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🦠 E. coli und coliforme Bakterien im Wasser

Mikrobiologie PN-EN ISO 9308-1

Kurz gefasst

Quantitative Bestimmung von E. coli und coliformen Bakterien im Wasser mittels Membranfiltration auf chromogenem CCA-Medium. Die Prüfung erfolgt nach PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska); Linearer Bereich: 10–100 Kolonien auf dem Filter (optimal). Das Verfahren umfasst 10 Schritte (insgesamt rund 19 Std. 19 Min.–1 Tage 1 Std. 19 Min.); eingesetzt wird sie unter anderem für: Kontrolle der Trinkwasserqualität (Gesetzblatt 2017 — E. coli: 0 KBE/100 mL), Überwachung des Wasserversorgungsnetzes — Probenahmestellen bei Verbrauchern, Untersuchung von Grundwasser und Wasserentnahmestellen.

Auf einen Blick

  • Norm: PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska)
  • Kategorie: Mikrobiologie
  • Verfahrensschritte: 10
  • Gesamtdauer der Schritte: 19 Std. 19 Min.–1 Tage 1 Std. 19 Min.
  • KENNDATEN DER ÄNDERUNG A1 (Stand der PKN-Karten am 23.09.2026): PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04 — ENGLISCHE Fassung, Veröffentlichung 04-04-2017, 12 Seiten, KT 120 (Wasserbeschaffenheit — Mikrobiologische und biologische Untersuchungen), „Übernimmt: EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT], ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]", ICS 07.100.20. WORAUF SICH DIE ÄNDERUNG BEZIEHT — NICHT ANGEGEBEN: Den Inhalt der Änderungen „A" stellt PKN nicht kostenlos bereit (anders als bei den nationalen Berichtigungen „Ap"), und der Text lag uns nicht vor
  • Wie schwer diese Änderung gegenüber der Norm wiegt: die Stammnorm PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (POLNISCHE Fassung, Veröffentlichung 14-10-2015) hat 18 Seiten, die Änderung A1 allein dagegen — 12 Seiten, also zwei Drittel des Seitenumfangs der Norm. Eine Änderung von solchem Umfang ist kein Erratum
  • AUSMASS UND SCHREIBWEISE DER ÄNDERUNG IN DEN UMFÄNGEN (Messung 23.09.2026): VIER DEFINITIONEN, VIER ZAHLEN — und keine der ersten beiden ist sauber (Messung wiederholt am 23.09.2026). Abgleich über den ANFANG des Wertes „PN-EN ISO 9308-1", also so, wie der Reiter „Laboratorien" sucht: 458 Positionen bei 206 Laboratorien. Allein der Kern „9308-1", an beliebiger Stelle: 481 / 210. Allein die Zeichenfolge „9308", also zusammen mit den Teilen 2 und 3: 726 / 225. DIE RICHTIGE ZAHL IST DIE VIERTE: alle Einträge MIT DEM GLIED EN, mit beliebigem Trennzeichen im Glied PN, aber OHNE die Generation von 1999 — 465 POSITIONEN BEI 207 LABORATORIEN. Die Differenz von 23 Positionen zwischen der ersten und der zweiten zerfällt nämlich in drei Klassen: 13 Positionen sind DIE VORHERIGE GENERATION DER NORM („PN-ISO 9308-1:1999" 11-mal, „PN ISO 9308-1:1999" 2) — ein eigenes Dokument aus der Zeit vor der Übernahme der EN-Fassung, das der Kern fälschlich mitzählt; 7 Positionen (9 Einträge) sind ABWEICHENDE SCHREIBWEISEN DERSELBEN NORM, die der Präfixabgleich verliert: „PN–EN" mit Halbgeviertstrich (3), „PN -EN" mit Leerzeichen vor dem Bindestrich (4), „PN EN" ohne Bindestrich (2); 3 Positionen sind Einträge „ISO 9308-1" ohne das Glied PN — eine direkte Berufung auf das internationale Dokument, die die vierte Definition bewusst nicht erfasst. Die richtige Zahl ist also um sieben größer als die aus dem Reiter und um sechzehn kleiner als die des Kerns. Alle vier Zahlen wurden auf die Einheit genau an einer zweiten, unabhängigen Kopie der Datenbank der Umfänge bestätigt. Die Norm bleibt eine der am häufigsten zitierten im gesamten Datenbestand. 200 Laboratorien geben das Glied A1 an; AUSSCHLIESSLICH ohne das Glied A1 wird sie von 23 Positionen bei 6 Laboratorien zitiert

Übersicht

Escherichia coli ist der wichtigste Indikator für fäkale Kontamination von Wasser. Das Vorhandensein von E. coli im Trinkwasser weist auf eine Kontamination mit menschlichen oder tierischen Fäkalien hin sowie auf ein potenzielles Risiko durch pathogene Bakterien, Viren und intestinale Protozoen. Coliforme Bakterien (Coliforme) umfassen eine breitere Gruppe — neben E. coli auch Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter — und dienen als allgemeiner Indikator für die Hygiene des Aufbereitungsprozesses.

Die Methode nach PN-EN ISO 9308-1 basiert auf der Membranfiltration einer Wasserprobe durch einen 0,45-µm-Filter, der die Bakterien zurückhält. Der Filter wird auf selektives chromogenes CCA-Medium (Chromogenic Coliform Agar) aufgelegt, das enzymatische Substrate enthält: Salmon-GAL (6-Chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid) für die β-Galactosidase der Coliformen und X-Glucuronid (5-Brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-glucuronid) für die β-Glucuronidase von E. coli.

Nach Inkubation bei 36±2°C für 18–24 Stunden färben sich Coliforme-Kolonien rosa bis rot (β-Galactosidase-Aktivität) und E.-coli-Kolonien dunkelblau-violett (Aktivität beider Enzyme). Das Ergebnis wird direkt abgelesen — ohne Notwendigkeit einer biochemischen Bestätigung, was die Analyse erheblich beschleunigt.

Die Methode ist für Wässer mit geringer Begleitflora bestimmt — Trinkwasser, aufbereitetes Wasser, Grundwasser. Für Oberflächengewässer und Abwasser (hohe Begleitflora) wird PN-EN ISO 9308-2 verwendet (MPN-Methode mit Colilert-Medium).

ACHTUNG BEI DER SCHREIBWEISE DER ÄNDERUNG A1 (23.09.2026). Früher stand hier „PN-EN ISO 9308-1:2014+A1:2017", also mit einem Plus in der Nummer — ein Plus in der Nummer bezeichnet im PKN-Katalog jedoch eine konsolidierte Ausgabe (eine ganze Norm, die die geänderte EN übernimmt), während es hier um ein gesondertes, der Norm beigefügtes Änderungsblatt geht: PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04. Die Grundnorm: polnische Fassung, veröffentlicht am 14-10-2015, 18 Seiten, KT 120 für Wasserqualität — Mikrobiologische und Biologische Untersuchungen (PKN-Karte, gelesen am 23.09.2026).

Prinzip der Methode

Die Wasserprobe wird durch eine 0,45-µm-Membran (47 mm Durchmesser) filtriert, die Bakterien zurückhält. Die Membran wird auf die Oberfläche des chromogenen CCA-Mediums übertragen. Das Medium enthält zwei chromogene Substrate: Salmon-GAL, das von β-Galactosidase (Coliformes-Enzym) unter Bildung eines lachsrosa Produkts gespalten wird, und X-Glucuronid, das von β-Glucuronidase (E.-coli-spezifisches Enzym) unter Bildung eines dunkelblauen Produkts gespalten wird. Die Selektivität des Mediums wird durch Tergitol-7 gewährleistet, das das Wachstum grampositiver Bakterien und der meisten Nicht-Coliformen hemmt.

Anwendungen

Schlüsselparameter

ParameterWert
KENNDATEN DER ÄNDERUNG A1 (Stand der PKN-Karten am 23.09.2026)PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04 — ENGLISCHE Fassung, Veröffentlichung 04-04-2017, 12 Seiten, KT 120 (Wasserbeschaffenheit — Mikrobiologische und biologische Untersuchungen), „Übernimmt: EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT], ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]", ICS 07.100.20. WORAUF SICH DIE ÄNDERUNG BEZIEHT — NICHT ANGEGEBEN: Den Inhalt der Änderungen „A" stellt PKN nicht kostenlos bereit (anders als bei den nationalen Berichtigungen „Ap"), und der Text lag uns nicht vor
Wie schwer diese Änderung gegenüber der Norm wiegtdie Stammnorm PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (POLNISCHE Fassung, Veröffentlichung 14-10-2015) hat 18 Seiten, die Änderung A1 allein dagegen — 12 Seiten, also zwei Drittel des Seitenumfangs der Norm. Eine Änderung von solchem Umfang ist kein Erratum
AUSMASS UND SCHREIBWEISE DER ÄNDERUNG IN DEN UMFÄNGEN (Messung 23.09.2026)VIER DEFINITIONEN, VIER ZAHLEN — und keine der ersten beiden ist sauber (Messung wiederholt am 23.09.2026). Abgleich über den ANFANG des Wertes „PN-EN ISO 9308-1", also so, wie der Reiter „Laboratorien" sucht: 458 Positionen bei 206 Laboratorien. Allein der Kern „9308-1", an beliebiger Stelle: 481 / 210. Allein die Zeichenfolge „9308", also zusammen mit den Teilen 2 und 3: 726 / 225. DIE RICHTIGE ZAHL IST DIE VIERTE: alle Einträge MIT DEM GLIED EN, mit beliebigem Trennzeichen im Glied PN, aber OHNE die Generation von 1999 — 465 POSITIONEN BEI 207 LABORATORIEN. Die Differenz von 23 Positionen zwischen der ersten und der zweiten zerfällt nämlich in drei Klassen: 13 Positionen sind DIE VORHERIGE GENERATION DER NORM („PN-ISO 9308-1:1999" 11-mal, „PN ISO 9308-1:1999" 2) — ein eigenes Dokument aus der Zeit vor der Übernahme der EN-Fassung, das der Kern fälschlich mitzählt; 7 Positionen (9 Einträge) sind ABWEICHENDE SCHREIBWEISEN DERSELBEN NORM, die der Präfixabgleich verliert: „PN–EN" mit Halbgeviertstrich (3), „PN -EN" mit Leerzeichen vor dem Bindestrich (4), „PN EN" ohne Bindestrich (2); 3 Positionen sind Einträge „ISO 9308-1" ohne das Glied PN — eine direkte Berufung auf das internationale Dokument, die die vierte Definition bewusst nicht erfasst. Die richtige Zahl ist also um sieben größer als die aus dem Reiter und um sechzehn kleiner als die des Kerns. Alle vier Zahlen wurden auf die Einheit genau an einer zweiten, unabhängigen Kopie der Datenbank der Umfänge bestätigt. Die Norm bleibt eine der am häufigsten zitierten im gesamten Datenbestand. 200 Laboratorien geben das Glied A1 an; AUSSCHLIESSLICH ohne das Glied A1 wird sie von 23 Positionen bei 6 Laboratorien zitiert
SIEBEN FORMEN DES ANHÄNGENS DES GLIEDS A1„:2014-12+A1", „:2014-12 +A1", „:2014-12+ A1", „:2014-12 + A1", „:2014-12/A1", „:2014-12/ A1", „:2014-12 /A1". Das Glied, das der Präzision dienen soll, wird von allem in dieser Berufung am wenigsten einheitlich geschrieben
Die Sprachfassungen laufen auseinanderdie Stammnorm ist auf POLNISCH verfügbar, die Änderung A1 dagegen ausschließlich auf ENGLISCH — ein Laboratorium, das mit dem polnischen Text der Norm arbeitet, liest die Änderung im Original oder in einer eigenen Übersetzung
ErgebnisKBE/100 mL (koloniebildende Einheiten)
Zulässiger Wert (Trinkwasser)E. coli: 0 KBE/100 mL; Coliforme: 0 KBE/100 mL
Inkubationstemperatur36 ± 2°C
Inkubationszeit18–24 Stunden
Probenvolumen100 mL (Standard) oder 250 mL
Linearer Bereich10–100 Kolonien auf dem Filter (optimal)

Norm

Normnummer
PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska)
Titel (PL)
Jakość wody — Oznaczanie ilościowe Escherichia coli i bakterii grupy coli — Część 1: Metoda filtracji membranowej do wód o małej ilości flory towarzyszącej
Title (EN)
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora

Schritt-für-Schritt-Verfahren

  1. Arbeitsplatzvorbereitung

    Filtrationsanlage sterilisieren (Autoklav 121°C/15 min oder Flamme). CCA-Platten vorbereiten — 30 min vor Gebrauch aus dem Kühlschrank nehmen.

    ⏱ Zeit: 30 min

  2. Chlorneutralisierung

    Bei chlorhaltiger Probe (Leitungswasser) Natriumthiosulfat hinzufügen (1,8 %-Tablette — 0,1 mL pro 100 mL Probe). Vorsichtig mischen.

    ⏱ Zeit: 2 min

  3. Membranfiltration

    Sterilen 0,45-µm-Filter auf den Filtrationstrichter legen. 100 mL Probe einfüllen. Vakuumpumpe einschalten. Nach der Filtration Trichter mit 20 mL sterilem Peptonwasser nachspülen.

    ⏱ Zeit: 5 min

  4. Filter auf Medium übertragen

    Mit steriler Pinzette den Filter auf die CCA-Platte übertragen. Sicherstellen, dass der Filter gleichmäßig aufliegt, ohne Luftblasen darunter.

    ⏱ Zeit: 2 min

  5. Inkubation

    Platten umgedreht (Boden nach oben) im Brutschrank bei 36±2°C für 18–24 Stunden inkubieren. 24 Stunden nicht überschreiten.

    ⏱ Zeit: 18–24 h • 🌡 Temperatur: 36 ± 2°C

  6. Ergebnisablesung — Coliforme

    Rosa bis rote Kolonien zählen (β-Galactosidase-positiv) = coliforme Bakterien. Optimale Anzahl: 10–100 Kolonien auf dem Filter.

    ⏱ Zeit: 10 min

  7. Ergebnisablesung — E. coli

    Dunkelblau bis violette Kolonien zählen (β-Galactosidase- und β-Glucuronidase-positiv) = E. coli. E. coli ist in der Gesamtzahl der Coliformen enthalten.

    ⏱ Zeit: 10 min

  8. Oxidase-Test (Bestätigung)

    Verdächtige Kolonien auf Oxidase-Streifen übertragen. E. coli ist Oxidase-negativ (kein Farbumschlag). Oxidase-positive Kolonien verwerfen.

    ⏱ Zeit: 5 min

  9. Ergebnisberechnung

    Ergebnis = Anzahl bestätigter Kolonien pro 100 mL Probe. Für Trinkwasser gefordertes Ergebnis: 0 KBE/100 mL für sowohl E. coli als auch Coliforme.

  10. Qualitätskontrolle

    Täglich: Negativkontrolle (steriles Wasser), Doppelbestimmung alle 10 Proben, CRM-Kontrollprobe. Wiederfindung 90–110 %.

    ⏱ Zeit: 15 min

Erforderliche Geräte und Apparatur

GerätBeispielRichtpreis
MembranfiltrationsanlageSartorius Combisart, Merck EZ-Fit, Pall MicroFunnel3 000–12 000 PLN
VakuumpumpeKNF Laboport N 810, Sartorius 166123 000–8 000 PLN
Bakteriologischer Brutschrank 36°CBinder BD 56, Memmert IN30, Pol-Eko CLN 325 000–15 000 PLN
Autoklav zur SterilisationTuttnauer ELV 2540, Systec VX-4020 000–45 000 PLN
UV-Lampe / BunsenbrennerUVC-Entkeimungslampe für Kammer, Teclu-Brenner200–1 500 PLN
Laminar-Flow-Werkbank (optional)Esco Airstream, Telstar Bio II Advance15 000–40 000 PLN
Lupe / KolonienzählerStuart SC6+, Interscience Scan 5001 500–25 000 PLN

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

ReagenzCASDetails
Chromogener Coliform-Agar (CCA)—Chromogenes Medium nach ISO 9308-1, enthält Salmon-GAL + X-Glucuronid + Tergitol-7. Hersteller: Merck, Biokar, Oxoid
Membranfilter 0,45 µm—Mischcellulose-Ester (MCE), 47 mm Durchmesser, steril, mit Raster. Merck Millipore, Sartorius, Pall
Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃)7772-98-7Tabletten zur Neutralisierung von Chlor in Proben, 18 mg/L pro 500 mL Probe
Ringerlösung (1/4 Stärke)—Zur Verdünnung von Proben, sterile 9-mL-Röhrchen
Gepuffertes Peptonwasser—Alternative für Verdünnungen, 0,1 % Pepton + 0,85 % NaCl, pH 7,0
Oxidase-Reagenz (Kovacs)2436-85-3Oxidase-Streifen zur Bestätigung von E. coli (Oxidase-negativ). Tetramethyl-p-phenylendiamin

Arbeitsschutz und Sicherheit

Häufige Fragen

Welche Norm beschreibt diese Prüfung?

Die Prüfung erfolgt nach PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (wersja polska) wraz ze ZMIANĄ A1:2017-04 (wersja angielska) — „Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora“.

Wie funktioniert diese Methode?

Die Wasserprobe wird durch eine 0,45-µm-Membran (47 mm Durchmesser) filtriert, die Bakterien zurückhält. Die Membran wird auf die Oberfläche des chromogenen CCA-Mediums übertragen.

Wie groß sind Messbereich und Genauigkeit?

KENNDATEN DER ÄNDERUNG A1 (Stand der PKN-Karten am 23.09.2026): PN-EN ISO 9308-1:2014-12/A1:2017-04 — ENGLISCHE Fassung, Veröffentlichung 04-04-2017, 12 Seiten, KT 120 (Wasserbeschaffenheit — Mikrobiologische und biologische Untersuchungen), „Übernimmt: EN ISO 9308-1:2014/A1:2017 [IDT], ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016 [IDT]", ICS 07.100.20. WORAUF SICH DIE ÄNDERUNG BEZIEHT — NICHT ANGEGEBEN: Den Inhalt der Änderungen „A" stellt PKN nicht kostenlos bereit (anders als bei den nationalen Berichtigungen „Ap"), und der Text lag uns nicht vor; Wie schwer diese Änderung gegenüber der Norm wiegt: die Stammnorm PN-EN ISO 9308-1:2014-12 (POLNISCHE Fassung, Veröffentlichung 14-10-2015) hat 18 Seiten, die Änderung A1 allein dagegen — 12 Seiten, also zwei Drittel des Seitenumfangs der Norm. Eine Änderung von solchem Umfang ist kein Erratum; AUSMASS UND SCHREIBWEISE DER ÄNDERUNG IN DEN UMFÄNGEN (Messung 23.09.2026): VIER DEFINITIONEN, VIER ZAHLEN — und keine der ersten beiden ist sauber (Messung wiederholt am 23.09.2026). Abgleich über den ANFANG des Wertes „PN-EN ISO 9308-1", also so, wie der Reiter „Laboratorien" sucht: 458 Positionen bei 206 Laboratorien. Allein der Kern „9308-1", an beliebiger Stelle: 481 / 210. Allein die Zeichenfolge „9308", also zusammen mit den Teilen 2 und 3: 726 / 225. DIE RICHTIGE ZAHL IST DIE VIERTE: alle Einträge MIT DEM GLIED EN, mit beliebigem Trennzeichen im Glied PN, aber OHNE die Generation von 1999 — 465 POSITIONEN BEI 207 LABORATORIEN. Die Differenz von 23 Positionen zwischen der ersten und der zweiten zerfällt nämlich in drei Klassen: 13 Positionen sind DIE VORHERIGE GENERATION DER NORM („PN-ISO 9308-1:1999" 11-mal, „PN ISO 9308-1:1999" 2) — ein eigenes Dokument aus der Zeit vor der Übernahme der EN-Fassung, das der Kern fälschlich mitzählt; 7 Positionen (9 Einträge) sind ABWEICHENDE SCHREIBWEISEN DERSELBEN NORM, die der Präfixabgleich verliert: „PN–EN" mit Halbgeviertstrich (3), „PN -EN" mit Leerzeichen vor dem Bindestrich (4), „PN EN" ohne Bindestrich (2); 3 Positionen sind Einträge „ISO 9308-1" ohne das Glied PN — eine direkte Berufung auf das internationale Dokument, die die vierte Definition bewusst nicht erfasst. Die richtige Zahl ist also um sieben größer als die aus dem Reiter und um sechzehn kleiner als die des Kerns. Alle vier Zahlen wurden auf die Einheit genau an einer zweiten, unabhängigen Kopie der Datenbank der Umfänge bestätigt. Die Norm bleibt eine der am häufigsten zitierten im gesamten Datenbestand. 200 Laboratorien geben das Glied A1 an; AUSSCHLIESSLICH ohne das Glied A1 wird sie von 23 Positionen bei 6 Laboratorien zitiert; SIEBEN FORMEN DES ANHÄNGENS DES GLIEDS A1: „:2014-12+A1", „:2014-12 +A1", „:2014-12+ A1", „:2014-12 + A1", „:2014-12/A1", „:2014-12/ A1", „:2014-12 /A1". Das Glied, das der Präzision dienen soll, wird von allem in dieser Berufung am wenigsten einheitlich geschrieben.

Wie lange dauert die Prüfung?

Die für die einzelnen Schritte angegebenen Zeiten ergeben zusammen rund 19 Std. 19 Min.–1 Tage 1 Std. 19 Min. Das Verfahren umfasst 10 Schritte.

Welche Geräte werden benötigt?

Membranfiltrationsanlage, Vakuumpumpe, Bakteriologischer Brutschrank 36°C, Autoklav zur Sterilisation, UV-Lampe / Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Werkbank (optional), Lupe / Kolonienzähler. Richtpreis für das Kerngerät (Membranfiltrationsanlage): 3 000–12 000 PLN.

Wo wird diese Prüfung eingesetzt?

Kontrolle der Trinkwasserqualität (Gesetzblatt 2017 — E. coli: 0 KBE/100 mL); Überwachung des Wasserversorgungsnetzes — Probenahmestellen bei Verbrauchern; Untersuchung von Grundwasser und Wasserentnahmestellen; Kontrolle des Wassers nach Aufbereitung und Desinfektion; Untersuchung von Flaschen- und Quellwasser; Überwachung von Wasser in öffentlichen Gebäuden (Krankenhäuser, Schulen); Wasser für Produktionszwecke in der Lebensmittelindustrie; Notfalluntersuchungen — nach Störungen im Wasserversorgungsnetz.

Welche Sicherheitsmaßnahmen gelten?

Wasserproben können Krankheitserreger enthalten — mit Nitrilhandschuhen und Laborkittel arbeiten; Medien mit Kolonien nach Inkubation als infektiöses Material behandeln — vor Entsorgung autoklavieren; Arbeit mit Bunsenbrenner — Verbrennungsgefahr, nicht unbeaufsichtigt lassen; Natriumthiosulfat — geringes Risiko, Augenkontakt vermeiden; UV-Lampe — nicht direkt in die Strahlungsquelle blicken, Gefahr von Augenschäden.

Welches Labor führt diese Prüfung durch?

Die Prüfung führen nach ISO/IEC 17025 akkreditierte Labore durch. Auf LabCoda finden Sie sie über die Normnummer PN-EN ISO 9308-1.

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