🍎 Lactosegehalt in Milchpulver aller Art, in Speiseeis-Trockenmischungen (auch bei anderen Kohlenhydraten und reduzierenden Stoffen) und in Schmelzkäse — Einwaage mindestens 1 g in Wasser von 40–50 °C gelöst, Enteiweißung mit Kaliumhexacyanoferrat(II), Zinksulfat und NaOH, Filtration, Hydrolyse der Lactose mit β-Galactosidase und Oxidation der Galactose mit β-Galactose-Dehydrogenase und NAD+, Extinktion des NADH bei 340 nm in 1-cm-Küvette, Korrektur für in der Probe vorhandene Galactose; Wiederfindungskontrolle mit Lactose-Standardlösung 100 % ± 2 %; Ergebnis in Massenprozent; PN-ISO 5765-2:2015-09

Lebensmittelchemie PN-ISO 5765-2

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe von ISO 5765-2:2002 | IDF 79-2:2002 (erste Ausgabe vom 01.09.2002, englischer Text) — PN-ISO 5765-2:2015-09 übernimmt ISO 5765-2:2002 als identisch (PKN-Suche): Vorworte von ISO und IDF, Einleitung, Abschnitte 1–6 und Abschnitt 7 bis 7.5.2 — die Leseprobe endet auf Seite 5. Die eigentliche Bestimmung (7.6, einschließlich Pipettierschema), Berechnung (8), Präzision (9), Prüfbericht (10) und den normativen Anhang A (Regeln der guten Laborpraxis für enzymatische Analysen) lesen wir nicht; ihre Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis.

NACH DEM TEXT VON ISO 5765-2:2002. Die Norm wurde von ISO/TC 34 „Lebensmittel“, Unterkomitee SC 5 „Milch und Milcherzeugnisse“, gemeinsam mit dem IDF und in Zusammenarbeit mit AOAC International erarbeitet (gemeinsames ISO/IDF/AOAC-Aktionsteam Lactose- und Lactatbestimmung). Einleitung: das Verfahren nutzt den Galactoseanteil der Lactose und ergänzt ISO 5765-1, die die Glucose nutzt; die Wahl hängt vom Glucose- oder Galactosegehalt der Probe ab — bei deutlich höherem Glucose- als Lactosegehalt wird Teil 2 empfohlen, bei deutlich höherem Galactosegehalt Teil 1; bei geringen Gehalten beider ist jedes Verfahren gleichwertig, bei hohen Gehalten beider ist die Genauigkeit beider Verfahren deutlich verringert; in wärmebehandelter Milch und Erzeugnissen kann ein Teil der Lactose in Lactulose umgewandelt sein — Teil 1 erfasst sie nicht, Teil 2 erfasst sie teilweise als Lactose; in stark erhitzten Erzeugnissen (z. B. sterilisierte Milch) kann ein Teil der Lactose durch die Maillard-Reaktion an Protein gebunden sein und wird von keinem Verfahren bestimmt; verlässliche Ergebnisse nur bei strikter Anwendung der GLP-Regeln für enzymatische Analysen (Anhang A). Anwendungsbereich (1): Bestimmung der Lactose in Milchpulver aller Art, in Speiseeismischungen in Trockenform in Gegenwart anderer Kohlenhydrate und reduzierender Stoffe sowie in Schmelzkäse. Begriff (2.1): Lactosegehalt — Massenanteil der nach dem Verfahren dieses Teils bestimmten Stoffe, angegeben in Massenprozent. Prinzip (3): eine Lösung oder Suspension der Einwaage wird enteiweißt; der gereinigte Extrakt wird mit β-Galactosidase (Spaltung der Lactose in Glucose und Galactose) und β-Galactose-Dehydrogenase in Gegenwart von NAD+ (Oxidation der Galactose zu Galactonsäure unter Reduktion von NAD+ zu NADH) umgesetzt; die NADH-Menge wird aus der Extinktion bei 340 nm bestimmt; der Lactosegehalt ist nach Korrektur für die zu Beginn in der Probe vorhandene Galactose proportional zur NADH-Menge. Reagenzien (4): Wasser für Enzymlösungen mindestens zweifach in Glas destilliert; bei Enzymsuspension anderer Aktivität wird das Volumen im Pipettierschema proportional angepasst; Reagenzien 4.4 und 4.6–4.8 sind als Testkombination erhältlich (Beispiel in Fußnote); Kaliumhexacyanoferrat(II) — 3,6 g Trihydrat in 100 ml; Zinksulfat — 7,2 g Heptahydrat in 100 ml; NaOH 0,1 mol/l; Citratpuffer pH 6,6 ± 0,1 (Trinatriumcitrat, Citronensäure, Magnesiumsulfat; 3 Monate bei 0–5 °C); Phosphatpuffer (KH2PO4) pH 8,6 ± 0,1 (8 Wochen); NAD+ in Citratpuffer — 25 mg in 5 ml (3 Wochen); β-Galactosidase-Suspension (aus Escherichia coli, EC 3.2.1.23) in Ammoniumsulfat 3,2 mol/l, mindestens 60 U/ml, etwa 12 Monate bei 0–5 °C, im Gebrauch in Eis; β-Galactose-Dehydrogenase-Suspension (aus Pseudomonas fluorescens, EC 1.1.1.48), mindestens 8 U/ml, mindestens 6 Monate, im Gebrauch in Eis; Lactose-Monohydrat-Standardlösung 0,8 mg/ml — 400 mg bei 87 °C bis zur Massekonstanz getrocknete Lactose in 500 ml Wasser, 2 Tage bei 0–5 °C. Geräte (5): Analysenwaage (1 mg, Ablesbarkeit 0,1 mg), Pipetten, Messkolben 100 ml, mittelharte Filterpapiere etwa 15 cm, Spektrometer für 340 nm mit 1-cm-Küvetten, Kunststoffspatel für Küvetten, Wasserbad 20–25 °C (nur bei Raumtemperatur unter 20 °C nötig), Mischgerät für Käsesuspensionen, Trockenschrank (87 ± 2) °C, Mahl- oder Reibgerät für Käse. Probenahme (6) ist nicht Teil des Verfahrens — empfohlen ISO 707. Verfahrenskontrolle (7.1): Lactose-Wiederfindungstest bei neuer Charge NAD+, β-Galactosidase oder Dehydrogenase, nach mehr als 2 Wochen Lagerung dieser Reagenzien ohne Gebrauch, nach einer Arbeitspause oder wenn die Umstände es rechtfertigen — 5,0 und 10,0 ml Standardlösung in 100-ml-Kolben und weiter wie eine Probe; Wiederfindung für beide Verdünnungen 100 % ± 2 % (unter Berücksichtigung der Reinheit der Lactose); außerhalb dieses Bereichs Reagenzien, Technik, Pipetten und Spektrometer prüfen und Test wiederholen. Vorbereitung der Prüfprobe (7.2): Milchpulver und Speiseeismischungen — in einem dicht schließenden Behälter vom etwa doppelten Probenvolumen durch Schütteln und Umdrehen mischen; Schmelzkäse — Rinde, Schmiere und verschimmelte Schicht entfernen, mahlen oder reiben (möglichst zweimal), mischen; Suspension mit gleicher Menge Wasser. Einwaage (7.3): 1 g oder mehr auf 1 mg, in mindestens 20 ml Wasser von 40–50 °C gelöst, in einen 100-ml-Kolben überführt und auf etwa 60 ml verdünnt; Lactose in der Küvette vorzugsweise 5–100 µg; Extinktion A2 (Galactose in der Probe) 0,1–0,4; bei Lactose unter 0,2 % ist eine Einwaage über 1 g nötig — dann kann das Volumen des ausgefällten Fettes, Proteins und anderer Stoffe das Lösungsvolumen deutlich beeinflussen. Reagenzienblindwert doppelt (7.4). Enteiweißung (7.5): nacheinander 5,0 ml Hexacyanoferrat(II), 5,0 ml Zinksulfat und 10,0 ml NaOH unter Umschwenken nach jeder Zugabe, auf 100 ml auffüllen, 30 min stehen lassen ohne erneutes Mischen, filtrieren unter Verwerfen des ersten Filtratanteils.

STATUS (Stand 03.10.2026). Die PKN-Suche (Suchbegriff „PN-ISO 5765-2“, 03.10.2026) liefert ein Ergebnis: PN-ISO 5765-2:2015-09 — polnische Fassung, „Übernimmt: ISO 5765-2:2002 [IDT]“, ohne Zurückziehungsvermerk.

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Stand bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 5765-2 steht in 2 Datensätzen bei 2 Laboratorien: AB 285 und AB 1447. In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 285 Ausgabe Nr. 28 vom 13.01.2026, AB 1447 Ausgabe Nr. 16 vom 01.06.2026) steht die Nummer bei denselben 2 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Duplikate; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP geladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Schreibweisen: „PN-ISO 5765-2:2015-09“ (AB 285) und „PN-ISO 5765-2:2015-09 IDF 79-2:2002“ (AB 1447). Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-ISO 5765-2“) zeigt beide Laboratorien — geprüft per Abfrage des Reiters auf dem Produktionsserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (PCA-Positionen). AB 285: Milch und Milcherzeugnisse — Lactosegehalt (0,09–80,96) %, enzymatisch-spektralphotometrisches Verfahren. AB 1447: Milch und Milcherzeugnisse — Lactosegehalt (0,10–85,00) %, enzymatisches Verfahren.

WO LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ENTSTEHT. Matrix: der Anwendungsbereich umfasst Milchpulver, Speiseeis-Trockenmischungen und Schmelzkäse (1), beide PCA-Positionen nennen allgemein „Milch und Milcherzeugnisse“ — bei anderen Milcherzeugnissen sollte der Bericht zeigen, worauf die Anwendung des Verfahrens gestützt wird. Wahl des Teils: bei viel Glucose — Teil 2, bei viel Galactose — Teil 1; bei hohen Gehalten beider ist die Genauigkeit beider Verfahren deutlich verringert (Einleitung). Wärmebehandelte Erzeugnisse: Lactulose wird teilweise als Lactose erfasst, durch die Maillard-Reaktion gebundene Lactose nicht (Einleitung). Reagenzien: Enzymsuspensionen in Eis halten und nach neuer Charge oder längerer Lagerung Wiederfindung 100 % ± 2 % prüfen (4.7, 4.8, 7.1). Einwaage: Lactose in der Küvette vorzugsweise 5–100 µg, A2 0,1–0,4; unter 0,2 % Lactose größere Einwaage und Einfluss des Niederschlagsvolumens auf das Lösungsvolumen (7.3) — die unteren Enden der Bereiche beider Laboratorien (0,09 und 0,10 %) liegen in dieser Zone. Enteiweißung: Reihenfolge der Reagenzien und 30 min ohne erneutes Mischen vor der Filtration (7.5.1). Standard: Lactose-Monohydrat wird bei 87 °C getrocknet, die Lösung höchstens 2 Tage aufbewahrt (4.9).

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Pipettierschema und Messbedingungen (7.6), Berechnungsformeln (8), Präzisionsdaten (9) und die GLP-Regeln aus Anhang A geben wir nicht wieder — sie liegen außerhalb der Leseprobe. ISO 5765-1 und ISO 707 fassen wir in diesem Eintrag nicht zusammen.

Prinzip der Methode

Die Probenlösung wird mit Kaliumhexacyanoferrat(II), Zinksulfat und Natriumhydroxid enteiweißt, und im Filtrat wird Lactose durch das Enzym β-Galactosidase in Glucose und Galactose gespalten. Galactose wird anschließend durch β-Galactose-Dehydrogenase oxidiert, wobei NAD+ zu NADH reduziert wird, dessen Menge über die Extinktion bei 340 nm gemessen wird. Lactose wird aus der NADH-Zunahme nach Abzug der vor der Hydrolyse in der Probe vorhandenen Galactose berechnet.

Anwendungen

• Milchpulver aller Art (1)
• Speiseeismischungen in Trockenform, auch mit anderen Kohlenhydraten und reduzierenden Stoffen (1)
• Schmelzkäse (1, 7.2.2)
• Milch und Milcherzeugnisse — Lactosegehalt — 2 Datensätze von Akkreditierungsumfängen von 2 Laboratorien in PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-ISO 5765-2:2015-09

Titel (PL)

Mleko w proszku, mieszanki lodziarskie w proszku i sery topione — Oznaczanie zawartości laktozy — Część 2: Metoda enzymatyczna wykorzystująca galaktozową część laktozy

Title (EN)

Dried milk, dried ice-mixes and processed cheese — Determination of lactose content — Part 2: Enzymatic method utilizing the galactose moiety of the lactose

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Verfahrenskontrolle

   Wiederfindung des Lactosestandards 100 % ± 2 % bei neuen Reagenzien oder nach Pause (7.1). PN-ISO 5765-2:2015-09 — ohne Zurückziehungsvermerk (PKN, 03.10.2026).

2. Vorbereitung der Prüfprobe

   Pulver — Mischen im dicht schließenden Behälter; Schmelzkäse — Mahlen und Suspension mit Wasser (7.2).

3. Einwaage

   ≥ 1 g, Wasser 40–50 °C, 100-ml-Kolben, etwa 60 ml (7.3); Reagenzienblindwert doppelt (7.4).

4. Enteiweißung

   Kaliumhexacyanoferrat(II), Zinksulfat, NaOH, auf 100 ml, 30 min, Filtration unter Verwerfen des ersten Anteils (7.5).

5. Enzymatische Bestimmung

   β-Galactosidase und Dehydrogenase mit NAD+, Extinktion bei 340 nm, Korrektur für freie Galactose (3, 7.6 — außerhalb der Leseprobe).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Enzymsuspensionen werden bei 0–5 °C gelagert und im Gebrauch in einem in Eis getauchten Gefäß gehalten (4.7, 4.8)

Häufige Fragen