25-Hydroksycholekalcyferol z drożdży Saccharomyces cerevisiae dla ryb i pozostałych gatunków: łososiowate 0,8 mg/kg, trzy metody od UPLC-UV po HPLC-MS/MS, a w akcie preparat „o maksymalnej zawartości 1,25 %”, choć EFSA opisuje minimum 1,25 %
Rozporządzenie wykonawcze Komisji (UE) 2025/2491, opublikowane 11 grudnia 2025 r., dopuszcza do 31 grudnia 2035 r. preparat 25-hydroksycholekalcyferolu (witamina D) wytwarzanego przy użyciu Saccharomyces cerevisiae CBS 146008 dla wszystkich gatunków zwierząt z wyjątkiem drobiu, świń i przeżuwaczy, dla których dodatek jest już dopuszczony. Prekursor 5,7,24-cholestatrienol powstaje w drożdżach, po ekstrakcji jest chemicznie przekształcany w 25-hydroksy-prowitaminę D3, a ta fotochemicznie w 25-hydroksycholekalcyferol.
- Metody z załącznika: w dodatku ultrasprawna chromatografia cieczowa z detekcją spektrofotometryczną (UPLC-UV), w premiksach HPLC-UV, a w mieszankach paszowych i nisko zagęszczonych premiksach HPLC z tandemową spektrometrią mas (HPLC-MS/MS). Kryteria czystości: 25-hydroksycholekalcyferol > 94 %, pozostałe pochodne steroli ≤ 1 % każda, erytrozyna < 5 mg/kg.
- Najwyższe zawartości 25-OH-D3: łososiowate 0,800 mg/kg, inne ryby i ryby ozdobne 0,075 mg/kg, pozostałe gatunki 0,050 mg/kg paszy pełnoporcjowej. Łącznie z witaminą D3 nie więcej niż 1,500 mg (odpowiednik 60 000 IU) u łososiowatych, 0,075 mg (3000 IU) u innych ryb i 0,050 mg (2000 IU) u pozostałych zwierząt; przelicznik z aktu: 40 IU = 0,001 mg cholekalcyferolu.
- Opis preparatu: wszystkie trzy wersje językowe aktu (PL, EN, DE) mówią o preparacie „o maksymalnej zawartości 1,25 %” 25-hydroksycholekalcyferolu, a opinia EFSA e9479 o minimalnej zawartości 1,25 % przewidzianej w obecnym zezwoleniu; w 5 partiach EFSA odnotowała 1,32–1,37 %. Sprostowania tego aktu w CELLAR nie ma. Substancja czynna w 5 partiach: 99,7–100 %, erytrozyny nie wykryto (granica oznaczalności 0,08 mg/kg); w 3 partiach nie wykryto żywych komórek ani rekombinowanego DNA szczepu produkcyjnego.
- Badanie tolerancji na pstrągach tęczowych: 640 ryb o masie początkowej 57,6 g w 16 zbiornikach systemu recyrkulacyjnego, 91 dni, pasza z 0, 0,08, 0,80 i 8,00 mg/kg; w analizie oznaczono 0,680–0,693 mg/kg dla dawki docelowej i 6,54–7,19 mg/kg dla dziesięciokrotnej. EFSA uznała 0,8 mg/kg za bezpieczne z marginesem 10. Dodatek nie drażni skóry i oczu; o uczulaniu i działaniu na drogi oddechowe EFSA nie rozstrzygnęła — wymagane są środki ochrony dróg oddechowych i skóry.