🍎 Bestimmung von Aflatoxin M1 in Milch (auch fettarmer und entrahmter) und Milchpulver — die Probe wird über eine Säule mit Antikörpern gegen Aflatoxin M1 gegeben, die Matrix mit Wasser ausgewaschen, das Toxin eluiert und mittels Hochleistungsflüssigchromatographie mit Fluoreszenzdetektion gegen Standards von 0,05–0,80 ng/ml bestimmt; Nachweisgrenze 0,005 µg/kg in Milch und 0,05 µg/kg in Milchpulver, Bestimmungsgrenze 0,01 und 0,1 µg/kg, PN-EN ISO 14501

Lebensmittelchemie PN-EN ISO 14501

Übersicht

WAS DIE NORM BESCHREIBT. Den Normtext lesen wir in der iTeh-Leseprobe der ISO 14501:2021 | IDF 171:2021 (englischer Text): Titelblatt, Inhaltsverzeichnis, Vorworte von ISO und IDF, Warnhinweise, Abschnitte 1–5 und Abschnitt 6 bis 6.10 (HPLC-Gerät) — die Leseprobe endet auf Seite 4. Den Rest der Geräte, die Durchführung (Vorbereitung von Milch und Milchpulver, Säule, Reinigung, HPLC-Bedingungen, Kalibrierkurve, Injektionsschema), Berechnungen, Präzision, Prüfbericht und Anhang A mit Ringversuchsergebnissen lesen wir nicht; die Titel kennen wir aus dem Inhaltsverzeichnis.

NACH DEM TEXT DER ISO 14501:2021. Die dritte Ausgabe erarbeitete ISO/TC 34 „Lebensmittel“, Unterkomitee SC 5 „Milch und Milcherzeugnisse“, mit dem Internationalen Milchwirtschaftsverband (IDF) in Zusammenarbeit mit CEN/TC 302 „Milch und Milcherzeugnisse — Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ (Wiener Vereinbarung); sie ersetzt die zweite Ausgabe ISO 14501 | IDF 171:2007. Wesentliche Änderung laut Vorwort: fehlende ausführliche Erläuterungen in einigen Abschnitten führten zu unterschiedlicher Ausführung des Verfahrens in den Laboratorien — sie wurden anhand der Praxis routinierter Anwender präzisiert. Inhalt: 8 Durchführung (8.2 Herstellung der Untersuchungsproben: Milch, Milchpulver; 8.3 Vorbereitung der Immunaffinitätssäule; 8.4 Reinigung; 8.5 HPLC: Pumpeneinstellung, chromatographische Leistung, Kalibrierkurve, Analyse der gereinigten Extrakte und Injektionsschema), 9 Berechnung und Angabe der Ergebnisse (9.1 Magermilch, 9.2 Magermilchpulver), 10 Präzision, 11 Prüfbericht, Anhang A (informativ) „Ergebnisse eines Ringversuchs“. Warnhinweise: Aflatoxine sind für den Menschen krebserzeugend (Stellungnahme IARC/WHO); das Laboratorium wird vor Tageslicht geschützt, Standardlösungen vor Licht (z. B. mit Aluminiumfolie); nicht säuregewaschenes Glas kann Verluste von Aflatoxin M1 aus wässrigen Lösungen verursachen — neues Glas wird mehrere Stunden in verdünnter Säure (z. B. H2SO4 2 mol/l) eingeweicht und bis pH 6–8 gespült; Abfälle und Glas werden nach IARC-Verfahren dekontaminiert. Anwendungsbereich (1): Bestimmung von Aflatoxin M1 in Milch und Milchpulver; niedrigste Validierungsstufe 0,08 µg/kg für Vollmilchpulver, d. h. 0,008 µg/l für rekonstituierte Milch; Nachweisgrenze 0,05 µg/kg für Milchpulver und 0,005 µg/kg für flüssige Milch; Bestimmungsgrenze 0,1 µg/kg für Milchpulver und 0,01 µg/kg für flüssige Milch; das Verfahren gilt auch für fettarme und entrahmte Milch sowie entsprechende Milchpulver. Normative Verweisungen hat die Norm nicht (2). Begriff (3.1): Gehalt an Aflatoxin M1 — Konzentration (µg/l) oder Massenanteil (µg/kg), bestimmt nach dem Verfahren dieser Norm. Prinzip (4): die Probe wird über eine Säule mit an einen Träger gebundenen Antikörpern gegeben; die Antikörper binden Aflatoxin M1 in einem Antigen-Antikörper-Komplex, die übrigen Bestandteile werden mit Wasser ausgewaschen, das Toxin eluiert, und seine Menge im Eluat wird mittels HPLC mit fluorimetrischer Detektion bestimmt. Reagenzien (5): Immunaffinitätssäule mit einer Kapazität von mindestens 100 ng Aflatoxin M1 (2 µg/l bei 50 ml Probe) und einer Wiederfindung von mindestens 80 % bei 4 ng (80 ng/l bei 50 ml) — regelmäßig, mindestens einmal je Säulencharge geprüft: Kapazität (2,0 ml Stammlösung 0,1 µg/ml auf 50 ml Wasser, über die Säule, Elution, HPLC) und Wiederfindung (0,8 ml Arbeitslösung 0,005 µg/ml auf 50 ml; Konzentration nicht unter 0,064 µg/l; auch Referenzmaterialien möglich); Acetonitril HPLC-Qualität, Lösungen 25 % und 10 % (V/V), entgast; Stickstoff; Kalibrierlösung etwa 10 µg/ml in Acetonitril, Konzentration aus der Extinktion im Maximum nahe 350 nm (Bereich 330–370 nm): ρ1 = A · M · 100 / (d · ε), M = 328 g/mol, ε = 1 985 m²/mol, d = 1 cm — oder ein zertifiziertes Referenzmaterial (z. B. BCR-423, 10 µg/ml in Chloroform); Stammlösung 0,1 µg/ml in Acetonitril 25 %, dicht verschlossen, in Folie, bei 1–5 °C im Dunkeln — mindestens zwei Monate haltbar, danach Konzentration vor Gebrauch prüfen; Arbeitslösungen 0,005 µg/ml in Wasser–Acetonitril 9 : 1, am Tag der Verwendung hergestellt, daraus z. B. 0,05; 0,10; 0,20; 0,40 und 0,80 ng/ml (andere Verdünnungen je nach Probenschleife; bessere Peakform kann beim Verdünnen mit einem Gemisch in Eluentenzusammensetzung erreicht werden). Geräte (6, bis 6.10): Einwegspritzen 10 und 50 ml; Vakuumsystem (Büchnerkolben, Vac-Elut-System oder Schlauchpumpe); Zentrifuge ≥ 2000 g; Pipetten 1, 2 und 50 ml; Bechergläser 250 ml; Messkolben 100 ml; Wasserbäder 30 ± 2 °C, 35–37 °C und 50 ± 5 °C; Filterpapier Whatman Nr. 42; graduierte konische Glasröhrchen 5, 10 und 20 ml; HPLC mit pulsationsfreier Pumpe, Durchfluss etwa 1 ml/min, Injektion 20–500 µl.

STATUS (Stand 03.10.2026). In der PKN-Suche (Suchbegriff „14501“, 03.10.2026) tragen PN-EN ISO 14501:2021-10 in polnischer und englischer Fassung („Wprowadza: EN ISO 14501:2021 [IDT], ISO 14501:2021 [IDT]“) keinen Rückzugsvermerk; PN-EN ISO 14501:2009 (polnische Fassung) — „Wycofana i zastąpiona przez PN-EN ISO 14501:2021-10 – wersja angielska“, und frühere Ausgaben (2007, 2002) — zurückgezogen und durch spätere ersetzt; die übrigen Ergebnisse (PN-EN 14501 zu Abschlüssen und Jalousien, PN-B-14501 zu Mörteln) betreffen andere Bereiche. Karte der polnischen Fassung: Veröffentlichungsdatum 12.01.2023, 16 Seiten, KT 35 Mleka i Przetworów Mlecznych, ICS 67.100.10, „Zastępuje PN-EN ISO 14501:2009 – wersja polska“, ohne Rückzugsvermerk. Im iTeh-Katalog (gelesen 03.10.2026) hat ISO 14501:2021 den Status „Published“, Stufe 90.93 (Internationale Norm bestätigt).

WIE VIELE LABORATORIEN UND IN WELCHER FORM (Kopie der Datenbank der Akkreditierungsumfänge, Daten bis 17.09.2026, gelesen 03.10.2026). Die Nummer 14501 steht in 5 Datensätzen bei 4 Laboratorien: AB 400, AB 451, AB 465 (2), AB 515. In den aktuellen PCA-Dokumenten (gelesen 03.10.2026; AB 451 Ausgabe Nr. 26 vom 24.11.2025, AB 465 Ausgabe Nr. 31 vom 23.12.2025, AB 400 Ausgabe Nr. 37 vom 07.08.2026, AB 515 Ausgabe Nr. 30 vom 12.08.2026) steht die Nummer in 5 Zeilen bei denselben 4 Laboratorien; in jedem Dokument entspricht die Zahl der Seitenmarken der Zahl der PDF-Seiten, ohne Wiederholungen; die Durchsuchung aller am 03.10.2026 aus dem BIP heruntergeladenen PCA-Dokumente ergab keine Laboratorien außerhalb der Datenbankkopie. Form „PN-EN ISO 14501:2021-10“ (AB 451, AB 515), „PN-EN ISO 14501“ ohne Jahr (AB 400) und „PN-EN ISO 14501“ nach „Procedury badawcze“ (AB 465 — Lebensmittel; bei Futtermitteln zusätzlich mit PN-EN 15792). Keine dieser Positionen ist ausgesetzt. Der Reiter „Laboratorien“ (Suchbegriff „PN-EN ISO 14501“) zeigt alle 4 Laboratorien — geprüft durch eine Abfrage des Reiters auf dem Produktivserver labcoda.pl am 03.10.2026.

WAS DIE LABORATORIEN PRÜFEN (Positionen in PCA). Gegenstand: Milch, Kondensmilch, Milchpulver, auch für Säuglinge und Kleinkinder (AB 515); Lebensmittel auf Milchbasis, auch für Kleinkinder und Säuglinge, Milch (AB 451); Lebensmittel (AB 400); Lebensmittel und Futtermittel (AB 465). Merkmal: Gehalt an Aflatoxin M1 (AB 400, AB 451, AB 515), Gehalt an Mykotoxinen (AB 465). Bereiche: (0,004–0,32) µg/l oder µg/kg (AB 515), (0,017–0,24) µg/kg (AB 451); AB 400 und AB 465 nennen keinen Bereich. Technik: HPLC mit Fluoreszenzdetektion; bei Futtermitteln bei AB 465 — HPLC mit spektrophotometrischer und/oder Fluoreszenzdetektion.

WO LEICHT EIN SCHEINBAR RICHTIGES ERGEBNIS ENTSTEHT. Bei der unteren Grenze: nach der Norm beträgt die Nachweisgrenze in flüssiger Milch 0,005 µg/kg und die Bestimmungsgrenze 0,01 µg/kg (1) — der Bereich von AB 515 beginnt bei 0,004 µg/l oder µg/kg, unter beiden Werten; die niedrigste Validierungsstufe der Norm ist 0,008 µg/l für rekonstituierte Milch. Bei der Matrix: Anwendungsbereich der Norm sind Milch und Milchpulver (1); AB 451 wendet sie auf Erzeugnisse auf Milchbasis an, AB 465 auf Lebensmittel und Futtermittel mit dem allgemeinen Merkmal „Gehalt an Mykotoxinen“ — bei Futtermitteln zusammen mit PN-EN 15792:2012, einer Norm zu Zearalenon in Futtermitteln (PKN-Karte: Veröffentlichung 26.03.2012, KT 40 Pasz, ohne Rückzugsvermerk, gelesen 03.10.2026), sodass beide Normen dort verschiedene Toxine aufteilen und keine Alternativen sind. Beim Glas: nicht säuregewaschenes Glas adsorbiert Aflatoxin M1 aus wässrigen Lösungen (Warnhinweis 3). Bei der Säule: jede Säulencharge muss Kapazität ≥ 100 ng und Wiederfindung ≥ 80 % zeigen (5.1) — deshalb verlangt die Norm die Prüfung jeder Säulencharge gesondert, vor der Analyse der Proben. Bei den Standards: die Konzentration der Kalibrierlösung wird spektrophotometrisch bestimmt, eine Stammlösung älter als zwei Monate vor Gebrauch geprüft (5.4.1, 5.4.2). Bei der Einheit: das Ergebnis in µg/l (flüssige Milch) und in µg/kg (Milchpulver) sind unterschiedliche Größen (3.1) — AB 515 gibt den Bereich „µg/l oder µg/kg“ mit einem Zahlenpaar an.

WAS WIR NICHT ANGEBEN. Vorbereitung der Milch- und Milchpulverproben, HPLC-Bedingungen, Berechnungsformeln, Präzisionsdaten und Ringversuchsergebnisse geben wir nicht wieder — sie liegen außerhalb der Leseprobe. Höchstgehalte für Aflatoxin M1 aus Rechtsvorschriften geben wir nicht an.

Prinzip der Methode

Eine Probe Milch (oder rekonstituiertes Milchpulver) wird über eine Säule mit Antikörpern gegen Aflatoxin M1 gegeben; das Toxin bindet in einem Antigen-Antikörper-Komplex, übrige Bestandteile werden mit Wasser ausgewaschen. Aflatoxin M1 wird eluiert und mittels Hochleistungsflüssigchromatographie mit Fluoreszenzdetektion gegen Standardlösungen (z. B. 0,05–0,80 ng/ml) bestimmt, deren Konzentration spektrophotometrisch bei etwa 350 nm ermittelt wird.

Anwendungen

• Aflatoxin M1 in Milch (Voll-, fettarme, Magermilch) und Milchpulver; BG 0,01 µg/kg und 0,1 µg/kg (1)
• Milch, Kondens- und Trockenmilch, auch für Säuglinge und Kleinkinder, Erzeugnisse auf Milchbasis, Lebensmittel und Futtermittel — Positionen in den Akkreditierungsumfängen von 4 Laboratorien in PCA

Schlüsselparameter

Norm

Normnummer

PN-EN ISO 14501:2021-10

Titel (PL)

Mleko i mleko w proszku — Oznaczanie zawartości aflatoksyny M1 — Oczyszczanie za pomocą chromatografii powinowactwa immunologicznego i oznaczanie za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej

Title (EN)

Milk and milk powder — Determination of aflatoxin M1 content — Clean-up by immunoaffinity chromatography and determination by high-performance liquid chromatography

Schritt-für-Schritt-Verfahren

1. Vorbereitung von Laboratorium und Glas

   Schutz vor Tageslicht, säuregewaschenes Glas (Warnhinweise 2, 3). PN-EN ISO 14501:2021-10 ohne Rückzugsvermerk im PKN (03.10.2026).

2. Säulenprüfung

   Kapazität (2,0 ml Lösung 0,1 µg/ml in 50 ml) und Wiederfindung (0,8 ml Lösung 0,005 µg/ml in 50 ml, ≥ 0,064 µg/l) für jede Charge (5.1).

3. Standards

   Konzentration der Kalibrierlösung aus der Extinktion bei etwa 350 nm; Arbeitslösungen 0,05–0,80 ng/ml am Tag der Verwendung (5.4).

4. Reinigung

   Probe über die Säule, Waschen mit Wasser, Elution von Aflatoxin M1 (4; Einzelheiten in Abschnitt 8, außerhalb der Leseprobe).

5. HPLC und Ergebnis

   Fluoreszenzdetektion, Kalibrierkurve; Ergebnis in µg/l oder µg/kg (3.1, 4; Berechnungen in Abschnitt 9, außerhalb der Leseprobe).

Erforderliche Geräte und Apparatur

Reagenzien, Nährmedien und Verbrauchsmaterialien

Arbeitsschutz und Sicherheit

• Aflatoxine sind für den Menschen krebserzeugend — Arbeit mit Standardlösungen in einem festgelegten Bereich, Dekontamination von Abfällen und Glas nach IARC-Verfahren (Warnhinweise 1, 4)
• Acetonitril — entzündbar und giftig; Arbeit unter dem Abzug

Häufige Fragen