🦠 Screening-Nachweis der Staphylokokken-Enterotoxine SEA, SEB, SEC, SED und SEE in Lebensmitteln — 25 g Probe mit etwa 40 ml Wasser von 38 °C werden homogenisiert, 30–60 min geschüttelt, auf pH 3,5–4,0 angesäuert, zentrifugiert (≥ 3130 g, 15 min), auf pH 7,4–7,6 neutralisiert, der Extrakt durch Dialyse in PEG-Lösung auf 5,0–5,5 g eingeengt und die Toxine mit einem handelsüblichen Immunoenzym-Kit (z. B. ELFA, ELISA) nachgewiesen, der die Kriterien erfüllt: Sensitivität und Spezifität über 90 %, LOD50 unter 0,06 ng/g; Einengung für Milch und Milcherzeugnisse verpflichtend, PN-EN ISO 19020

Mikrobiologie PN-EN ISO 19020

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe der ISO 19020:2017 (englischer Text): Titelblatt, Inhaltsverzeichnis, Vorwort, Einleitung, Abschnitte 1–8 und der Anfang von Abschnitt 9 (Qualitätskontrolle) — die Leseprobe endet auf Seite 6. Abschnitt 8.7 „Nachweis“ ist in der Leseprobe abgeschnitten (es bleiben zwei Sätze zur Auswahl des Kits und zum Vorgehen nach Herstelleranleitung), und in Abschnitt 2 fehlt ein Teil des ersten Eintrags (ISO 3696, Wasser für Analysen, bekannt aus 5.1). Die Abschnitte 10–13 (Angabe der Ergebnisse, Bestätigung, Leistungsmerkmale, Prüfbericht) und die Anhänge A–C lesen wir nicht; die Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis.

NACH DEM TEXT DER ISO 19020:2017. Das Dokument erarbeitete CEN/TC 275 „Lebensmittelanalytik — Horizontale Verfahren“ in Zusammenarbeit mit ISO/TC 34 „Lebensmittel“, Unterkomitee SC 9 „Mikrobiologie“ (Wiener Vereinbarung). Inhalt: 8 Durchführung (8.1 Prüfportion, 8.2 Lagerung der Probe, 8.3 Extraktion, 8.4 Einengung des Extrakts — für Milch und Milcherzeugnisse verpflichtend, 8.5 Rückgewinnung des eingeengten Extrakts, 8.6 Lagerung vor dem Nachweis, 8.7 Nachweis, 8.8 Leistungskriterien), 9 Qualitätskontrolle, 10 Angabe der Ergebnisse, 11 Bestätigung, 12 Leistungsmerkmale des Verfahrens, 13 Prüfbericht, Anhänge A und B (informativ) — Ergebnisse der Ringversuche 2013 und 2014, Anhang C (informativ) „Hinweis zu Störungen“. Einleitung: Staphylokokken-Enterotoxine (SE) sind Proteine, die im Lebensmittel von bestimmten Stämmen koagulasepositiver Staphylokokken, hauptsächlich Staphylococcus aureus, gebildet werden; sie sind hitze- und säurestabil und verursachen Übelkeit, Erbrechen, Bauchschmerzen und Durchfall; wegen ihrer Stabilität können sie vorhanden sein, auch wenn Staphylokokken nicht nachweisbar sind; sie bilden eine Familie von über 20 Proteinen mit 19–30 kDa, beständig gegen Hitzebehandlung, Gefrieren, pH-Änderungen und Proteolyse; Nanogrammmengen können eine Vergiftung auslösen; die Europäische Union hat mikrobiologische Kriterien festgelegt, darunter die Zählung koagulasepositiver Staphylokokken und den Nachweis von SE. LC-MS/MS-Verfahren sind in Entwicklung, daher wurden Enzymimmunoassays (EIA) mit handelsüblichen Kits als Ausgangspunkt der Normung gewählt; die Leistungskriterien der Kits wurden an fünf Lebensmittelmatrices bewertet; der zulässige LOD50 wurde aus einer nach der US-EPA-Methodik aus Ausbruchsdaten ermittelten Benchmark-Dosis (BMD) abgeleitet, einschließlich Daten des EU-Referenzlaboratoriums für koagulasepositive Staphylokokken. Anwendungsbereich (1): Screeningverfahren zum Nachweis der Enterotoxine SEA, SEB, SEC, SED und SEE in Lebensmitteln in zwei Schritten: Extraktion mit Einengung auf Dialysebasis und immunenzymatischer Nachweis mit einem handelsüblichen Kit; es gilt für Erzeugnisse zum menschlichen Verzehr; andere Enterotoxine (SEG, SEH, SEI, SER, SES, SET) verursachen ebenfalls Erkrankungen, doch mangels Kits umfasst die Norm nur SEA–SEE und kann nach Validierung auf andere angewendet werden. Verweisungen (2): ISO 3696 (Wasser für Analysen), ISO 7218 (allgemeine Anforderungen an mikrobiologische Untersuchungen). Begriffe (3): SEA–SEE — Exoproteine enterotoxigener Stämme mit 19–30 kDa; Spezifität (SP) — Zahl negativer Ergebnisse geteilt durch die Zahl geprüfter Blindproben; Sensitivität (SE) — Zahl positiver Ergebnisse geteilt durch die Zahl der auf einem Kontaminationsniveau geprüften Proben; LOD50 — Konzentration (ng SE/g), bei der die Nachweiswahrscheinlichkeit 50 % beträgt; BMD — Dosis eines Gefahrstoffs, die wahrscheinlich bei einem bestimmten Anteil der Exponierten Symptome auslöst. Reagenzien (5): Wasser nach ISO 3696; Salzsäure und Natriumhydroxid (z. B. 5N, 1N); PBS pH 7,3 ± 0,2 (NaCl/Na2HPO4 145/10 mM); PEG-Lösung mit Molmasse 20 000 g/mol (30 g Pulver mit 70 ml Wasser); Elektrodenreinigungslösung (z. B. Ethanol 70 %); Immunoenzym-Kit für SE, der die Kriterien aus 8.8 erfüllt. Geräte (6): mikrobiologische Ausrüstung nach ISO 7218; Mixer; Waage; Homogenisator — ein Rotationshomogenisator wird dringend empfohlen, beim Stomacher nur Beutel ohne Filter; Schüttler; pH-Meter; Zentrifuge ≥ 3130 g, möglichst gekühlt; Dialysemembran mit Ausschlussgrenze 6000–8000 Da mit Verschlüssen; Filtermaterial; flache Schale; Kühlschrank (3 ± 2) °C oder (5 ± 3) °C und Gefrierschrank ≤ −18 °C; Gefäße aus Glas oder Polypropylen zur Vermeidung der Toxinadsorption; Wasserbad (38 ± 2) °C. Probenahme (7): nicht Teil des Verfahrens. Prüfportion (8.1): bei Käse mit Rinde etwa 10 % Rinde und 90 % Kern; Toxine können ungleichmäßig verteilt sein, daher wird die ganze Probe oder ein repräsentativer Teil homogenisiert und 25 g entnommen; bei Verdacht auf einen Lebensmittelvergiftungsausbruch kann die Portion kleiner sein, und das Verhältnis Prüfportion zu eingeengtem Extrakt soll etwa 5 betragen (25 g zu 5,0–5,5 g Extrakt, max. 5,8 g bei klebrigen Extrakten). Lagerung (8.2): empfohlen bei (3 ± 2) °C oder (5 ± 3) °C; ohne Analyse innerhalb von 24 h — einfrieren, vollständig im Kühlschrank auftauen, wiederholtes Einfrieren vermeiden. Extraktion (8.3): zu 25 g etwa 40 ml Wasser von 38 °C (flüssige Erzeugnisse ohne Wasser), Homogenisieren (besonders wichtig bei fettreichen Erzeugnissen); Schütteln 30–60 min bei 18–27 °C; Ansäuern mit HCl auf pH 3,5–4,0; Zentrifugieren ≥ 3130 g 15 min bei etwa 4 °C oder bei Raumtemperatur (bei fetten Proben Kühlung empfohlen); nach dem Zentrifugieren muss der pH 3,0–4,5 betragen — über 4,5 erneut ansäuern, unter 3,0 kann die SE-Struktur geschädigt sein und eine neue Portion ist zu nehmen; Neutralisieren mit NaOH auf pH 7,4–7,6 — über 9,0 neue Portion; erneutes Zentrifugieren und Rückgewinnung der gesamten wässrigen Phase. Variante ohne Dialyse (8.3.10): nur in besonderen Fällen, z. B. bei Verdacht auf Lebensmittelvergiftung, und nicht für Milch und Milcherzeugnisse — bei negativem Ergebnis wird der Rest der Phase am selben Tag eingeengt und der Nachweis wiederholt. Einengung (8.4): Membran rehydratisiert und gespült, über einen Trichter mit Filtermaterial mit der gesamten neutralisierten Phase gefüllt, in einer flachen Schale mit PEG-Lösung über Nacht im Kühlschrank gelegt; bleiben mehr als 5 ml in der Membran — länger (bis 3 Tage) oder mit zusätzlichem PEG-Pulver. Rückgewinnung (8.5): die Membran wird vom PEG freigespült, der Extrakt mit PBS (Milch und Milcherzeugnisse) oder Wasser (andere Matrices) unter Reiben der Innenflächen zurückgewonnen, bis zu einer Masse von 5,0–5,5 g (5,8 g) je 25 g Portion. Lagerung des Extrakts (8.6): bis 48 h im Kühlschrank, länger bei ≤ −18 °C. Nachweis (8.7, abgeschnitten): ein Kit, der die Kriterien für das gesamte Verfahren erfüllt, nach Herstelleranleitung. Kriterien (8.8): Spezifität und Sensitivität über 90 %, LOD50 unter 0,06 ng SE/g — aus der BMD für SEA von 6,1 ng und einer Aufnahme von 100 g Lebensmittel; mangels Daten für andere Typen wurde dieser Wert auch für SEB–SEE übernommen; Werte für verschiedene Kits und Matrices mit und ohne Dialyse enthält Abschnitt 12, und die Laboratorien sollen danach den Kit auswählen; Ringversuchsergebnisse gelten möglicherweise nicht für andere Lebensmittelarten als die in den Anhängen A und B. Qualitätskontrolle (9, Anfang): die Prüfung des gesamten Verfahrens mit Referenzmaterialien wird empfohlen.

STATUS (Stand 03.10.2026). In der PKN-Suche (Suchbegriff „19020“, 03.10.2026) ist das einzige Ergebnis PN-EN ISO 19020:2017-08 (englische Fassung, „Wprowadza: EN ISO 19020:2017 [IDT], ISO 19020:2017 [IDT]“), ohne Rückzugsvermerk. Karte: Veröffentlichungsdatum 23.08.2017, 36 Seiten, KT 3 Mikrobiologii Łańcucha Żywnościowego, ICS 07.100.30, ohne Rückzugsvermerk. Im iTeh-Katalog (gelesen 03.10.2026) hat ISO 19020:2017 den Status „Published“, Stufe 90.93 (Internationale Norm bestätigt).

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Daten bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 19020 steht in 4 Datensätzen bei 4 Laboratorien: AB 377, AB 485, AB 486, AB 598. In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 377 Ausgabe Nr. 29 vom 12.12.2025, AB 486 Ausgabe Nr. 29 vom 23.07.2026, AB 598 Ausgabe Nr. 36 vom 30.07.2026, AB 485 Ausgabe Nr. 27 vom 19.08.2026) steht die Nummer in 4 Zeilen bei denselben 4 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Wiederholungen; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP heruntergeladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Form „PN-EN ISO 19020:2017-08“ (AB 485), „PN-EN ISO 19020: 2017-08 z wył. pkt 11“ (AB 377), „PN-EN ISO 19020 z wyłączeniem pkt. 11“ mit der Anleitung des Kits Vidas Staph Enterotoxin II (SET2) (AB 598) und „PN-EN ISO 19020“ (AB 486). Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-EN ISO 19020“) zeigt alle 4 Laboratorien — geprüft durch eine Abfrage des Reiters auf dem Produktivserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (Positionen in PCA). Gegenstand: Rohmilch und Rohmilcherzeugnisse, wärmebehandelte Milch und Milcherzeugnisse, rohes Fleisch und Fleisch- sowie Geflügelerzeugnisse zum Garen, verzehrfertige und aufwärmfertige Fleischerzeugnisse und weitere Kategorien (AB 377); Fleisch und Fleischerzeugnisse, Milch und Milcherzeugnisse, Fisch und Fischerzeugnisse, Eier und Eiererzeugnisse, Fertiggerichte (AB 485); Lebensmittel (AB 486, AB 598). Merkmal: Vorhandensein von Staphylokokken-Enterotoxinen. Technik: Enzymgekoppelter Fluoreszenzassay (ELFA) mit Gerät mini VIDAS (AB 377), ELFA (AB 598), immunenzymatisch mit Gerät mini VIDAS (AB 486), ELFA oder ELISA (AB 485).

WO LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ENTSTEHT. Beim negativen Ergebnis: die Norm weist nur SEA–SEE nach, andere Enterotoxine (SEG, SEH, SEI, SER, SES, SET) verursachen aber ebenfalls Erkrankungen (1) — ein negatives Ergebnis schließt Toxine außerhalb dieser fünf nicht aus. Beim Kit: über das Ergebnis entscheidet der Kit, der für das gesamte Verfahren einschließlich Extraktion LOD50 < 0,06 ng/g sowie Sensitivität und Spezifität > 90 % erfüllen muss (8.8); die Daten in Abschnitt 12 betreffen die Matrices der Ringversuche. Beim pH: unter 3,0 nach dem Ansäuern oder über 9,0 nach dem Neutralisieren kann die Toxinstruktur geschädigt sein, und die Portion ist zu wiederholen (8.3.6, 8.3.7). Bei Milch: die Einengung durch Dialyse ist verpflichtend, die Variante ohne Dialyse unzulässig (8.3.10, 8.4). Bei den Gefäßen: Glas oder Polypropylen, weil Toxine an anderen Materialien adsorbieren (6.12). Bei der Probe: wiederholtes Einfrieren und Auftauen verursacht Toxinverluste (8.2). Beim Ausschluss: AB 377 und AB 598 schließen Abschnitt 11 aus, der laut Inhaltsverzeichnis die Bestätigung betrifft — den Inhalt dieses Abschnitts haben wir nicht gelesen.

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Angabe der Ergebnisse, Bestätigungsverfahren, Leistungsdaten für einzelne Kits und Matrices, Ringversuchsergebnisse und Hinweise zu Störungen (Abschnitte 10–13, Anhänge A–C) geben wir nicht wieder — sie liegen außerhalb der Leseprobe. Mikrobiologische Kriterien aus Rechtsvorschriften geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

Aus 25 g Probe (mit etwa 40 ml Wasser von 38 °C) werden die Toxine durch Schütteln extrahiert, auf pH 3,5–4,0 angesäuert, zentrifugiert, auf pH 7,4–7,6 neutralisiert und erneut zentrifugiert. Die wässrige Phase wird durch Dialyse in einer Membran 6000–8000 Da in PEG-20 000-Lösung eingeengt und der Extrakt auf 5,0–5,5 g zurückgewonnen. Die Enterotoxine SEA–SEE werden mit einem handelsüblichen Immunoenzym-Kit nachgewiesen, der für das gesamte Verfahren Sensitivität und Spezifität > 90 % sowie LOD50 < 0,06 ng/g erfüllt.

Anwendungen

• Screening-Nachweis der Staphylokokken-Enterotoxine SEA, SEB, SEC, SED und SEE in Erzeugnissen zum menschlichen Verzehr (1)
• Verdacht auf Lebensmittelvergiftung — kleinere Portion und Variante ohne Dialyse, aber nicht für Milch und Milcherzeugnisse (8.1, 8.3.10)
• Milch und Milcherzeugnisse, Fleisch, Geflügel, Fisch, Eier, Fertiggerichte, Lebensmittel allgemein — Positionen in den Akkreditierungsumfängen von 4 Laboratorien in PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 19020:2017-08

Titel (PL)

Mikrobiologia łańcucha żywnościowego — Horyzontalna metoda immunoenzymatycznego wykrywania enterotoksyn gronkowcowych w żywności

Title (EN)

Microbiology of the food chain — Horizontal method for the immunoenzymatic detection of staphylococcal enterotoxins in foodstuffs

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Prüfportion

   25 g homogenisierte Probe (Käse: 10 % Rinde, 90 % Kern); Lagerung im Kühlschrank, kein wiederholtes Einfrieren (8.1, 8.2). PN-EN ISO 19020:2017-08 ohne Rückzugsvermerk im PKN (03.10.2026).

2. Extraktion

   Etwa 40 ml Wasser 38 °C, Homogenisieren, Schütteln 30–60 min (8.3.1–8.3.3).

3. pH-Reinigung

   Ansäuern auf pH 3,5–4,0, Zentrifugieren, pH-Kontrolle 3,0–4,5, Neutralisieren auf 7,4–7,6, Zentrifugieren (8.3.4–8.3.9).

4. Einengung

   Dialyse in PEG über Nacht im Kühlschrank; Rückgewinnung des Extrakts mit PBS oder Wasser auf 5,0–5,5 g (8.4, 8.5).

5. Nachweis

   Immunoenzym-Kit, der die Kriterien aus 8.8 erfüllt, nach Herstelleranleitung (8.7, 8.8).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Staphylokokken-Enterotoxine — Arbeit im mikrobiologischen Laboratorium nach ISO 7218, Aerosole vermeiden
• Salzsäure und Natriumhydroxid 5N — ätzend, Augen- und Handschutz

Häufige Fragen