🦠 Candida albicans in kosmetischen Mitteln — Nachweis nach Anreicherung in Eugon-LT-100-Bouillon und Isolierung auf Sabouraud-Agar mit Chloramphenicol

Mikrobiologie PN-EN ISO 18416

Übersicht

ISO 18416:2015 gibt allgemeine Leitlinien für den Nachweis und die Identifizierung von Candida albicans an — einem in kosmetischen Mitteln „spezifizierten" Mikroorganismus; die Liste der spezifizierten Mikroorganismen kann sich von Land zu Land unterscheiden. Das Verfahren beruht auf dem Nachweis von C. albicans in einem nichtselektiven flüssigen Nährmedium (Anreicherungsbouillon) und der anschließenden Isolierung auf einem selektiven Agarmedium; je nach dem geforderten Nachweisniveau können andere Verfahren geeignet sein (z. B. Überimpfungen auf nichtselektive Nährmedien und Identifizierung mit Testsätzen). Für nicht mit Wasser mischbare Erzeugnisse kann ISO 18415 geeignet sein; alternative Verfahren (z. B. automatische) werden nach dem Nachweis der Gleichwertigkeit zugelassen. Die Norm empfiehlt eine mikrobiologische Risikoanalyse; Erzeugnisse mit geringem Risiko (ISO 29621) sind u. a. solche mit niedriger Wasseraktivität, hydroalkoholische und solche mit extremem pH-Wert.

In Polen gilt sie als PN-EN ISO 18416:2016-01 mit der Änderung A1:2023-03 (sie ersetzte PN-EN ISO 18416:2009). Sie gehört zu dem Satz der PN-EN-ISO-Normen, die in den Laboratorien für die Untersuchungen der mikrobiologischen Reinheit kosmetischer Mittel angewendet werden (neben 21149, 16212, 21150, 22717, 22718); der Stamm Candida albicans ATCC 10231 ist außerdem einer der Testorganismen in der Prüfung der Wirksamkeit der Konservierung.

Prinzip der Methode

Die erste Stufe ist die Anreicherung in einer nichtselektiven Bouillon, die die Zahl der Mikroorganismen erhöht, ohne das Risiko einer Hemmung durch die selektiven Bestandteile selektiv-differenzierender Nährmedien; die zweite Stufe (Isolierung) wird auf einem selektiven Nährmedium geführt, wonach Identifizierungstests ausgeführt werden. Eine etwaige Hemmung des Wachstums der Mikroorganismen durch die Probe muss neutralisiert und die Neutralisation der antimikrobiellen Eigenschaften des Erzeugnisses überprüft und nachgewiesen werden (Abschnitt 11 der Norm). Die Probe besteht aus mindestens 1 g oder 1 ml des Erzeugnisses für die Erstverdünnung. Nährmedien nach der Norm: Trypton-Natriumchlorid-Lösung als Verdünnungsmittel der Hefesuspension, Sabouraud-Glucose-Agar (SDA) für den Eignungstest (andere Agarmedien sind zulässig), Eugon-LT-100-Bouillon für die Anreicherung (andere Bouillons sind zulässig), Sabouraud-Glucose-Agar mit Chloramphenicol für die Isolierung von C. albicans (nach der Sterilisation 15 min bei 121 °C pH 5,6 ± 0,2; andere selektive Agarmedien sind zulässig) sowie Maismehl-Agar mit 1 % Polysorbat 80 für die Identifizierung.

Anwendungen

• Kontrolle der mikrobiologischen Reinheit kosmetischer Mittel — Nachweis von C. albicans als spezifiziertem Mikroorganismus
• Erzeugnisse auf Wasserbasis mit hohem mikrobiologischem Risiko (Cremes, Lotionen, Gele) — Chargenfreigabe
• Untersuchungen von Rohstoffen und Erzeugnissen im Verlauf der Arbeiten an der Konservierung
• Auftrags- und Werkslaboratorien der Kosmetikbranche (Satz PN-EN ISO 21149/16212/21150/22717/22718/18416)

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 18416:2016-01 + A1:2023-03 (ISO 18416:2015 + Amd 1:2022)

Titel (PL)

Kosmetyki — Mikrobiologia — Wykrywanie obecności Candida albicans

Title (EN)

Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Risikoanalyse und Probe

   Lege fest, ob das Erzeugnis der Untersuchung unterliegt (ISO 29621). Entnimm mindestens 1 g oder 1 ml des Erzeugnisses und stelle die Erstverdünnung in der Anreicherungsbouillon her.

2. Eignungstest

   Weise die Neutralisation der antimikrobiellen Eigenschaften des Erzeugnisses nach (Abschnitt 11) unter Verwendung einer Suspension des Referenzstamms in Trypton-NaCl-Lösung und von SDA-Agar.

3. Anreicherung

   Bebrüte die Erstverdünnung in der nichtselektiven Eugon-LT-100-Bouillon unter den in der Norm angegebenen Bedingungen.

4. Isolierung

   Impfe aus der Kultur Sabouraud-Glucose-Agar mit Chloramphenicol und bebrüte ihn; beurteile das Wachstum hefeartiger Kolonien.

5. Identifizierung

   Identifiziere die verdächtigen Kolonien mit Identifizierungstests, u. a. durch Ausbringen auf Maismehl-Agar mit 1 % Polysorbat 80 und mikroskopische Beurteilung.

6. Ergebnis

   Gib die Anwesenheit oder das Fehlen von C. albicans in der untersuchten Probe des Erzeugnisses (1 g oder 1 ml) an, mit der Angabe der nachgewiesenen Neutralisation.

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Candida albicans ist ein opportunistischer Krankheitserreger — Arbeit unter den Bedingungen eines mikrobiologischen Labors, Autoklavieren der Kulturen
• Chloramphenicol im Nährmedium — das Einatmen des Pulvers und den Hautkontakt beim Einwiegen vermeiden
• Heiße Nährmedien nach dem Autoklavieren — Verbrennungsgefahr

Häufige Fragen