🍎 Bestimmung des Coffeingehalts in normalen und entkoffeinierten grünen und gerösteten Kaffeebohnen sowie in normalem und entkoffeiniertem Kaffeeextrakt (Instantkaffee) mittels HPLC — Extraktion von 1 g (oder 0,5 g Extrakt) mit Wasser bei 90 °C über 20 min in Gegenwart von Magnesiumoxid, Reinigung eines Teils des Filtrats an einer kleinen Säule mit phenylmodifiziertem Kieselgel, Trennung an einer C18-Säule mit Methanol/Wasser 30 + 70 bei 40 °C, UV-Detektion 254–280 nm (Coffeinmaximum 272 nm), Ergebnis in g Coffein je 100 g Trockenmasse; PN-ISO 10095:1997 (zurückgezogen 01.08.2018)

Lebensmittelchemie PN-ISO 10095

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe der ISO 10095:1992 (erste Ausgabe, 1992-01-15, englischer Text) — PN-ISO 10095:1997 übernimmt sie als gleichwertig [EQV] (PKN-Karte). Die Leseprobe umfasst das ganze Dokument: Vorwort, Abschnitte 1–11 und Anhang A (Literaturhinweise), insgesamt 6 Seiten. Der Text der Leseprobe ist ein Scan mit Zeichenerkennungsfehlern; Zahlen und Einheiten lesen wir aus dem Satzzusammenhang.

NACH DEM TEXT DER ISO 10095:1992. Die Norm wurde von ISO/TC 34 „Landwirtschaftliche Lebensmittelerzeugnisse“, Unterkomitee SC 15 „Kaffee“, erarbeitet. Anwendungsbereich (1): Bestimmung des Coffeingehalts mittels HPLC in normalen und entkoffeinierten grünen und gerösteten Kaffeebohnen sowie in normalem und entkoffeiniertem Kaffeeextraktpulver; das Referenzverfahren (UV-Absorptionsspektrometrie) ist ISO 4052:1983. Verweisungen (2): ISO 1447:1978 (Feuchte von Rohkaffee, Routineverfahren), ISO 3726:1983 (Masseverlust von Instantkaffee bei 70 °C unter vermindertem Druck), ISO 6673:1983 (Masseverlust von Rohkaffee bei 105 °C). Prinzip (3): Extraktion des Coffeins aus einer Prüfmenge mit Wasser bei 90 °C in Gegenwart von Magnesiumoxid; Filtration und Reinigung eines Aliquots an einer Mikrosäule mit phenylmodifiziertem Kieselgel; Bestimmung mittels HPLC mit UV-Detektion. Reagenzien (4): Methanol in HPLC-Qualität; Ammoniaklösung 0,3 mol/l mit Methanol 90 + 10; Elutionsmittel Methanol/Wasser/Essigsäure 75 + 25 + 1; mobile Phase Methanol/Wasser 30 + 70 (600 ml Methanol auf 2 l, durch 0,45 µm filtriert; eine geänderte Methanolkonzentration verschiebt die Retentionszeit); Ethanol/Wasser 1 + 4; Magnesiumoxid; Coffein-Stammlösung 0,5 g/l (125 mg in 250-ml-Braunglaskolben, in Ethanol/Wasser; im Kühlschrank einen Monat haltbar); Standard A 0,010 g/l (2 ml auf 100 ml) — für entkoffeinierte Erzeugnisse, Standard B 0,05 g/l (5 ml auf 50 ml) — für normale, beide am Tag der Verwendung hergestellt. Geräte (5): HPLC mit UV-Detektor 254–280 nm — bevorzugt eine Wellenlänge nahe 280 nm, Absorptionsmaximum von Coffein 272 nm; C18-Säule, vorzugsweise mit kugelförmigen Teilchen, mindestens 5000 theoretische Böden (Bodenzahl aus dem Standardpeak); die Bedingungen der Norm wurden für eine Säule 110 mm × 4,6 mm gewählt — eine andere Säule kann eine andere mobile Phase erfordern; Reinigungssäule 3 ml mit Phenyl-Kieselgel, Teilchen ca. 40 µm; Mühle für Röstkaffee, gekühlte Mühle für Rohkaffee, Sieb 630 µm, Filter 0,45 µm, Wasserbad 90 ± 1 °C mit Rühren, Waage 0,0001 g, 250-ml-Flasche mit Schraubverschluss. Probenahme (6): Rohkaffee in Säcken nach ISO 4072, Instantkaffee nach ISO 6670. Vorbereitung (7): Mahlen bis zum Durchgang durch das Sieb. Durchführung (8): die Trockenmasse wird aus der Feuchte nach ISO 1447 oder ISO 6673 (Rohkaffee) oder ISO 3726 (Instantkaffee) berechnet; Prüfmenge 1 g Roh- oder Röstkaffee, 0,5 g Extrakt; in die Flasche 4 ± 0,5 g Magnesiumoxid und 100 g Wasser, Wägung auf 0,1 g; 20 min bei 90 °C unter Rühren, Abkühlen und erneutes Wägen — die Massen müssen gleich sein, sonst wird die Extraktion mit einer neuen Prüfmenge wiederholt; Filtrat; die Säule wird mit 5 ml Methanol und 5 ml Wasser aktiviert und darf nicht trockenlaufen; aufgegeben werden 2,0 ml Filtrat (normaler Kaffee) oder 10,0 ml (entkoffeiniert); gewaschen mit 2 × 2,5 ml Ammoniak/Methanol, ca. 20 ml Luft durchgeblasen; Coffein mit 7,5 ml Elutionsmittel in einen Kolben eluiert und aufgefüllt; die Säule kann mit Methanol regeneriert werden, höchstens 10-mal; HPLC — Durchfluss 0,5–1,5 ml/min, Säule 40 °C (höhere Temperatur verbessert die Trennung, soll aber 60 °C nicht überschreiten), Injektion von 10 µl Messlösung und ebenso viel Standard; das Beersche Gesetz gilt normalerweise bis 0,0250 g/l, sonst ist eine Kalibrierkurve nötig. Ergebnisse (9): g Coffein je 100 g Trockenmasse, aus den Peakflächen von Probe und Standard, der Standardkonzentration, der Prüfmenge und der Trockenmasse — getrennte Formeln für normale Erzeugnisse (Standard B) und entkoffeinierte (Standard A). Präzision (10): Ringversuch von ISO/TC 34/SC 15 im Jahr 1987, 18 Laboratorien, Versuchsplan nach ISO 5725; Tabelle 1 — Wiederhol- und Vergleichgrenze (g/100 g): Röstkaffee — zwei Gehaltsstufen, 0,07 und 0,34 sowie 0,04 und 0,12 (Stufen im Scan unleserlich), entkoffeinierter Röstkaffee (< 0,1 g/100 g) 0,01 und 0,02, Instantkaffee 0,09 und 0,36, entkoffeinierter Instantkaffee (< 0,3 g/100 g) 0,02 und 0,03. Prüfbericht (11): Verfahren, Ergebnisse, nicht in der Norm festgelegte Einzelheiten und Vorkommnisse, die das Ergebnis beeinflusst haben können.

STATUS (Stand 03.10.2026). PKN-Karte PN-ISO 10095:1997 (polnische Fassung): Status „Zurückgezogen“, Veröffentlichung 28.10.1997, Zurückziehung 01.08.2018, führt ISO 10095:1992 [EQV] ein, KT 229 „Kaffee, Tee und Kakao“; die Karte nennt keine ersetzende Norm. Den Status der ISO 10095:1992 im iTeh-Katalog haben wir nicht gelesen (die Katalogseiten erfordern seit dem 03.10.2026 einen Browser mit Skripten). Was die Zurückziehung für das Ergebnis ändert: die Karte nennt keinen Nachfolger, es gibt also keinen neueren PN-Text, mit dem sich das Verfahren vergleichen ließe — die Laboratorien arbeiten nach demselben Dokument und zitieren eine zurückgezogene Norm.

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Datenstand bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 10095 steht in 4 Datensätzen bei 2 Laboratorien: AB 285 (1) und AB 381 (3). In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 285 Ausgabe Nr. 28 vom 13.01.2026, AB 381 Ausgabe Nr. 29 vom 10.06.2026) steht die Nummer bei denselben 2 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Wiederholungen; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP geladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Die Form „PN-ISO 10095:1997“ bei beiden. Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-ISO 10095“) zeigt beide Laboratorien — geprüft per Abfrage des Reiters auf dem Produktionsserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (Positionen im PCA). AB 285: Röstkaffee und Instantkaffee — Coffein (0,03–4,40) g/100 g TM, HPLC-DAD. AB 381: gemahlener Kaffee, Bohnenkaffee und Instantkaffee — (30–45 000) mg/kg; entkoffeinierter Kaffee und Kaffeegetränke — (30–3500) mg/kg; Energydrinks — (0,5–400) mg/l; HPLC-UV/DAD.

WO MAN LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ERHÄLT. Bezugsbasis: die Norm gibt Coffein in g/100 g Trockenmasse an (9), und die Trockenmasse stammt aus einer anderen Norm (8.1); ein Ergebnis in mg/kg Erzeugnis (AB 381) hat eine andere Basis. Extraktion: die Masse der Flasche nach dem Erhitzen muss der Masse vorher entsprechen — sonst wird mit neuer Prüfmenge wiederholt (8.3.3). Standard: entkoffeinierte Erzeugnisse werden gegen Standard A (0,010 g/l) und aus 10 ml Filtrat berechnet, normale gegen Standard B (0,05 g/l) und aus 2 ml (4.8, 8.4.2, 9). Reinigungssäule: ist sie vor dem Aufgeben der Probe trockengelaufen, muss sie neu vorbereitet werden; Regeneration höchstens 10-mal (8.4.1, Anmerkung 4). Linearität: die Einpunktberechnung setzt das Beersche Gesetz bis 0,0250 g/l voraus — bei Abweichung ist eine Kurve nötig (8.5.2, Anmerkung 6). Säule: die Bedingungen wurden für eine bestimmte Säule 110 × 4,6 mm gewählt; eine andere kann eine geänderte mobile Phase erfordern (5.2). Anwendungsbereich: die Norm betrifft Kaffee; Kaffeegetränke und Energydrinks (AB 381) liegen außerhalb (1). Status: PN-ISO 10095:1997 ist seit dem 01.08.2018 zurückgezogen.

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Die genaue Form der Formeln aus Abschnitt 9 geben wir nicht wieder — sie sind im Scan der Leseprobe teilweise unleserlich. ISO 4052, ISO 1447, ISO 3726, ISO 6673, ISO 4072, ISO 6670 und ISO 5725 fassen wir in diesem Eintrag nicht zusammen. Anforderungen an den Coffeingehalt von entkoffeiniertem Kaffee oder Getränken geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

Coffein wird aus der Kaffeeprobe mit Wasser bei 90 °C in Gegenwart von Magnesiumoxid extrahiert. Ein Teil des Filtrats wird an einer kleinen Säule mit phenylmodifiziertem Kieselgel gereinigt — unerwünschte Verbindungen werden mit Ammoniak in Methanol ausgewaschen, Coffein mit einer Mischung aus Methanol, Wasser und Essigsäure eluiert. Coffein wird an einer C18-Säule getrennt und mit einem UV-Detektor bei etwa 272–280 nm gemessen; der Gehalt wird aus den Peakflächen von Probe und Standard berechnet und auf die Trockenmasse bezogen.

Anwendungen

• Coffein in normalen und entkoffeinierten grünen und gerösteten Kaffeebohnen (1)
• Coffein in normalem und entkoffeiniertem Kaffeeextraktpulver (Instantkaffee) (1)
• Röst-, Mahl-, Bohnen-, Instant- und entkoffeinierter Kaffee sowie Kaffee- und Energydrinks — 4 Datensätze der Akkreditierungsumfänge von 2 Laboratorien im PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-ISO 10095:1997

Titel (PL)

Kawa — Oznaczanie zawartości kofeiny — Metoda wykorzystująca wysoko sprawną chromatografię cieczową

Title (EN)

Coffee — Determination of caffeine content — Method using high-performance liquid chromatography

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Probenvorbereitung

   Mahlen bis zum Durchgang durch das 630-µm-Sieb; Trockenmasse nach ISO 1447, ISO 6673 oder ISO 3726 (7, 8.1). PN-ISO 10095:1997 — zurückgezogen 01.08.2018 (PKN).

2. Extraktion

   Prüfmenge mit MgO und 100 g Wasser, 20 min bei 90 °C; Massekontrolle vorher und nachher (8.2, 8.3).

3. Reinigung

   Phenylsäule: Aktivierung, Aufgabe des Filtrats, Waschen mit Ammoniak/Methanol, Elution des Coffeins (8.4).

4. HPLC

   10 µl Messlösung und Standard, 40 °C, 0,5–1,5 ml/min (8.5).

5. Ergebnis

   g Coffein/100 g Trockenmasse; Standard B für normalen Kaffee, A für entkoffeinierten (9).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Die Norm hat keinen eigenen Sicherheitsabschnitt; verwendet werden Methanol, Ammoniaklösung und Essigsäure (4.1–4.3)

Häufige Fragen