🍎 Aktivität der alkalischen Phosphatase (ALP, EC 3.1.3.1) in roher und wärmebehandelter Milch (Vollmilch, teilentrahmt, entrahmt, aromatisiert) und Milchmischgetränken von Kuh, Schaf und Ziege sowie in rekonstituiertem Milchpulver — kontinuierlicher direkter kinetischer Test: das nicht fluoreszierende Substrat 2′-[2-Benzothiazolyl]-6′-hydroxybenzothiazolphosphat in Diethanolaminpuffer pH 10 wird durch ALP zu einem stark fluoreszierenden Produkt hydrolysiert, Ablesung bei 38 °C über 3 min (erste Minute zum Temperaturausgleich), Filterfluorimeter mit Anregung bei 440 nm und Emission bei 520–560 nm, Kalibrierung mit Fluoroyellow®-Lösungen 0 / 17,24 / 34,48 × 10⁻³ µmol/l; Ergebnis in mU/l bis 7000 mU/l, darüber Verdünnung mit ALP-freier Milch (5 min bei 95 °C erhitzt, < 10 mU/l); PN-EN ISO 11816-1:2024-07

Lebensmittelchemie PN-EN ISO 11816-1

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe von ISO 11816-1:2024 | IDF 155-1:2024 (vierte Ausgabe, 2024-01, englischer Text) — PN-EN ISO 11816-1:2024-07 übernimmt EN ISO 11816-1:2024 und ISO 11816-1:2024 als identisch (PKN-Suche): Vorworte von ISO und IDF, Abschnitte 1–8 und Abschnitt 9 bis 9.1.1 — die Leseprobe endet auf Seite 4. Den Rest der Geräteprüfung (9.1.2–9.1.5), die Kontrolle des Arbeitssubstrats (9.2), Kalibrierung (9.3), Bestimmung (9.4), probenbezogene Kontrollen (9.5, u. a. Test auf störende Substanzen und auf hitzestabile mikrobielle Phosphatase), Berechnung (10), Präzision (11), Prüfbericht (12) und Anhang A (Ringversuch) lesen wir nicht; ihre Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis.

NACH DEM TEXT VON ISO 11816-1:2024. Die Norm wurde von ISO/TC 34 „Lebensmittel“, Unterkomitee SC 5 „Milch und Milcherzeugnisse“, gemeinsam mit dem IDF und in Zusammenarbeit mit CEN/TC 302 (Wiener Vereinbarung) erarbeitet; die Arbeit leistete das IDF/ISO-Aktionsteam P19. Die vierte Ausgabe ersetzt die dritte (ISO 11816-1 | IDF 155-1:2013); wesentliche Änderungen: das eingestellte Gerät FLM200 wurde durch die Version FLM300 ersetzt; die Anweisungen wurden an Oberfläche und Elektronik des FLM300 angepasst — ohne Änderung des Tests oder des Prüfverfahrens; der Heizblock ist nun Teil des Geräts. Anwendungsbereich (1): fluorimetrische Bestimmung der Aktivität der alkalischen Phosphatase (EC 3.1.3.1) in roher und wärmebehandelter Vollmilch, teilentrahmter, entrahmter und aromatisierter Milch; für Milch und Milchmischgetränke von Kuh, Schaf und Ziege; auch für Milchpulver nach Rekonstitution; das Gerät liest Aktivitäten bis 7000 mU/l, eine Probe mit höherer Aktivität wird mit ALP-freier Milch verdünnt, sodass das Ergebnis 7000 mU/l nicht überschreitet. Keine normativen Verweisungen (2). Begriff (3.1): ALP-Aktivität — Aktivität des im Erzeugnis vorhandenen Enzyms, nach dem festgelegten Verfahren bestimmt, ausgedrückt in Milliunits je Liter Probe (mU/l). Prinzip (4): kontinuierlicher fluorimetrischer direkter kinetischer Test; ein nicht fluoreszierender aromatischer Monophosphorsäureester — 2′-[2-Benzothiazolyl]-6′-hydroxybenzothiazolphosphat — wird in Gegenwart von ALP aus der Probe am Phosphatrest hydrolysiert und ergibt ein stark fluoreszierendes Produkt; Messung bei 38 °C über 3 min im Fluorophos®-Gerät (Vorinkubation von Substrat und Probe, dann mehrere kinetische Ablesungen der Reaktionsgeschwindigkeit); Anmerkung: die erste Minute dient dem Temperaturausgleich, gemessen wird vom Beginn der zweiten bis zum Ende der dritten Minute (2 min). Reagenzien (5): Reagenzien 5.1–5.5 und Geräte 6.1–6.4 (außer 6.3.3) bilden das Fluorophos® Test System (Handelsnamen zur Information; gleichwertige Produkte zulässig, wenn sie gleiche Ergebnisse liefern); Fluorophos®-Substrat — Flaschen zu 144 mg (580 g/mol), 2 Jahre bei 2–8 °C in ungeöffneten Flaschen, lichtgeschützt; Diethanolaminpuffer c(DEA) = 2,4 mol/l, pH 10,0, Flaschen zu 240 ml, 2 Jahre bei 2–8 °C; Arbeitssubstrat — Inhalt einer Pufferflasche (240 ml) zu einer Substratflasche (144 mg) gegeben, 3 min durch Umkehren gemischt (etwa 1,0 mmol/l, pH 10), Braunglas, mindestens 30 min bei Raumtemperatur vor Gebrauch; Eignung über den A/D-Test (9.2) — bei Ablesung über 1200 FLU nicht verwenden; haltbar 60 Tage bei 2–8 °C im Dunkeln oder 8 h bei 38 °C; 240 ml reichen für etwa 115 Bestimmungen; Kalibrierlösungen Fluoroyellow® (2′-(2-Benzothiazolyl)-6′-hydroxybenzothiazol) in Puffer — A 0, B 17,24 × 10⁻³ und C 34,48 × 10⁻³ µmol/l, 18 Monate bei 2–8 °C; tägliche Gerätekontrolllösung 34,48 × 10⁻³ µmol/l. Geräte (6): Filterfluorimeter mit thermostatisiertem Küvettenhalter (38 ± 1) °C und Rechtwinkeloptik, Anregung 440 nm, Emission 520–560 nm; Einwegküvetten aus nicht fluoreszierendem Glas 12 × 75 mm; Dispenser 2,0 ml; Verdrängungs- oder Luftpolsterpipette 0,075 ml — die Pipettiertechnik ist für die Genauigkeit entscheidend; Pipetten 2 und 3 ml; Inkubationsblock (38 ± 1) °C; Paraffinfolie; Vortexmischer; Wasserbad (63 ± 1) °C und (95 ± 1) °C; Messkolben 100 ml. Probenahme (7) ist nicht Teil des Verfahrens — empfohlen ISO 707 | IDF 50. ALP-freie Milch (8.1): eine Portion Milch der geprüften Art wird ohne Berührung von Rand und Wänden in ein Röhrchen gegeben, im Wasserbad bei 95 °C erhitzt — 5 min ab Erreichen von 95 °C in der Mitte der Portion (Thermometer oder Thermistor) — und rasch abgekühlt; die ALP-Aktivität der so behandelten Milch muss unter 10 mU/l liegen. Prüfprobe (8.2): alle Proben sorgfältig mischen; Vorwärmen meist nicht nötig; pasteurisierte Proben wie geliefert; Proben hoher Aktivität mit ALP-freier Milch in den Messbereich (< 7000 mU/l) verdünnen. Geräteprüfung (9.1.1): Drift, Streulicht und Stabilität vor der Analyse; täglicher A/D-Test, täglicher Test mit der Kontrolllösung (elektronische und optische Drift) und empfohlene externe positive, negative und normale Kontrollen.

STATUS (Stand 03.10.2026). In der PKN-Suche (Suchbegriff „PN-EN ISO 11816-1“, 03.10.2026) erscheint PN-EN ISO 11816-1:2024-07 in polnischer und englischer Fassung, „Übernimmt: EN ISO 11816-1:2024 [IDT], ISO 11816-1:2024 [IDT]“, ohne Zurückziehungsvermerk; frühere Ausgaben (2014-02, 2007, 2006, 2002) sind „Zurückgezogen und ersetzt“. Datensatz von PN-EN ISO 11816-1:2014-02 (polnische Fassung; gelesen 03.10.2026): Veröffentlichung 09-12-2015, Zurückziehung 01-07-2024, übernimmt EN ISO 11816-1:2013 [IDT] und ISO 11816-1:2013 [IDT], KT 35 „Milch und Milcherzeugnisse“, ersetzt durch PN-EN ISO 11816-1:2024-07 (englische Fassung). Was die Zurückziehung für das Ergebnis ändert: laut Vorwort von ISO 11816-1:2024 betreffen die Änderungen das Gerät (FLM300 statt FLM200, integrierter Heizblock) und die Bedienungsanweisungen, ohne Änderung des Tests oder Prüfverfahrens.

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Stand bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 11816-1 steht in 2 Datensätzen bei 2 Laboratorien: AB 485 und AB 704. In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 704 Ausgabe Nr. 23 vom 20.04.2026, AB 485 Ausgabe Nr. 27 vom 19.08.2026) steht die Nummer bei denselben 2 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Duplikate; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP geladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Schreibweisen: „PN-EN ISO 11816-1:2024-07“ (AB 485) und „PN-EN ISO 11816-1:2014-02“ (AB 704 — am 01.07.2024 zurückgezogene Ausgabe). Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-EN ISO 11816-1“) zeigt beide Laboratorien — geprüft per Abfrage des Reiters auf dem Produktionsserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (PCA-Positionen). AB 485: Milch — Aktivität der alkalischen Phosphatase (10–7000) mU/l, fluorimetrisches Verfahren. AB 704: Milch und Milchmischgetränke — Aktivität der alkalischen Phosphatase (10–800) mU/l, fluorimetrisches Verfahren.

WO LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ENTSTEHT. Messbereich: das Gerät liest bis 7000 mU/l — höhere Aktivität wird mit ALP-freier Milch verdünnt, nicht mit Wasser (1, 8.2.3); AB 704 hat einen Bereich bis 800 mU/l, darüber liegende Proben erfordern Verdünnung oder fallen aus seiner Position heraus. Milch für Verdünnungen: gleicher Art wie die Probe, 5 min bei 95 °C ab Erreichen dieser Temperatur in der Mitte der Portion erhitzt, ohne dass Milch Rand und Wände des Gefäßes berührt, und geprüft (< 10 mU/l) (8.1). Arbeitssubstrat: mindestens 30 min vor Gebrauch, A/D-Test — Ablehnung über 1200 FLU; haltbar 60 Tage bei 2–8 °C oder nur 8 h bei 38 °C (5.3). Pipettieren: 0,075 ml Probe — die Technik ist für die Genauigkeit entscheidend (6.3.2). Gerät: täglicher A/D-Test und Kontrolllösung 34,48 × 10⁻³ µmol/l vor der Analyse (9.1.1). Ausgabe: AB 704 verweist auf die Ausgabe 2014, zurückgezogen am 01.07.2024 — laut Vorwort der neuen Ausgabe hat sich das Verfahren nicht geändert, wohl aber das Gerät (Vorwort). Andere Tierarten und Erzeugnisse: das Verfahren gilt für Milch von Kuh, Schaf und Ziege und darauf basierende Getränke; Milchpulver nur nach Rekonstitution (1).

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Das Kalibrier- und Bestimmungsverfahren (9.2–9.5), Berechnungsformeln (10), Präzisionsdaten (11) und die Ergebnisse des Ringversuchs (Anhang A) geben wir nicht wieder — sie liegen außerhalb der Leseprobe. Kriterien zur Beurteilung der Pasteurisierung anhand der ALP-Aktivität geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

Die alkalische Phosphatase aus der Probe spaltet die Phosphatgruppe von einem nicht fluoreszierenden Substrat (2′-[2-Benzothiazolyl]-6′-hydroxybenzothiazolphosphat) ab, wobei ein stark fluoreszierendes Produkt entsteht. Die Probe mit Substrat in Puffer pH 10 wird in ein auf 38 °C thermostatisiertes Fluorimeter gebracht; nach einer Minute Temperaturausgleich misst das Gerät zwei Minuten lang die Zunahme der Fluoreszenz (Anregung 440 nm, Emission 520–560 nm), und die Reaktionsgeschwindigkeit wird anhand einer Kalibrierung mit Lösungen des fluoreszierenden Produkts in Aktivität in mU/l umgerechnet.

Anwendungen

• Rohe und wärmebehandelte Milch — Vollmilch, teilentrahmt, entrahmt und aromatisiert (1)
• Milch und Milchmischgetränke von Kuh, Schaf und Ziege; Milchpulver nach Rekonstitution (1)
• Milch sowie Milch und Milchmischgetränke — Aktivität der alkalischen Phosphatase — 2 Datensätze von Akkreditierungsumfängen von 2 Laboratorien in PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 11816-1:2024-07

Titel (PL)

Mleko i przetwory mleczne — Oznaczanie aktywności fosfatazy alkalicznej — Część 1: Metoda fluorymetryczna dla mleka i napojów na bazie mleka

Title (EN)

Milk and milk products — Determination of alkaline phosphatase activity — Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Herstellung des Arbeitssubstrats

   Puffer + Substrat, 3 min mischen, ≥ 30 min bei Raumtemperatur, A/D-Test ≤ 1200 FLU (5.3). PN-EN ISO 11816-1:2024-07 — ohne Zurückziehungsvermerk (PKN, 03.10.2026).

2. Geräteprüfung

   Täglicher A/D-Test, Kontrolllösung, empfohlene externe Kontrollen (9.1.1).

3. ALP-freie Milch

   5 min bei 95 °C, rasch abkühlen, Prüfung < 10 mU/l (8.1).

4. Vorbereitung der Prüfprobe

   Mischen; pasteurisiert — wie geliefert; hohe Aktivität — Verdünnung mit ALP-freier Milch (8.2).

5. Messung

   38 °C, 3 min, kinetische Ablesung in mU/l (4); Einzelheiten von Kalibrierung und Bestimmung — außerhalb der Leseprobe (9.3, 9.4).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Substrat, Puffer und Kalibrierlösungen werden bei 2–8 °C gelagert und vor Licht geschützt; Arbeitssubstrat in Braunglas (5.1–5.4)

Häufige Fragen