🔴 Campylobacter in Lebensmitteln
Kurz gefasst
Nachweis von Campylobacter spp. in Lebensmitteln und Futtermitteln durch selektive Anreicherung in Bolton- oder Preston-Bouillon, Isolierung auf mCCDA-Agar und biochemische/molekulare Bestätigung. Die Prüfung erfolgt nach PN-EN ISO 10272-1:2017; Anreicherungstemperatur: 37°C (4–6 h) → 41,5°C (44 h) — Verfahren A / 41,5°C (24 h) — Verfahren B. Das Verfahren umfasst 8 Schritte (insgesamt rund 5 Tage 20 Std. 35 Min.–7 Tage 22 Std. 35 Min.); eingesetzt wird sie unter anderem für: Geflügelfleischkontrolle — Broiler-Hühnerkadaver (Verordnung (EG) 2073/2005), Rohmilch- und unpasteurisierte Milchproduktuntersuchung, Geflügelschlachthof-Produktionslinien-Überwachung.
Auf einen Blick
- Norm: PN-EN ISO 10272-1:2017
- Kategorie: Mikrobiologie
- Verfahrensschritte: 8
- Gesamtdauer der Schritte: 5 Tage 20 Std. 35 Min.–7 Tage 22 Std. 35 Min.
- Anreicherungstemperatur: 37°C (4–6 h) → 41,5°C (44 h) — Verfahren A / 41,5°C (24 h) — Verfahren B
- Atmosphäre: Mikroaerophil: 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂
- Anreicherungsbouillon: Bolton Broth (Verfahren A) oder Preston Broth (Verfahren B)
Übersicht
Campylobacter ist die häufigste bakterielle Ursache für Gastroenteritis (Campylobacteriose) in der Europäischen Union — jährlich werden über 200.000 Fälle registriert. Die Hauptpathogene Arten sind C. jejuni (ca. 90% der Fälle) und C. coli (ca. 10%). Die Infektionsquelle ist meist Geflügelfleisch (insbesondere Hühnchen), unpasteurisierte Milch und kontaminiertes Wasser. Die infektiöse Dosis ist sehr niedrig — nur 500–800 Zellen reichen aus, um eine Erkrankung hervorzurufen.
Die Norm PN-EN ISO 10272-1 beschreibt ein horizontales Verfahren zum Nachweis thermophiler Campylobacter in Lebensmitteln, Futtermitteln und Umweltproben. Die Methode umfasst drei Nachweisverfahren, die an den Probentyp angepasst sind: Verfahren A (Bolton-Bouillon) — für Proben mit niedrigen Campylobacter-Zahlen und niedriger Begleitflora (gefrorene Lebensmittel, gekochte Lebensmittel); Verfahren B (Preston-Bouillon) — für Proben mit niedrigen Campylobacter-Zahlen, aber hoher Begleitflora (rohes Fleisch, Rohmilch); Verfahren C — Direktaussaat für Proben mit hohen Campylobacter-Zahlen.
Campylobacter sind mikroaerophile Bakterien — sie benötigen eine Atmosphäre mit reduziertem Sauerstoffgehalt (5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂) und erhöhter Inkubationstemperatur (41,5°C). Sie sind anspruchsvoll, empfindlich gegenüber Sauerstoff, Austrocknung und niedrigem pH-Wert, was ihre Kultivierung technisch anspruchsvoll macht.
Die Untersuchung auf Campylobacter-Vorhandensein ist gemäß Verordnung (EG) Nr. 2073/2005 für Broiler-Hühnerkadaver vorgeschrieben. Das Prozesshygienekriterium beträgt 1000 KBE/g im Kadaver nach dem Kühlen. Dies ist ein prioritärer Erreger in Lebensmittelsicherheits-Überwachungsprogrammen.
Prinzip der Methode
Die Methode beinhaltet selektive Anreicherung von Campylobacter in Bolton-Bouillon (37°C/4–6 h, dann 41,5°C/44 h) oder Preston-Bouillon (41,5°C/24 h) unter mikroaerophilen Bedingungen. Antibiotika in Bouillons (Cefoperazon, Trimethoprim, Vancomycin, Cycloheximid) hemmen die Begleitflora. Nach der Anreicherung wird die Probe auf selektives Festmedium ausgestrichen — mCCDA-Agar (modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar) und zweites selektives Medium. Aktivkohle in mCCDA adsorbiert toxische Metabolite. Campylobacter-Kolonien sind grau, flach, feucht, mit metallischem Glanz und Neigung zur Ausbreitung. Die Bestätigung umfasst biochemische Tests (Oxidase+, Katalase+, kein Wachstum bei 25°C) oder PCR.
Anwendungen
- Geflügelfleischkontrolle — Broiler-Hühnerkadaver (Verordnung (EG) 2073/2005)
- Rohmilch- und unpasteurisierte Milchproduktuntersuchung
- Geflügelschlachthof-Produktionslinien-Überwachung
- Trinkwasser- und Wasser für Lebensmittelzwecke-Kontrolle
- Verzehrfertige (RTE) Lebensmitteluntersuchung
- Epidemiologische Untersuchung bei Campylobacteriose-Ausbrüchen
- Salmonella/Campylobacter-Kontrollprogramm-Überwachung bei Geflügel
- Umweltprobenkontrolle in Fleischbetrieben
Schlüsselparameter
| Parameter | Wert |
|---|---|
| Anreicherungstemperatur | 37°C (4–6 h) → 41,5°C (44 h) — Verfahren A / 41,5°C (24 h) — Verfahren B |
| Atmosphäre | Mikroaerophil: 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂ |
| Anreicherungsbouillon | Bolton Broth (Verfahren A) oder Preston Broth (Verfahren B) |
| Isolierungsmedium | mCCDA (modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar) |
| Kolonietyp | Grau, flach, feucht, metallischer Glanz, ausbreitend |
| Bestätigung | Oxidase+, Katalase+, Morphologie (Spiralen), kein Wachstum 25°C oder PCR |
Norm
- Normnummer
- PN-EN ISO 10272-1:2017
- Titel (PL)
- Mikrobiologia łańcucha żywnościowego — Horyzontalna metoda wykrywania i oznaczania liczby Campylobacter spp. — Część 1: Metoda wykrywania
- Title (EN)
- Microbiology of the food chain — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. — Part 1: Detection method
Schritt-für-Schritt-Verfahren
-
Probenvorbereitung
Wiegen Sie 25 g (oder 10 g) Probe in einen Stomacher-Beutel. Fügen Sie 225 mL (oder 90 mL) Bolton-Bouillon mit Antibiotika-Supplement und lysiertem Pferdeblut (5%) hinzu.
-
Anreicherung — Phase I (Verfahren A)
Homogenisieren Sie und inkubieren Sie in mikroaerophiler Atmosphäre: zuerst 37 ± 1°C für 4–6 h (Resuscitationsphase), dann erhöhen Sie die Temperatur auf 41,5 ± 1°C.
-
Anreicherung — Phase II
Setzen Sie die Inkubation bei 41,5 ± 1°C in mikroaerophiler Atmosphäre für weitere 44 ± 4 h fort (insgesamt 48 h ab Beginn).
-
Isolierung auf mCCDA
Aus angereicherter Bouillon auf mCCDA-Platte und zweites selektives Medium ausstreichen. In mikroaerophiler Atmosphäre bei 41,5 ± 1°C für 44 ± 4 h inkubieren.
-
Kolonieablesung
Suchen Sie nach typischen Campylobacter-Kolonien — grau, flach, feucht, mit metallischem Glanz und Neigung zur Ausbreitung. Können auch punktförmig, rund, glänzende Kolonien sein.
-
Subkultur auf nicht-selektivem Agar
Wählen Sie min. 1 typische Kolonie von jeder Platte. Subkultur auf Columbia-Blutagar mit Schafsblut (5%). Inkubieren Sie 24–48 h bei 41,5°C in mikroaerober Atmosphäre.
-
Bestätigungstests
Führen Sie durch: Oxidase-Test (+), Katalase-Test (+), mikroskopisches Präparat (Spiralen), Wachstumstest bei 25°C (kein Wachstum) und unter aeroben Bedingungen bei 41,5°C (kein Wachstum). Oder bestätigen Sie durch PCR-Methode.
-
Interpretation und Berichterstattung
Berichten Sie Ergebnis als: "Campylobacter spp. nachgewiesen/nicht nachgewiesen in X g Probe". Wenn Speziesidentifikation durchgeführt wurde — geben Sie an: C. jejuni oder C. coli.
Erforderliche Geräte und Apparatur
| Gerät | Beispiel | Richtpreis |
|---|---|---|
| Inkubator mit mikroaerophiler Atmosphäre | Binder CB 60/160 mit Gaskontrolle, oder anaerobe Gefäße + Generatoren | 15.000–50.000 PLN |
| Mikroaerophile Atmosphärengeneratoren | Oxoid CampyGen, bioMérieux GENbag microaer, Anaerocult C | 200–500 PLN / 10 Stk. |
| Anaerobe Gefäße | Oxoid AnaeroJar 2,5 L, Merck Anaerocult | 500–1.500 PLN |
| Laminar-Flow-Werkbank Klasse II | Thermo Scientific MSC-Advantage, ESCO Airstream AC2 | 25.000–60.000 PLN |
| Stomacher / Homogenisator | Seward Stomacher 400 Circulator | 12.000–25.000 PLN |
| Optisches Mikroskop | Olympus CX23, Zeiss Primo Star, Nikon Eclipse Si | 5.000–20.000 PLN |
| Laborautoklav | Tuttnauer 2540M, Systec VX-65 | 15.000–45.000 PLN |
Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien
| Reagenz | CAS | Details |
|---|---|---|
| Bolton Broth | — | Selektive Anreicherungsbouillon: Fleischpepton, Lactose, Natriumpyruvat, α-Ketoglutarat, Natriummetabisulfit, Natriumcarbonat; 500 g Packung + Antibiotika-Supplemente |
| Bolton-Supplement (Antibiotika) | 62893-20-3 | Cefoperazon, Trimethoprim, Vancomycin, Cycloheximid; 10 Fläschchen Packung |
| mCCDA Agar (modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar) | 302-95-4 | Aktivkohle, Natriumdesoxycholat, Eisensulfat, Natriumpyruvat, Agar; 500 g Packung |
| mCCDA-Supplement (Cefoperazon + Amphotericin B) | 62893-20-3 | Selektive Antibiotika, 10 Fläschchen Packung |
| Lysiertes Pferdeblut (5%) | — | Zusatz zu Bolton-Bouillon — Wachstumsfaktor, neutralisiert Inhibitoren; 100 mL Packung |
| Oxidase-Reagenz (Kovács) | — | Für Bestätigungstest — Campylobacter oxidase-positiv; Streifen oder Tropfen |
| Gepuffertes Peptonwasser (BPW) | — | Zur Herstellung der Ausgangssuspension, 500 g Packung |
Arbeitsschutz und Sicherheit
- Campylobacter — BSL-2-Erreger mit sehr niedriger infektiöser Dosis (500 Zellen), vollständige PSA verwenden
- Arbeit ausschließlich in Laminar-Flow-Werkbank Klasse II — besondere Vorsicht beim Öffnen der Gefäße
- Mikroaerophile Atmosphäre — Gasgeneratoren können lokalen O₂-Abfall verursachen, Raumlüftung
- Gebrauchte Materialien vor Entsorgung autoklavieren (121°C/20 min)
- Antibiotika in Supplementen — Hautkontakt vermeiden, Handschuhe verwenden
- Oberflächendesinfektion mit 70% Ethanol oder 0,5% Natriumhypochlorit
Häufige Fragen
Welche Norm beschreibt diese Prüfung?
Die Prüfung erfolgt nach PN-EN ISO 10272-1:2017 — „Microbiology of the food chain — Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. — Part 1: Detection method“.
Wie funktioniert diese Methode?
Die Methode beinhaltet selektive Anreicherung von Campylobacter in Bolton-Bouillon (37°C/4–6 h, dann 41,5°C/44 h) oder Preston-Bouillon (41,5°C/24 h) unter mikroaerophilen Bedingungen. Antibiotika in Bouillons (Cefoperazon, Trimethoprim, Vancomycin, Cycloheximid) hemmen die Begleitflora.
Wie groß sind Messbereich und Genauigkeit?
Anreicherungstemperatur: 37°C (4–6 h) → 41,5°C (44 h) — Verfahren A / 41,5°C (24 h) — Verfahren B; Atmosphäre: Mikroaerophil: 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂; Anreicherungsbouillon: Bolton Broth (Verfahren A) oder Preston Broth (Verfahren B); Isolierungsmedium: mCCDA (modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar).
Wie lange dauert die Prüfung?
Die für die einzelnen Schritte angegebenen Zeiten ergeben zusammen rund 5 Tage 20 Std. 35 Min.–7 Tage 22 Std. 35 Min. Das Verfahren umfasst 8 Schritte.
Welche Geräte werden benötigt?
Inkubator mit mikroaerophiler Atmosphäre, Mikroaerophile Atmosphärengeneratoren, Anaerobe Gefäße, Laminar-Flow-Werkbank Klasse II, Stomacher / Homogenisator, Optisches Mikroskop, Laborautoklav. Richtpreis für das Kerngerät (Inkubator mit mikroaerophiler Atmosphäre): 15.000–50.000 PLN.
Wo wird diese Prüfung eingesetzt?
Geflügelfleischkontrolle — Broiler-Hühnerkadaver (Verordnung (EG) 2073/2005); Rohmilch- und unpasteurisierte Milchproduktuntersuchung; Geflügelschlachthof-Produktionslinien-Überwachung; Trinkwasser- und Wasser für Lebensmittelzwecke-Kontrolle; Verzehrfertige (RTE) Lebensmitteluntersuchung; Epidemiologische Untersuchung bei Campylobacteriose-Ausbrüchen; Salmonella/Campylobacter-Kontrollprogramm-Überwachung bei Geflügel; Umweltprobenkontrolle in Fleischbetrieben.
Welche Sicherheitsmaßnahmen gelten?
Campylobacter — BSL-2-Erreger mit sehr niedriger infektiöser Dosis (500 Zellen), vollständige PSA verwenden; Arbeit ausschließlich in Laminar-Flow-Werkbank Klasse II — besondere Vorsicht beim Öffnen der Gefäße; Mikroaerophile Atmosphäre — Gasgeneratoren können lokalen O₂-Abfall verursachen, Raumlüftung; Gebrauchte Materialien vor Entsorgung autoklavieren (121°C/20 min); Antibiotika in Supplementen — Hautkontakt vermeiden, Handschuhe verwenden; Oberflächendesinfektion mit 70% Ethanol oder 0,5% Natriumhypochlorit.
Welches Labor führt diese Prüfung durch?
Die Prüfung führen nach ISO/IEC 17025 akkreditierte Labore durch. Auf LabCoda finden Sie sie über die Normnummer PN-EN ISO 10272-1.