca. 1,2 ml/min; Identifizierung über die Retentionszeit und Zusatz von Standard zur Probe (Peaküberlagerung); Quantifizierung aus der Peakfläche über die Kalibrierfunktion y = a + bx, deren Eignung zu prüfen ist. Berechnung (7): ρ oder w = (R − a) · V / (b · m), in mg/l oder mg/kg, z. B. V = 50 ml, m = 5 g; das Ergebnis wird auf eine ganze Zahl gerundet. Präzision (8.1–8.2): Daten aus zwei Ringversuchen 2007/2008 — Ketchup, Mayonnaise mit hohem und niedrigem Gehalt, Kekse, Joghurt, 2 Getränkepulver, 2 Presstabletten (Süßwaren); die Werte gelten möglicherweise nicht für andere Konzentrationsbereiche und Matrizes; die Wiederholgrenze r wird in höchstens 5 % der Fälle überschritten und hängt vom Konzentrationsniveau ab.

STATUS (Stand 03.10.2026). In der PKN-Suche (Suchbegriff „PN-EN 16155“, 03.10.2026) steht PN-EN 16155:2012 — englische Fassung, „Führt ein: EN 16155:2012 [IDT]“, ohne Vermerk einer Zurückziehung; eine polnische Fassung gibt es in den Treffern nicht.

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Datenstand bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 16155 steht in 3 Datensätzen bei 2 Laboratorien: AB 370 (2) und AB 592 (1). In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 592 Ausgabe Nr. 24 vom 06.02.2026, AB 370 Ausgabe Nr. 25 vom 04.08.2026) steht die Nummer bei denselben 2 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Wiederholungen; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP geladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Die Form „PN-EN 16155:2012“ bei beiden. Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-EN 16155“) zeigt beide Laboratorien — geprüft per Abfrage des Reiters auf dem Produktionsserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (Positionen im PCA). AB 592: Fische und andere Wassertiere und ihre Erzeugnisse, Obst- und Gemüseerzeugnisse, alkoholfreie Getränke, Süßwaren, Lebensmittelzusatzstoffe — Sucralose (5–1800) mg/kg (mg/l), HPLC-RID. AB 370: alkoholfreie Getränke und Säfte — Nachweis und Gehalt an Sucralose (10–1000) mg/l; Gemüseerzeugnisse (Ketchup) — (50–1000) mg/l, HPLC-RID.

WO MAN LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ERHÄLT. Validierungsbereich: das Verfahren wurde von 83 bis 737 mg/kg in den genannten Matrizes validiert, und die Präzisionsdaten gelten womöglich nicht für andere Konzentrationen und Matrizes (1, 8.1) — die PCA-Positionen reichen von 5 bis 1800 mg/kg und umfassen z. B. Fisch und Zusatzstoffe, also außerhalb dieser Grenzen. RI-Detektor: die Brechungsindexdetektion ist nicht selektiv — die Identifizierung stützt die Norm auf Retentionszeit und Standardzusatz zur Probe (6.4); der Detektor braucht eine stabile Temperatur (30 °C) (6.3). Linearität: der lineare Bereich des Detektors darf nicht überschritten werden, und die Eignung der Kalibrierfunktion ist zu prüfen (4.6, 6.5). SPE: die Kartusche darf beim Waschen nicht trockenlaufen (6.2.3). Standard: Reinheit und Wassergehalt des Standards werden bei der täglich herzustellenden Stammlösung berücksichtigt (4.5). Einheiten: ein Ergebnis für Ketchup in mg/l (AB 370) hat eine andere Basis als mg/kg, in der die Norm den Validierungsbereich angibt (1, 7).

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Werte der Wiederhol- und Vergleichgrenzen und Daten aus Anhang A geben wir nicht wieder — sie liegen außerhalb der Leseprobe. EN ISO 3696 fassen wir in diesem Eintrag nicht zusammen. Zulässige Sucralosegehalte in Lebensmitteln geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

Die Probe wird in Wasser gelöst oder mit Wasser extrahiert (proteinhaltige Proben werden mit Carrez-Lösungen geklärt), Sucralose wird an einer C18-Kartusche zurückgehalten und mit Methanol/Wasser eluiert. Der Extrakt wird an einer Umkehrphasensäule mit wässrigem Methanol getrennt und mit einem Brechungsindexdetektor (oder ELSD) gemessen. Sucralose wird über Retentionszeit und Standardzusatz identifiziert, der Gehalt aus der Peakfläche über eine lineare Kalibrierfunktion aus mindestens fünf Standards berechnet.

Anwendungen

• Sucralose in Lebensmitteln: Ketchup, Mayonnaise, Kekse, Joghurt, Instant-Getränkepulver, Süßwaren — Validierungsbereich 83–737 mg/kg (1)
• Lösliche Proben (Hartkaramellen) und nicht vollständig lösliche Proben (Backwaren, Kaugummi, Joghurt, Ketchup, Mayonnaise) (6.2)
• Getränke, Säfte, Obst- und Gemüseerzeugnisse, Süßwaren, Fischerzeugnisse, Lebensmittelzusatzstoffe — 3 Datensätze der Akkreditierungsumfänge von 2 Laboratorien im PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN 16155:2012

Titel (PL)

Artykuły żywnościowe — Oznaczanie sukralozy — Metoda wysokosprawnej chromatografii cieczowej

Title (EN)

Foodstuffs — Determination of sucralose — High performance liquid chromatographic method

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Homogenisierung

   Rühren, Zerkleinern, Tiefgefrieren von Kaugummi (6.1). PN-EN 16155:2012 — ohne Vermerk einer Zurückziehung (PKN, 03.10.2026).

2. Probenlösung

   Ca. 5 g auf 50 ml; nicht vollständig lösliche Proben — 30 min bei 40–60 °C, Carrez für proteinhaltige Proben (6.2.1, 6.2.2).

3. SPE

   C18: Konditionierung, 5 ml Lösung, Waschen mit Wasser, Elution auf 10 ml, Filtration (6.2.3).

4. HPLC

   RP-18, 35 °C, RI 30 °C, ca. 1,2 ml/min; Identifizierung über Retentionszeit und Standardzusatz (6.3, 6.4).

5. Ergebnis

   (R − a) · V / (b · m), mg/kg oder mg/l, auf eine ganze Zahl gerundet (7).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Der gelesene Teil der Norm enthält keine eigenen Sicherheitsanforderungen; verwendet werden Methanol und Carrez-Lösungen (Kaliumhexacyanoferrat, Zinknitrat) (4)

Häufige Fragen