🦠 Pseudomonas aeruginosa in kosmetischen Mitteln — Nachweis nach Anreicherung in Eugon-LT-100-Bouillon und Isolierung auf Cetrimid-Agar

Mikrobiologie PN-EN ISO 22717

Übersicht

ISO 22717:2015 gibt allgemeine Leitlinien für den Nachweis und die Identifizierung von Pseudomonas aeruginosa an — einem in kosmetischen Mitteln „spezifizierten" Mikroorganismus; die Liste der spezifizierten Mikroorganismen kann sich je nach Praxis und Vorschriften von Land zu Land unterscheiden. Das Verfahren beruht auf dem Nachweis von P. aeruginosa in einem nichtselektiven flüssigen Nährmedium (Anreicherungsbouillon) und der anschließenden Isolierung auf einem selektiven Agarmedium; je nach dem geforderten Nachweisniveau können andere Verfahren geeignet sein (z. B. Überimpfungen auf nichtselektive Nährmedien und Identifizierung mit Testsätzen). Für nicht mit Wasser mischbare Erzeugnisse kann ISO 18415 geeignet sein; alternative Verfahren (z. B. automatische) werden nach dem Nachweis der Gleichwertigkeit zugelassen. Die Norm empfiehlt eine mikrobiologische Risikoanalyse; Erzeugnisse mit geringem Risiko (ISO 29621) sind u. a. solche mit niedriger Wasseraktivität, hydroalkoholische und solche mit extremem pH-Wert. Die wichtigsten Identifizierungsmerkmale von P. aeruginosa nach der Norm sind u. a. das Wachstum auf dem selektiven Cetrimid-Agar.

In Polen gilt sie als PN-EN ISO 22717:2016-01 mit der Änderung A1:2023-03 (sie ersetzte PN-EN ISO 22717:2010). In den Laboratorien, die die mikrobiologische Reinheit kosmetischer Mittel untersuchen, wird zur Beobachtung der Anwesenheit von P. aeruginosa das selektive Cetrimid-Nährmedium (Cetrimide Agar) verwendet — entsprechend dem Satz der PN-EN-ISO-Normen, die für quantitative und qualitative Untersuchungen kosmetischer Mittel angewendet werden.

Prinzip der Methode

Die erste Stufe ist die Anreicherung in einer nichtselektiven Bouillon, die die Zahl der Mikroorganismen erhöht, ohne das Risiko einer Hemmung durch die selektiven Bestandteile selektiv-differenzierender Nährmedien; die zweite Stufe (Isolierung) wird auf einem selektiven Nährmedium geführt, wonach Identifizierungstests ausgeführt werden. Eine etwaige Hemmung des Wachstums der Mikroorganismen durch die Probe muss neutralisiert und die Neutralisation der antibakteriellen Eigenschaften des Erzeugnisses überprüft und nachgewiesen werden (Abschnitt 11 der Norm, Eignungstest auf Casein-Soja-Agar). Die Probe besteht aus mindestens 1 g oder 1 ml des Erzeugnisses für die Erstverdünnung. Nährmedien nach der Norm: Trypton-Natriumchlorid-Lösung als Verdünnungsmittel der Bakteriensuspension, Casein-Soja-Agar für den Eignungstest, Eugon-LT-100-Bouillon für die Anreicherung (andere Bouillons sind zulässig), Cetrimid-Agar für die Isolierung von P. aeruginosa (er enthält u. a. Cetrimid, also Cetyltrimethylammoniumbromid, 0,3 g und Glycerin 10,0 ml je 1000 ml; nach dem Lösen wird er 1 min gekocht und 15 min bei 121 °C sterilisiert) sowie Pseudomonas-P-Agar zum Nachweis des Pyocyanins (mit Glycerin 10,0 ml/l; Kochen 1 min, Sterilisation 121 °C, 15 min) für die Bestätigung.

Anwendungen

• Kontrolle der mikrobiologischen Reinheit kosmetischer Mittel — Nachweis von P. aeruginosa als spezifiziertem Mikroorganismus
• Erzeugnisse auf Wasserbasis mit hohem Risiko (Cremes, Gele, Lotionen, Augenprodukte) — Chargenfreigabe
• Untersuchungen von Rohstoffen, von Prozesswasser und von Erzeugnissen im Verlauf der Arbeiten an der Konservierung
• Auftrags- und Werkslaboratorien der Kosmetikbranche (Satz PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416)

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 22717:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 22717:2015 + Amd 1:2022)

Titel (PL)

Kosmetyki — Mikrobiologia — Wykrywanie obecności Pseudomonas aeruginosa

Title (EN)

Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Risikoanalyse und Probe

   Lege fest, ob das Erzeugnis der Untersuchung unterliegt (ISO 29621). Entnimm mindestens 1 g oder 1 ml des Erzeugnisses und stelle die Erstverdünnung in der Anreicherungsbouillon her.

2. Eignungstest

   Weise die Neutralisation der antibakteriellen Eigenschaften des Erzeugnisses nach (Abschnitt 11) unter Verwendung einer Suspension des Referenzstamms in Trypton-NaCl-Lösung und von Casein-Soja-Agar.

3. Anreicherung

   Bebrüte die Erstverdünnung in der nichtselektiven Eugon-LT-100-Bouillon unter den in der Norm angegebenen Bedingungen.

4. Isolierung

   Impfe aus der Kultur Cetrimid-Agar und bebrüte ihn; beurteile das Wachstum der für P. aeruginosa charakteristischen Kolonien.

5. Bestätigung und Identifizierung

   Impfe verdächtige Kolonien auf Pseudomonas-P-Agar über (Bildung von Pyocyanin) und führe Identifizierungstests aus.

6. Ergebnis

   Gib die Anwesenheit oder das Fehlen von P. aeruginosa in der untersuchten Probe des Erzeugnisses (1 g oder 1 ml) an, mit der Angabe der nachgewiesenen Neutralisation.

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• P. aeruginosa ist ein opportunistischer Krankheitserreger (Augen- und Wundinfektionen) — Arbeit unter den Bedingungen eines mikrobiologischen Labors, Autoklavieren der Kulturen
• Cetrimid (quartäre Ammoniumverbindung) — reizend; Handschuhe und Schutzbrille beim Einwiegen
• Heiße Nährmedien nach dem Kochen und dem Autoklavieren — Verbrennungsgefahr

Häufige Fragen