🍎 Quantitative Bestimmung gentechnisch veränderter Organismen (GVO) in Lebensmitteln (auch in Futtermitteln und Pflanzenproben) mit PCR-Verfahren — mit Real-Time-PCR oder kompetitiver PCR werden eine GVO-spezifische Sequenz und eine endogene taxonspezifische Sequenz gemessen und das Ergebnis als ihr Verhältnis in Prozent angegeben; Kalibrierung mit geeigneter Zahl von Punkten und Wiederholungen (z. B. 4 × 2 oder 6 × 1) mit (vorzugsweise zertifizierten) Referenzmaterialien oder Plasmid bzw. synthetischer dsDNA mit gleichwertigem Verhalten; DNA jeder Prüfportion mindestens in Doppelbestimmung; Konsistenzkriterien — Abweichungen zwischen Verdünnungen ± 33 %, zwischen Prüfportionen −50 % bis +100 % (ΔCt = 1); Ergebnis „X ± Unsicherheit %“ oder qualitativ, wenn eine Sequenz unter der LOQ liegt, PN-EN ISO 21570

Lebensmittelchemie PN-EN ISO 21570

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe der ISO 21570:2005 (englischer Text, Ausgabe 2005): Inhaltsverzeichnis, Vorwort, Einleitung, Abschnitte 1–10 und Anfang von Anhang A bis Tabelle A.3 (Verfahren für das Mais-Gen adh1) — die Leseprobe endet auf Seite 7. Den Rest von Anhang A und die Anhänge B (35S-Screeningverfahren für Soja GTS 40-3-2), C (neun konstruktspezifische Verfahren: GTS 40-3-2, Event176, MON 810, Bt11, GA21, T25) und D (eventspezifische Verfahren für Bt11 und MON 810) lesen wir nicht; die Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis. Die Änderung ISO 21570:2005/Amd 1:2013 lesen wir in einer eigenen iTeh-Leseprobe (russischer Text, „Изменение 1“, 2013-04-15): vom Deckblatt bis A.2.10 (neues Verfahren für Reis); den Rest der Änderung lesen wir nicht. Die Elemente AC:2007 und Ap1:2007 haben wir nicht gelesen.

NACH DEM TEXT DER ISO 21570:2005. Die Norm erarbeitete CEN/TC 275 „Lebensmittelanalytik — Horizontale Verfahren“ in Zusammenarbeit mit ISO/TC 34 (Wiener Vereinbarung). Einleitung: Untersuchung auf GV-Bestandteile — Probenahme, Extraktion (ISO 21571), Reinigung, Quantifizierung, Verdünnung, Analyse (PCR); qualitative Verfahren — ISO 21569, allgemeine Anforderungen — ISO 24276; Konformität kann eine Lizenz für die PCR-Technologie erfordern. Anwendungsbereich (1): allgemeiner Rahmen für quantitative Verfahren zum GVO-Nachweis in Lebensmitteln mittels PCR; Anforderungen an die spezifische Amplifikation von Zielsequenzen zur Bestimmung des relativen Gehalts an GVO-DNA und zur Identitätsbestätigung; für Lebensmittelmatrices entwickelt, auch auf andere anwendbar, z. B. Futtermittel und Pflanzenproben aus der Umwelt. Verweisungen (2): ISO 21569:2005, ISO 21571, ISO 24276 (in Vorbereitung), ISO Guide 32. Prinzip (4): Bestimmung von Zielsequenzen, jedes Verfahren legt die Sequenzen fest; kompetitive PCR oder Real-Time-PCR; die Menge des genetischen Elements wird relativ zu einer festgelegten Bezugsgröße, Kalibranten und Kontrollen angegeben, im dynamischen Bereich des Verfahrens und der Prüfportion; Analyse: Amplifikation, Nachweis und Bestätigung (bei Real-Time-PCR gleichzeitig), Quantifizierung gegen Kalibranten; meist das Verhältnis (in Prozent) der GVO-Sequenz zu einer endogenen taxonspezifischen Sequenz, mitunter bezogen auf die Matrixmenge (z. B. GV-Mikroorganismen in Lebensmitteln); Kalibranten möglichst auf zertifizierte Referenzmaterialien bezogen. Reagenzien (5): identisch mit oder gleichwertig zu den im Verfahren genannten, sonst in Qualität für die Molekularbiologie. Durchführung (7): Sequenzkonzentration im dynamischen Bereich des Verfahrens; Anmerkung — ein taxonspezifischer Kontrolllauf erlaubt die Beurteilung, ob die DNA ausreichende Qualität, Reinheit und Menge hat, besonders aus komplexen und stark verarbeiteten Matrices; DNA jeder Prüfportion wird mindestens doppelt analysiert; Kontrollen nach ISO 24276, Tabelle 1; allelische Stabilität und Kopienzahl der Sequenz in Sorten verschiedener Herkunft sind zu berücksichtigen; Kalibrierung mit geeigneter Zahl von Punkten und Wiederholungen (z. B. vier Punkte doppelt oder sechs Punkte einfach), die Qualität der Kalibrierung beeinflusst die Unsicherheit; statt genomischen Referenzmaterials können Verdünnungen eines Plasmids oder synthetischer dsDNA verwendet werden, wenn gleichwertiges Verhalten nachgewiesen ist; gestapelte Gene können zur Überschätzung des GVO-Gehalts führen; LOQ nach ISO 24276; die Berechnung des Gehalts aus Kopienzahlen je haploidem Genom hängt von Homo- und Heterozygotie ab; die ΔΔCt-Methode gilt nur bei sehr ähnlicher Amplifikationseffizienz beider Bestimmungen; Mindestkonsistenz bei Angabe in Prozent: innerhalb einer Prüfportion — Verwerfen von Messungen unter der LOQ und größte Abweichung zwischen Verdünnungen und Messungen gleich der aus der Verdünnung erwarteten ± 33 %; zwischen Prüfportionen — Ergebnisse dürfen nicht mehr als −50 % bis +100 % abweichen (ΔCt = 1 bei Real-Time-PCR; z. B. 1,0 % und 2,0 % — zulässig, 0,9 % und 2,1 % — nicht); für die Richtigkeit ist ein (vorzugsweise zertifiziertes) Referenzmaterial für das Event mit ähnlicher Matrix auszuwählen und zu prüfen; fehlt es — ein internes Material mit nachgewiesener Stabilität, Homogenität und metrologischer Rückführbarkeit; die Unsicherheit muss die Anforderungen an Kalibrierungen erfüllen (ISO Guide 32). Auswertung (8): ein Ergebnis eignet sich zur Quantifizierung, wenn es nach ISO 21569:2005, 8.1 positiv ist, die Inhibition vernachlässigbar, der Wert eindeutig, der Gehalt im dynamischen Bereich und die Kalibrierung korrekt ist; sonst — ungeeignet; die Unsicherheit muss klein genug für Schlussfolgerungen sein; liegt der Gehalt der GV- oder taxonspezifischen Sequenz unter der LOQ, wird das Ergebnis nur qualitativ angegeben (die Angabe „unter der praktischen LOQ“ mit ihrem Wert ist ein qualitatives Ergebnis). Angabe der Ergebnisse (9, Tabelle 1): Menge der GV-Sequenz relativ zur taxonspezifischen Sequenz, mit Unsicherheit (z. B. Standardabweichung), LOD und LOQ des Verfahrens sowie praktische LOD und LOQ; vier Fälle — DNA der Art nicht nachgewiesen; DNA der Art nachgewiesen, GVO-DNA nicht (mit praktischer LOD); beide nachgewiesen, aber mindestens eine Sequenz unter der LOQ — „GVO-DNA nachgewiesen“ (mit praktischer LOQ); beide über der LOQ — „der Gehalt an GVO-DNA beträgt X ± Unsicherheit %“ (mit Einheit); es kann auch angegeben werden, dass der Gehalt unter Berücksichtigung der Unsicherheit über oder unter einem bestimmten Wert liegt. Prüfbericht (10): nach ISO 24276 und ISO 21569, zusätzlich LOQ des Verfahrens mit Matrix, praktische LOQ, DNA-Extraktionsverfahren, Referenzmaterial, Ergebnisse nach Abschnitt 9. Anhang A.1 (Mais-Gen adh1, absolute Quantifizierung mit Real-Time-PCR, Regression der Ct-Werte gegen bekannte Kopienzahlen): Primer ADH-FF3 und ADH-RR4 je 300 nmol/l, Sonde ADH1-MDO (FAM/TAMRA) 200 nmol/l, Amplikon 134 bp; MgCl2 25 mmol/l, dNTP je 2,5 mmol/l; Reaktionsvolumen 25 µl, Matrizen-DNA bis 250 ng in 5 µl, 2X-Mastermix 12,5 µl.

NACH DER ÄNDERUNG ISO 21570:2005/AMD 1:2013. Die Änderung erarbeitete ISO/TC 34, Unterkomitee SC 16. Die Verweisungen auf ISO 21569, ISO 21571 und ISO 24276 wurden auf die Ausgaben 2005 und 2006 mit ihren Änderungen von 2013 umgestellt; in 7.1 und in den Verfahrensbeschreibungen der Anhänge wird „ISO 24276:—“ durch „ISO 24276:2006“ ersetzt. Die Abschnitte 8–10 erhalten eine neue Fassung. Auswertung (8): ein PCR-Ergebnis eignet sich zur Quantifizierung, wenn es nach 8.1 der ISO 21569 positiv ist, die Inhibition unbedeutend, die Messung eindeutig ist, die Sequenzmenge im dynamischen Bereich liegt und die Kalibrierung angemessen ist (7.3) — sonst ist es ungeeignet; bei +/− in zwei Wiederholungen werden zwei PCR wiederholt, und bei erneut +/− oder −/− gilt die Prüfportion als negativ; bei ± aus zwei Prüfportionen werden zwei neue extrahiert und geprüft, und bei erneut +/− gilt die Prüfportion als negativ (ISO 24276:2006, 6.3); die Unsicherheit muss so klein sein, dass das Laboratorium eine begründete Schlussfolgerung ziehen kann; die Berechnung der GVO-Menge aus der DNA-Menge berücksichtigt meist Homo- und Heterozygotie; liegt die GV- oder taxonspezifische Sequenz unter der LOQ, wird das Ergebnis nur qualitativ angegeben, und die Angabe „unter der praktischen LOQ“ mit ihrem Wert gilt als qualitative Angabe. Angabe der Ergebnisse (9): Menge der GV-Sequenz relativ zur taxonspezifischen Sequenz mit Unsicherheit (z. B. Standardabweichung oder Variationskoeffizient), LOD und LOQ des Verfahrens sowie praktische Werte; das Ergebnis bezieht sich nur auf die GVO-Ziele; bei Screeningverfahren und komplexen Matrices wird empfohlen anzugeben, dass das Signal aus Nicht-Ziel-Taxa stammen kann; der Gehalt kann als über oder unter einem Wert unter Berücksichtigung der Unsicherheit angegeben werden; Tabelle 1 gibt vier Formulierungen: keine DNA der Art („Für die Art X wurde keine DNA nachgewiesen“), keine GV-Sequenz (nach ISO 21569, mit LOD des Verfahrens und Referenzmaterial, und wenn eine ausreichende DNA-Menge nicht gezeigt werden kann — mit Zusatz und LOD der Probe), Sequenz unter der praktischen LOQ nachgewiesen, quantitatives Ergebnis „x ± u %“. Prüfbericht (10): nach ISO 24276 und ISO 21569, mindestens LOQ des Verfahrens mit Material, praktische LOQ, Extraktionsverfahren, Amplifikationsverfahren, Referenzmaterial, Ergebnis nach 9, PCR-Ziel und Art des Verfahrens (eventspezifisch, konstruktspezifisch, Screening), Art der Unsicherheitsermittlung. Anhang A, neuer A.2 — reisspezifisches Verfahren (Saccharosephosphatsynthase-Gen SPS, Fragment 81 bp, Real-Time-PCR mit TaqMan-Sonde): Ringversuch des GMDL-SJTU, 12 Laboratorien, acht Blind-DNA-Proben von 0,5–10 ng; Variationskoeffizient der Wiederholbarkeit 14,29–20,98 %, der Vergleichbarkeit 10,84–31,92 %, systematische Abweichung von −26,53 % bis +8,92 %; im dynamischen Bereich 0,05–1,00 ng systematische Abweichung im laborinternen Versuch unter 25 %; absolute LOQ 0,01 ng/µl, relative LOQ nicht bewertet; Spezifität: unter 11 Pflanzen nur Reis positiv, alle 12 Reissorten positiv; CTAB-Extraktion nach ISO 21571; getrennte Bereiche für Extraktion, PCR-Ansatz und Amplifikation, Filterspitzen, puderfreie Handschuhe. Im russischen Text beschreibt Abschnitt A.2.4 eine mit FAM markierte Sonde und die Quantifizierung von „Reis-adh1-DNA“, Tabelle A.6 dagegen eine mit HEX markierte SPS-Sonde — diese Widersprüche lösen wir nicht auf, da wir den englischen Text der Änderung nicht gelesen haben.

STATUS (Stand 03.10.2026). In der PKN-Suche (Suchbegriff „21570“, 03.10.2026) hat PN-EN ISO 21570:2007 (polnische Fassung, „Führt ein: EN ISO 21570:2005 [IDT], ISO 21570:2005 [IDT]“) keinen Rückzugsvermerk; daneben das Zusatzelement PN-EN ISO 21570:2007/A1:2013-06 (englische Fassung). Karte: Veröffentlichung 12.01.2007, 110 Seiten, KT 287 Biotechnologie, ICS 67.050, „Ersetzt PN-EN ISO 21570:2006 – englische Fassung“, Zusatzelemente PN-EN ISO 21570:2007/AC:2007P, PN-EN ISO 21570:2007/Ap1:2007P und PN-EN ISO 21570:2007/A1:2013-06E, ohne Rückzugsvermerk. Im iTeh-Katalog (gelesen 03.10.2026) hat ISO 21570:2005 den Status „Published“, Stufe 90.60 (Abschluss der Überprüfung), mit Amendment 1.

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Stand bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 21570 steht in 3 Datensätzen bei 3 Laboratorien: AB 465, AB 704, AB 868. In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 465 Ausgabe Nr. 31 vom 23.12.2025, AB 868 Ausgabe Nr. 21 vom 06.03.2026, AB 704 Ausgabe Nr. 23 vom 20.04.2026) steht die Nummer in 3 Zeilen bei denselben 3 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Wiederholungen; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP heruntergeladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Die Form ist stets „PN-EN ISO 21570“ ohne Jahr — mit den Verfahren PBD-74.00.00 und PBD-75.00.00 (AB 465), mit „vom Laboratorium entwickelten Verfahren“ (AB 704) oder zusammen mit PN-EN ISO 21569 (AB 868). Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-EN ISO 21570“) zeigt alle 3 Laboratorien — geprüft mit einer Reiterabfrage auf dem Produktivserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (Positionen bei PCA). AB 465: Futtermittel (flexibler Umfang) — Gehalt an gentechnischen Veränderungen, Real-Time-PCR; AB 704: landwirtschaftliche Erzeugnisse, Lebensmittel (flexibler Umfang) — Anwesenheit und Gehalt von GVO, Real-Time-PCR; AB 868: landwirtschaftliche Erzeugnisse und Futtermittel (flexibler Umfang) — Anwesenheit und Gehalt gentechnischer Veränderungen, PCR und Real-Time-PCR.

WO LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ENTSTEHT. Bei der Einheit: das Ergebnis ist das Verhältnis der GV-Sequenz zur taxonspezifischen Sequenz (meist in Prozent), kein Massenanteil — die Einheit ist anzugeben (4.3, Tabelle 1). Bei der LOQ: liegt eine der beiden Sequenzen unter der LOQ, wird keine Zahl angegeben — nur ein qualitatives Ergebnis mit praktischer LOQ (8). Bei der Konsistenz: zwei Prüfportionen müssen innerhalb −50 % bis +100 % übereinstimmen (1,0 und 2,0 % — ja, 0,9 und 2,1 % — nein), Messungen in Verdünnungen innerhalb ± 33 % (7.5). Bei der Berechnung: ΔΔCt nur bei sehr ähnlicher Effizienz beider Reaktionen; Kopienzahl je haploidem Genom hängt von der Zygotie ab; gestapelte Gene überschätzen den Gehalt (7.4). Bei der Kalibrierung: Kalibranten auf zertifizierte Referenzmaterialien bezogen, Plasmid oder synthetische dsDNA nur nach Nachweis der Gleichwertigkeit (4.3, 7.3). Bei der Matrix: DNA aus komplexen und stark verarbeiteten Matrices kann für die Quantifizierung ungeeignet sein — ein taxonspezifischer Kontrolllauf ist ratsam (7.1). Bei abweichenden Ergebnissen: nach der Änderung A1:2013 machen wiederholte +/−-Ergebnisse die Prüfportion negativ (8 in der Fassung von A1). Beim Bericht: die Änderung A1:2013 verlangt praktische LOQ, Referenzmaterial, Art des Verfahrens und Art der Unsicherheitsermittlung (10 in der Fassung von A1). Bei der Ausgabe: alle Laboratorien verweisen auf die Norm ohne Jahr, neben eigenen Verfahren; die PKN-Karte nennt drei Zusatzelemente, und die Änderung A1:2013 fasst die Abschnitte 8–10 neu.

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Den Rest des adh1-Verfahrens und die Verfahren der Anhänge B–D zitieren wir nicht — sie liegen außerhalb der Leseprobe. Den Inhalt von AC:2007, Ap1:2007, den Rest der Änderung A1:2013 und ISO 24276 haben wir nicht gelesen. Kennzeichnungsschwellen für GVO aus Rechtsvorschriften geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

In der aus der Probe extrahierten DNA werden mit Real-Time-PCR (oder kompetitiver PCR) zwei Sequenzen bestimmt: eine GVO-spezifische (Screening-Element, Konstrukt oder Event) und eine endogene taxonspezifische. Die Kopienzahlen ergeben sich aus Kalibrierkurven aus — vorzugsweise zertifizierten — Referenzmaterialien, und der GVO-Gehalt wird als Verhältnis beider Sequenzen in Prozent mit Unsicherheit angegeben. Ein Zahlenergebnis wird nur angegeben, wenn beide Sequenzen über der LOQ liegen und die Messungen in Prüfportionen und Verdünnungen die Konsistenzkriterien erfüllen.

Anwendungen

• Quantitative Bestimmung von GVO in Lebensmitteln; auch in Futtermitteln und Pflanzenproben aus der Umwelt (1)
• Beispielverfahren der Real-Time-PCR für Mais (adh1, Event176, MON 810, Bt11, GA21, T25) und Soja GTS 40-3-2 (Anhänge A–D)
• Futtermittel, landwirtschaftliche Erzeugnisse und Lebensmittel — Positionen in den Akkreditierungsumfängen von 3 Laboratorien bei PCA (Real-Time-PCR)

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 21570:2007

Titel (PL)

Artykuły żywnościowe — Metody wykrywania organizmów zmodyfikowanych genetycznie i produktów pochodnych — Metody ilościowe oparte na kwasach nukleinowych

Title (EN)

Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Quantitative nucleic acid based methods

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. DNA

   Extraktion nach ISO 21571; taxonspezifischer Kontrolllauf bei verarbeiteten Matrices (7.1). PN-EN ISO 21570:2007 ohne Rückzugsvermerk im PKN (03.10.2026).

2. Kalibrierung

   Punkte und Wiederholungen über den Arbeitsbereich, Kalibranten auf CRM bezogen (7.3).

3. Messung

   GVO- und taxonspezifische Sequenz, jede Prüfportion mindestens doppelt, Kontrollen nach ISO 24276 (7.1).

4. Konsistenz und Auswertung

   ± 33 % in Verdünnungen, −50 %…+100 % zwischen Portionen; Bedingungen der Eignung zur Quantifizierung (7.5, 8).

5. Ergebnis

   Nach Tabelle 1: X ± Unsicherheit % oder qualitatives Ergebnis mit praktischer LOD/LOQ; LOD und LOQ des Verfahrens im Bericht (9, 10).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Arbeit mit DNA und PCR-Reagenzien — Schutz vor Kreuzkontamination
• Reagenzien nach den Sicherheitsdatenblättern des Herstellers

Häufige Fragen