Bacillus paralicheniformis DSM 33902 i Bacillus subtilis DSM 33903 dla przeżuwaczy mlecznych (4b1896) do 1 stycznia 2036 r.: liczenie na agarze tryptonowo-sojowym wg EN 15784, 3,8 × 10⁸ jtk/kg paszy lub 7,4 × 10⁷ jtk/l wody i 9,6 × 10⁹ jtk/zwierzę/dzień; MIC erytromycyny > 16 mg/l bez nabytych genów
Rozporządzenie wykonawcze Komisji (UE) 2025/2511, opublikowane 12 grudnia 2025 r., zezwala do 1 stycznia 2036 r. na preparat przetrwalników dwóch szczepów Bacillus (posiadacz: Chr. Hansen A/S, produkt Bovacillus™) jako stabilizator flory jelitowej dla przeżuwaczy wykorzystywanych do produkcji mleka lub w celach reprodukcyjnych, także w wodzie do pojenia. EFSA w opinii z 9 kwietnia 2025 r. uznała go za bezpieczny i potencjalnie skuteczny u krów mlecznych; nie drażni skóry ani oczu, ale uczula skórę i drogi oddechowe. W wodzie EFSA zaproponowała dawkę na zwierzę, bo u przeżuwaczy nie da się ustalić stałego stosunku paszy do wody — akt podaje i stężenie w wodzie, i dawkę dzienną.
- Metody z załącznika: liczenie w dodatku, mieszance paszowej i wodzie do pojenia — posiew powierzchniowy na agarze tryptonowo-sojowym (EN 15784); identyfikacja — sekwencjonowanie DNA lub PFGE (CEN/TS 17697). Dodatek: co najmniej 3,2 × 10¹⁰ jtk/g Bacillus spp. w stosunku 1:1; minimum 3,8 × 10⁸ jtk/kg mieszanki pełnoporcjowej lub 7,4 × 10⁷ jtk/l wody, a w wodzie dawka co najmniej 9,6 × 10⁹ jtk/zwierzę/dzień. Wymagane informacje o stabilności przy obróbce cieplnej i w wodzie; ochrona dróg oddechowych i skóry.
- Szczepy: B. paralicheniformis z gleby (ANI 98,6 % ze szczepem typowym KJ-16T; przetrwalniki pasteryzowane), B. subtilis z zacieru sojowego (ANI 97,7 % z B. subtilis 168T). MIC dla B. paralicheniformis: chloramfenikol i klindamycyna o jedno rozcieńczenie ponad wartość graniczną, erytromycyna > 16 wobec 4 mg/l; po analizie trafień w ResFinder i NCBI (cztery i dwa) nie znaleziono nabytych genów oporności. Test cytotoksyczności na komórkach Vero — bez lizy; supernatant B. paralicheniformis nie hamował szczepów referencyjnych, co wyklucza bacytracynę w ilościach budzących obawy.
- Dwie postacie: Bovacillus™ 10 (nośnik węglan wapnia, do paszy) — średnio 4,6 × 10¹⁰ jtk/g, arsen 0,48, ołów 0,77, kadm 0,13 mg/kg, pylność 1886 mg/m³ (943–2480); Bovacillus™ WS (maltodekstryna, do wody) — 4,3 × 10¹⁰ jtk/g, pylność 1149 mg/m³. Granulowanie w 75, 85 i 95 °C przez 30 s — straty < 0,5 log; CV jednorodności w paszy granulowanej w 85 °C — 15 %; w wodzie 25 °C przez 48 h bez strat. Drażnienie: OECD TG 404 i TG 438 dla postaci 10, dla WS wniosek przez analogię.
- Skuteczność: trzy próby na krowach (Holstein-Friesian i krzyżówki ze szwedzką czerwoną, 12–15 tygodni, 68–76 krów) — w próbie 1 lepsza efektywność ECM (1,72 wobec 1,67), w próbie 2 wyższa wydajność mleka (41,3 wobec 40,1 kg/d) i efektywność paszy (1,52 wobec 1,48), w próbie 3 efektywność paszy 1,59 wobec 1,54; bez wpływu na skład mleka. Istotność przyjęto przy p < 0,10, a wyliczone stężenia w paszy wyniosły 3,08–3,41 × 10⁸ jtk/kg przy zamierzonych 3,8 × 10⁸.